اسپلنوسیت ها در تحقیقات ایمونولوژیکی: در سراسر گونه ها و انزوا ، انجماد ، مراحل ذوب

کلمات کلیدی:اسپلنوسیت ها (اسپا) ؛ Splenocytes Cynomolgus Monkey ؛ اسپلنوسیت های میمون Rhesus ؛ اسپلنوسیت های سگ ؛ اسپلنوسیت های سگ ؛ اسپلنوسیت های موش ؛ اسپلنوسیت های موش ؛ اسپلنوسیت های موش ؛ اسپلنوسیت های خرگوش ؛ انزوا اسپلنوسیت ؛ یخ زدگی اسپلنوسیت ها ؛ اسپلنوسیت های ذوب کردن

محصول iphase

Splenocytes (SPL)یک جمعیت ناهمگن از سلولهای ایمنی جدا شده از طحال ، یک عضو حیاتی است که در فیلتر کردن خون ، نصب پاسخ های ایمنی و حفظ هموستاز وجود دارد. این سلولها شامل لنفوسیت ها (سلولهای T ، سلولهای B) ، ماکروفاژها ، سلولهای دندریتیک و سلولهای قاتل طبیعی (NK) هستند که همگی در ایمنی سازگار و ذاتی نقش مهمی دارند. اسپلنوسیت ها به طور گسترده در تحقیقات بالینی و ترجمه برای مطالعه عملکرد سیستم ایمنی ، توسعه واکسن ، بیماری های خود ایمنی و ایمونوتراپی سرطان مورد استفاده قرار می گیرند.

نقش و ترکیب اسپلنوسیت ها (SPL)

در داخل طحال ، اسپلنوسیت ها در مناطق مجزا زندگی می کنند: خمیر قرمز ، که خون را فیلتر می کند و گلبول های قرمز قرمز را بازیافت می کند ، و خمیر سفید ، که در آن پاسخ های ایمنی آغاز می شود. خمیر سفید در مناطق سلول T و فولیکولهای سلولی B سازماندهی می شود و تعامل بین آنتی ژن - سلولهای ارائه دهنده و لنفوسیت ها را تسهیل می کند. این معماری منحصر به فرد ، اسپلنوسیت ها (SPL) را به ابزاری قدرتمند در سنجش های ایمونولوژیکی مانند ELISPOT ، فلوسیتومتری جریان و واکنش های لنفوسیت های مختلط تبدیل می کند.

گونه ها - اسپلنوسیت های خاص (SPL)

-اسپلنوسیت های میمون سنومولگوس:اسپلنوسیت های میمون Cynomolgus در تحقیقات بالینی مورد استفاده قرار می گیرند زیرا آنها از نزدیک پاسخ های ایمنی انسان را تقلید می کنند ، و اسپلنوسیت های میمون سینومولگوس را برای مطالعات ترجمه ایده آل می کنند.

-اسپلنوسیت های میمون روسوس:اسپلنوسیت های میمون روسوس به همین ترتیب برای شباهت های ایمونولوژیک نزدیک خود با انسان ارزش دارند. مطالعات با استفاده از اسپلنوسیت های میمون Rhesus به ایجاد شکاف بین مدل های حیوانات و کاربردهای بالینی کمک می کند.

-اسپلنوسیت های سگ / اسپلنوسیت های سگ:در تحقیقات دامپزشکی ، اسپلنوسیت های سگ (یا اسپلنوسیت های سگ) برای مطالعه اختلالات ایمنی در سگها و مقایسه با پاسخ ایمنی انسان استفاده می شود.

-اسپلنوسیتهای خرگوش: اسپلنوسیت های خرگوش در مطالعات مربوط به تولید آنتی بادی و توسعه واکسن مهم هستند. اسپلنوسیت های خرگوش به افشای جزئیاتی که ممکن است با اسپلنوسیت های موش یا اسپلنوسیت های موش متفاوت باشد ، کمک می کند.

-اسپلنوسیت های موش / اسپلنوسیت های موش:اسپلنوسیت های موش یکی از پراکنده ترین اسپلنوسیت ها (SPL) در ایمونولوژی است. پروتکل های اسپلنوسیت های جداسازی از موش ها به خوبی تثبیت شده اند ، و هر دو اسپلنوسیت های موش و اسپلنوسیت های موش برای فلوسیتومتری جریان ، ELISPOT و سایر سنجش های عملکردی استفاده می شوند.

-اسپلنوسیتهای موش صحرایی:اسپلنوسیت های موش یک مدل مکمل برای ایمنی سلولی و مطالعات واکسن ارائه می دهند. اسپلنوسیت های موش اغلب با اسپلنوسیت های موش برای درک تفاوت های بین گونه ها مقایسه می شوند.

انزوای اسپلنوسیت

انزوای اسپلنوسیتآیا فرآیند استخراج سلولهای ایمنی از طحال است که در کاربردهای مختلف تحقیقاتی مانند فلوسیتومتری جریان ، سنجش تولید سیتوکین یا واکنش لنفوسیتهای مختلط مورد استفاده قرار می گیرد.

طحال در شرایط آسپتیک ، زمین در محلول جداسازی برداشته شد و به یک لوله استریل حاوی محیط RPMI 1640 منتقل شد. لایه لکوسیت پس از سانتریفیوژ با دقت جمع آوری شد. سلولها با محیط RPMI 1640 شسته شدند ، سانتریفیوژ شده و مایع رویی دور ریخته شد. این مرحله شستشو 1 - 2 بار قبل از استفاده از سلولهای جدا شده برای آزمایش های بیشتر تکرار شد.

شکافهای یخ زده

شکافهای یخ زدهیک گام مهم برای حفظ سلول ها برای استفاده در آینده است. محافظت از CryOpResing به محققان اجازه می دهد تا اسپلنوسیت ها را برای دوره های طولانی و بدون به خطر انداختن زنده ماندن یا عملکرد خود ذخیره کنند.

مایع رویی تعلیق سلول سانتریفیوژ چاه از مرحله جداسازی دور ریخته می شود و غلظت سلول در محیط انجماد رقیق می شود. به هر لوله انجماد ، یک مقدار خاص اضافه کرده و به یک ظرف انجماد منتقل می شود و اطمینان حاصل می شود که سلول ها در حالت تعلیق باقی می مانند. ظروف انجماد را به سرعت در فریزر - 80 درجه سانتیگراد یخ بزنید. انتقال به کانتینر فریزر 150 درجه سانتیگراد (یا مخزن نیتروژن مایع) برای ذخیره طولانی - مدت زمان.

اسپلنوسیت های ذوب کردن

اسپلنوسیت های ذوب کردنباید با دقت انجام شود تا از زنده ماندن و عملکرد بالای سلول پس از حفاظت از سلولها اطمینان حاصل شود. فرآیند ذوب به طور معمول به سرعت برای به حداقل رساندن اثرات مضر DMSO و تشکیل کریستال یخ است.

کرایوتوب ها به یک حمام آب 37 درجه سانتیگراد منتقل می شوند و ذوب می شوند تا فقط کریستال های یخ ریز در لوله ها باقی بمانند. 0.5 - 1 میلی لیتر محیط کشت سلولی را به لوله یخ زده اضافه کنید ، مجدداً تعلیق کنید و سیستم تعلیق را به یک لوله 15 میلی لیتری پر از محیط کشت سلول منتقل کنید. سانتریفیوژ ، مایع رویی را برداشته و به لوله ضربه بزنید تا ترتیب سلول را شل کنید. 1 میلی لیتر محیط کشت سلولی را اضافه کنید ، با یک پیپت ضربه بزنید و دوباره تعلیق کنید ، متوسط ​​را به حجم 15 میلی لیتر اضافه کنید. سانتریفیوژ ، DE - supernatize ، 1 میلی لیتر محیط کشت سلولی را اضافه کنید و با توجه به غلظت سلول مورد انتظار ، محیط اضافه کنید. سلول ها را در یک دستگاه جوجه کشی CO2 قرار داده و به مدت 1 ساعت با فاصله کمی در درب انکوبه کنید. در پایان جوجه کشی ، دوباره به حالت تعلیق درآمده و به مدت 1 دقیقه ترک کنید تا بقایای سلولی جمع شده رسوب شود. سیستم تعلیق سلول بدون بارش با دقت به یک لوله 15 میلی لیتری جدید منتقل شد. سلولها برای تعیین فعالیت سلولی شمارش شدند.

پایان

اسپلنوسیت ها با ترکیب متنوع و نقش محوری در پاسخ های ایمنی ، ابزارهای ارزشمندی در تحقیقات ایمونولوژیکی هستند. چه از جوندگان ، نخبگان ، یا گونه های دیگر مانند خرگوش و سگ ها ، اسپلنوسیت ها مطالعات انتقادی در عملکرد سیستم ایمنی ، مکانیسم های بیماری ، توسعه واکسن و ایمونوتراپی سرطان را تسهیل می کند. فرآیندهای انزوا ، انجماد و ذوب کردن برای حفظ یکپارچگی و زنده ماندن آنها ضروری است و محققان را قادر می سازد تا پویایی سلولی را در مدلهای مختلف کشف کنند. با عمیق تر شدن درک ما از ایمونولوژی ، استفاده از اسپلنوسیت ها همچنان در ایجاد شکاف بین مطالعات بالینی و کاربردهای بالینی مؤثر خواهد بود و از پیشرفت در داروهای انسانی و دامپزشکی اطمینان حاصل می شود.