Pernasolut immunologisessa tutkimuksessa: lajien ja eristyksen, jäätymisen, sulatusvaiheiden välillä

Avainsanat:Pernasolut (SPLS); Cynomolgus -apinan pernasolut; Rhesus -apinan pernasolut; Koiran pernasolut; Koiran pernasolut; Rotan pernasolut; Hiiren pernasolut; Hiiret pernasolut; Kanin pernasolut; Pernasolujen eristäminen; Jäädyttävät pernasolut; Sulaa pernasolut

Iphase -tuote

Pernasolut (SPLS)ovat pernasta eristetty immuunisolujen heterogeeninen populaatio, elintärkeä elin, joka osallistuu veren suodattamiseen, immuunivasteiden kiinnittämiseen ja homeostaasin ylläpitämiseen. Nämä solut sisältävät lymfosyytit (T -solut, B -solut), makrofagit, dendriittisolut ja luonnolliset tappaja (NK) -solut, joilla kaikilla on kriittinen rooli adaptiivisessa ja synnynnäisessä immuniteetissa. Pernasoluja käytetään laajasti prekliinisessä ja translaatiotutkimuksessa immuunitoiminnan, rokotteen kehityksen, autoimmuunisairauksien ja syövän immunoterapian tutkimiseksi.

Pernasolujen rooli ja koostumus (SPLS)

Pernaan pernasolut sijaitsevat erillisillä alueilla: punainen massa, joka suodattaa verta ja kierrättää vanhoja punasoluja, ja valkoisen massan, jossa immuunivasteet aloitetaan. Valkoinen massa on järjestetty T -matkavyöhykkeisiin ja B -solurakkuloihin, mikä helpottaa antigeenin ja lymfosyyttien välisiä vuorovaikutuksia. Tämä ainutlaatuinen arkkitehtuuri tekee pernasoluista (SPL) tehokkaan työkalun immunologisissa määrityksissä, kuten ELISPOT, virtaussytometria ja sekoitetut lymfosyyttireaktiot.

Lajit - spesifiset pernasolut (SPLS)

-Cynomolgus -apinan pernasolut:Cynomolgus -apinan splenosyyttejä käytetään prekliinisessä tutkimuksessa, koska ne jäljittelevät tarkemmin ihmisen immuunivasteita, mikä tekee Cynomolgus -apinan pernasoluista ihanteellisia translaatiotutkimuksiin.

-Rhesus -apinan pernasolut:Rhesus -apinan pernasolut arvostetaan samalla tavalla niiden läheisten immunologisten yhtäläisyyksien suhteen ihmisiin. Rhesus -apinan pernasolut käyttävät tutkimukset auttavat kaventamaan eläinmallien ja kliinisten sovellusten välistä kuilua.

-Koiran pernasolut / koiran pernasolut:Eläinlääketieteellisessä tutkimuksessa koiran pernasoluja (tai koiran pernasoluja) käytetään tutkimaan immuunihäiriöitä koirissa ja vertailuun ihmisen immuunivasteisiin.

-Kanin pernasolut: Kanin pernasolut ovat tärkeitä vasta -aineiden tuotantoa ja rokotteen kehittämistä koskevissa tutkimuksissa. Kanin pernasolut auttavat paljastamaan yksityiskohdat, jotka voivat poiketa hiiren pernasoluista tai rotan pernasoluista.

-Hiiren pernasolut / hiiret pernasolut:Hiiren pernasolut ovat yksi yleisimmin tutkituista pernasoluista (SPL) immunologiassa. Hiirien eristämisprotokollia varten on vakiintuneita, ja sekä hiiren pernasoluja että hiiriä pernasoluja käytetään virtaussytometriaan, ELISPOTiin ja muihin funktionaalisiin määrityksiin.

-Rotan pernasolut:Rotan pernasolut tarjoavat komplementaarisen mallin immunotoksikologialle ja rokotetutkimuksille. Rotan pernasoluja verrataan usein hiiren pernasoluihin lajien välisten erojen ymmärtämiseksi.

Pernasolujen eristäminen

Pernasolujen eristäminenon prosessi immuunisolujen uuttaminen pernasta, jota käytetään erilaisissa tutkimussovelluksissa, kuten virtaussytometria, sytokiinien tuotantomääritykset tai sekoitetut lymfosyyttireaktiot.

Perna poistettiin aseptisissa olosuhteissa, maa eristysliuos ja siirrettiin steriiliin putkeen, joka sisälsi RPMI 1640 -väliaineen. Leukosyyttikerros kerättiin huolellisesti sentrifugoinnin jälkeen. Solut pestiin RPMI 1640 -väliaineella, sentrifugoitiin ja supernatantti heitettiin pois. Tämä pesuvaihe toistettiin 1 - 2 kertaa ennen eristettyjä soluja käytettiin lisäkokeisiin.

Pernasolut

Pernasoluton ratkaiseva vaihe solujen säilyttämisessä tulevaa käyttöä varten. Kylmäsäilytys antaa tutkijoille mahdollisuuden tallentaa pernasoluja pitkään vaarantamatta niiden elinkelpoisuutta tai toiminnallisuutta.

Kaivojen sentrifugoitujen solususpension supernatantti eristysvaiheesta hylätään ja solukonsentraatio laimennettiin jäätymisväliaineeseen. Lisää alikvootti jokaiseen jäätymisputkeen ja siirrä jäätymisastiaan varmistaen, että solut pysyvät suspensiossa. Jäädyttää jäätymisastiat nopeasti - 80 ° C -pakastimessa. Siirrä - 150 ° C: n pakastinsäiliöön (tai nestemäiseen typpisäiliöön) pitkään - termin varastointiin.

Sulaa pernasolut

Sulaa pernasoluton tehtävä huolellisesti varmistaaksesi korkean solujen elinkykyisyyden ja toiminnallisuuden kylmäsäilytyksen jälkeen. Sulatusprosessi on tyypillisesti nopea minimoimaan DMSO: n ja jääkiteiden muodostumisen vahingolliset vaikutukset.

Kryotutkat siirretään 37 ° C: n vesihauteeseen ja sulatetaan, kunnes putkiin pysyivät vain hienoja jääkiteitä. Lisää 0,5 - 1 ml soluviljelyalusta jäädytettyyn putkeen, suspendi ja siirrä suspensio 15 ml: n putkeen, joka on täytetty soluviljelyalustalla. Sentrifugoi, poista supernatantti ja napauta putkea löysäämään solujärjestely. Lisää 1 ml soluviljelyalusta, puhalta ja suspendoi uudelleen pipetin kanssa, lisää väliaine 15 ml: n tilavuuteen. sentrifugi, de - supernatize, lisää 1 ml soluviljelyalusta, lisäämällä väliainetta odotetun solukonsentraation mukaan. Aseta solut CO2 -inkubaattoriin ja inkuboi 1H: n kohdalla pienellä raolla kannen kanssa. Inkubaation lopussa suspendoi uudelleen ja jätä 1 minuutin ajan, jotta aggregoituneet solujätteet voivat saostua. Solususpensio ilman sadetta siirrettiin huolellisesti uuteen 15 ml: n putkeen. Solut laskettiin solun aktiivisuuden määrittämiseksi.

Johtopäätös

Pernasolut, joilla on monipuolinen koostumus ja keskeinen rooli immuunivasteissa, ovat korvaamattomia työkaluja immunologisessa tutkimuksessa. Pohjaiset, kädellisistä tai muista lajeista, kuten kanit ja koirat, johdettuna pernasoluista helpottavat kriittisiä tutkimuksia immuunitoiminnassa, sairausmekanismeissa, rokotteiden kehityksessä ja syövän immunoterapiassa. Eristämis-, jäätymis- ja sulatusprosessit ovat välttämättömiä niiden eheyden ja elinkelpoisuuden säilyttämiseksi, jolloin tutkijat voivat tutkia solujen dynamiikkaa eri malleissa. Kun ymmärryksemme immunologiasta syvenee, pernasolujen käyttö on edelleen tärkeä tekijä prekliinisten tutkimusten ja kliinisten sovellusten välisen kuilun varmistamisessa varmistaen sekä ihmisen että eläinlääketieteen edistymisen.