Faq

K: Kuinka minun pitäisi valita mikrosomit ja hepatosyytit metabolisten stabiilisuustutkimuksiin? Voinko valita vain yhden niistä vaatimuksen täyttämiseksi?

V: Metabolisessa stabiilisuustutkimuksessa maksamikrosomien tai hepatosyyttien valinta riippuu pääasiassa yhdisteiden metabolisista ominaisuuksista, joissa valitaan korkea metabolinen nopeus. Yleensä maksan mikrosomit ovat edullisia, etenkin kun yhdisteiden molekyylit ovat enemmän vettä - liukoinen ja yksi - faasimetabolia on tärkein metabolinen reitti (erityisesti CYP: n kautta). Maksasoluja voidaan käyttää kokeisiin, kun on olemassa todisteita kahdesta - faasin metaboliasta tärkeänä reitinä, hydrolyysinä tärkeimmänä metabolisena reitinä, korkean epäspesifisen proteiinin sitoutumisena maksan mikrosomeissa ja metabolia maksan mikrosomeissa. Yleensä yksi aineenvaihduntajärjestelmä voidaan valita tarpeiden tyydyttämiseksi; Jos olosuhteet kaikissa näkökohdissa sallitaan, on ehdottomasti parasta valita molemmat järjestelmät samanaikaisesti.

K: Miksi on välttämätöntä käyttää primaarisia maksasoluja entsyymien induktiomäärityksessä?

V: CYP -entsyymi - Indusoidun määrityksen on siirryttävä "transkriptiosta", "translaatio" - "Post - Proteiinin translaation modifikaatio" aktiivisen CYP -entsyymiproteiinin saamiseksi. Siksi testijärjestelmän tulisi olla maksasolut, ei maksan mikrosomit tai maksa S9.

K: Miksi minun on valittava kolme ihmisen luovuttajan ensisijaista hepatosyyttiä entsyymien induktiomääritykselle?

V: Huumeiden vuorovaikutusohjeiden johdannon mukaan ainakin kolmea luovuttajaa tulisi käyttää ja kunkin luovuttajan induktiotulos on arvioitava erikseen. Tilastollisesti merkitsevien tulosten tuottamisen lisäksi kolmen luovuttajan valinta kokeelle on myös tärkeämpää inter - yksilöllisten variaatioiden arvioinnissa. Jos ainakin yhden luovuttajan tulos ylittää ennalta määrätyn kynnyksen, lääkeehdokas voi olla indusoitavissa ja seuraa - UP -arviointia tarvitaan.

K: Miksi keskittyä vain CYP -entsyymin induktioon eikä UGT -entsyymien induktioon?

V: Syy keskittymiseen CyPaasin induktioon on, että CyPaasin induktion mekanismia on tutkittu selkeämmin. Toisin sanoen syynä, että Ugtase -induktion tutkimusta ei vaadita, on, että mekanismi on edelleen epäselvä; Tämä ei kuitenkaan tarkoita, että UGTASE ei aiheuteta. Ohjeissa todetaan myös, että kuljettajien ja vaiheen II aineenvaihdunnan entsyymien induktoreille tai estäjille ei ole standardisoitua luokittelujärjestelmää.

K: Kuinka kauan tarttuvat primaariset maksasolut voivat selviytyä elvytyksen jälkeen ja kuinka kauan hepatosyyttejä voidaan ylläpitää ilman tarttuvaa kulttuuria elvytyksen jälkeen?

V: Pasteuroituja primaarisia maksasoluja käytetään yleensä entsyymien induktiomäärityksiin. Solujen palautumisen jälkeen solut suspendoituu levyn leviämisväliaineeseen, säädetään sopivaan konsentraatioon ja viljelty kollageenilla - päällystetyt levyt; Sitten solut voidaan pastöroida 4 ~ 6 tunnin sisällä. Kun solut on kiinnitetty seinään, huoltoväliaine vaihdetaan ja ylläpidetään 18 tunnin ajan solutilan maksimaalisen palauttamisen varmistamiseksi. Seuraavaksi entsyymin induktiomääritys voidaan suorittaa metabolisen aktiivisuuden ja mRNA: n induktiotason havaitsemiseksi. Koko syklin näkökulmasta hepatosyyttejä voidaan ylläpitää 6 ~ 7 päivän ajan seinämän tarttumisen jälkeen. Ajan myötä soluseinän kiinnittymistila huononee ja solut irrottavat ja suspendoivat.

Jos tarttuvia hepatosyyttejä ei viljellä, olemme varmistaneet, että niitä voidaan ylläpitää hyvässä tilassa 4 ~ 6 tunnin sisällä. Emme ole vielä suorittaneet vahvistusta pidempään.

K: Hepatosyyttejä voidaan käyttää sekä suspensio- että tarttuvina soluina käytetyistä erilaisista viljelyväliaineista?

V: Suurin osa kiinteistä kudoksista ja elimistä peräisin olevista soluista on seinä, mutta kaikki solut eivät ole seinässä, kun niitä viljellään - vitro. Onko solut seinä - kiinnittyvät vai eivät ole itse solujen tilasta; Samanaikaisesti seinä - Tarttuvat solut tarvitsevat spesifisen viljelyalustan ja joitain erityisiä pro - solujen tarttumisainetta (esim. Rhamnogelinogeeni, laminiini, fibronektiini, seerumin laajennustekijä), jotka voivat osallistua solujen kiinnitysprosessiin. Yhteenvetona voidaan todeta, että tarttuvia soluja voidaan käyttää suspensiosoluina, mutta suspensiosoluja ei välttämättä ole saatavana tarttuvaan käyttöön.

K: Mitkä ovat tarttuvien seinämien jakeiden suspensio hepatosyyttien käytön edut/haitat? Mitkä ovat päätöksentekopriteerit?

V: Kun hepatosyytit on eristetty, niitä voidaan viljellä suspensiossa tai tarttuessa seinämässä. Sytokromi P450 -entsyymin aktiivisuus suspensioista viljellyt primaariset maksasoluista on yhdenmukaisimpana in - vivo -yrityksen kanssa ensimmäisen 4 ~ 6H: n ajan, sitten vähenee nopeasti ajan pidentämisen myötä. Siksi suspensio hepatosyyttejä käytetään yleensä metabolisen stabiilisuustutkimuksen tai metaboliitin profilointitutkimukseen. Tarttuvassa seinämässä viljeltyjen primaaristen maksasolujen on riittävä aika toipua vaurioista normaalien maksasolujen biologisten ominaisuuksien ja metabolisen aktiivisuuden ylläpitämiseksi. Siksi niitä käytetään yleensä entsyymi -induktiotutkimuksiin, lääkkeiden sytotoksisuustutkimuksiin, hitaiden metabolisoivien lääkkeiden metaboliaalista staboloivuus tai tuotepäätelmätutkimukset.

Tällä hetkellä emme tarjoa verkkosivun online -ostopalvelua. Ostoskoriin lisätyt tuotteet rekisteröinnin ja kirjautumisen jälkeen on vain viitteitä varten. Jos sinun on ostettava tuotteitamme, jätä yhteystietosi yhteystietokanavan kautta, ja otamme sinuun yhteyttä ajoissa, jotta voimme suorittaa palvelumme.

Q ： Kuinka ei -- spesifinen proteiinin sitoutuminen vaikuttaa testituloksiin?

A ： Jos lääkeehdokas sitoo ei - erityisesti mikrosomaalisia proteiineja, tämä johtaa muuttuneisiin kineettisiin parametreihin. Proteiinipitoisuuden lisääntyessä KM -arvo kasvaa, mikä johtaa alhaiseen oletettuun luontaiseen puhdistumiseen. Lääkeehdokkaan sitoutuminen proteiineihin mikrosomeissa voi johtaa suuriin vaihteluihin eri laboratorioiden ja eri järjestelmien tuloksissa.

Q ： Maksan mikrosomaalisen proteiinin suositeltu pitoisuus vaiheen I tai vaiheen II metabolisen stabiilisuuspakkauksen käyttöohjeessa on 0,1 mg/ml - 1 mg/ml, tarkoittaako tämä, että maksan mikrosomeja käytettäessä on silti välttämätöntä laimentaa ne hyvin ennen niiden lisäämistä järjestelmään?

V: Ensin ei tarvitse laimentaa maksan mikrosomeja; Maksamikrosomien pitoisuus pakkauksessa on 20 mg/ml ja maksasekmit -mikrosomien lopullinen konsentraatio testijärjestelmässä on 0,1 - 1 mg/ml, jota voidaan lisätä suhteellisesti.

Q ： Mikä on suositeltava solutiheys primaaristen maksasolujen metaboliseen stabiilisuustestaukseen? Onko puhdistuman laskenta sama kuin maksamikrosomeissa?

A ： Primaarisen maksasolujen metabolisen stabiilisuusmäärityksen suositeltu solutiheys on 0,5 - 2 x 10⁶ Solut/ml ja maksan mikrosomaalisen metabolisen stabiilisuusmäärityksen tulosten puhdistuslaskelmat ja prosessointi ovat yhdenmukaisia.

K ： Mitkä ovat PBS -puskurisi tärkeimmät ainesosat? Sisältääkö se KCl ja NaCl?

A ： PBS -puskurimme pääkomponentit ovat k₂HPO₄ ja kh₂PO₄, ja ne eivät ole KCL: ää ja NaCl.

K ： Mikä on fosfaattipuskurien tarkoitus? Miksi tarvitset fosfaattia?

A ： fosfaattipuskurit valitaan fysiologisen ympäristön jäljittelemiseksi, ja fosfaatti on yksi tärkeimmistä puskuripareista kehon nesteympäristön ylläpitämiseksi.

K ： Mikä on tavallinen asetus entsyymille - indusoitu reseptoripitoisuus? Onko mitään ratkaisua, jos testattavan järjestelmän liukoisuus on heikko?

A ： Entsyymin induktiomääritys on asetettava 3 erilaisilla pitoisuuksilla, pitoisuusasteen on katettava ihmisillä odotettu tehokas verilääkepitoisuus, ja suurin pitoisuus valitaan vähintään yksi suuruusluokka, joka on korkeampi kuin keskimäärin efektiivinen verilääkepitoisuus ihmisissä. Jos vesifaasin liukoisuus on heikko, sen liuotin, esim. DMSO, mutta järjestelmään lisätyn orgaanisen liuottimen määrä on hallittava.

Q ： Metabolisissa stabiilisuustutkimuksissa on tarpeen käyttää kahta testijärjestelmää, maksamikrosomia ja primaarisia hepatosyyttejä testaamiseen?

A ： Maksamikrosomit ovat melkein pallomaisia ​​membraanirakkoja - Kuten rakenteet, jotka muodostuvat itsestään - fragmentoidun endoplasmisen retikulumin fuusio, joka on saatu homogenisoinnin aikana ja maksan kudosten differentiaalinen sentrifugaatio, ja sisältävät CYP450 -entsyymejä ja joitain kaksifaasisia entsyymejä, E.G., Ugts, STS. Primaariset maksasolut (PHC) ovat hepatosyyttejä, joita viljellään heti eläinten maksan suoran eristyksen jälkeen, jotka periaatteessa ylläpitävät maksan metabolisia toimintoja, etenkin paremmin entsyymitasojen säilyttäminen yhdenmukaisesti in vivo. Metabolisen stabiilisuustutkimuksessa ei tarvitse harkita kustannuksia, ja testiä varten voidaan valita kaksi testijärjestelmää samanaikaisesti; tai asianmukainen testijärjestelmä voidaan valita yhdisteen metabolisten ominaisuuksien mukaisesti, ja periaate on se, että järjestelmän aineenvaihdunnan nopeus on valittu. Yleensä maksan mikrosomit ovat paras valinta, kun yhdisteiden molekyylit ovat enemmän vettä - liukoinen ja yksi - faasimetabolia on tärkein metabolinen reitti (erityisesti CYP: n kautta); Kun kaksi - faasimetabolia on pääreitti, hydrolyysi on tärkein metabolinen reitti, ei -- spesifinen proteiinin sitoutuminen maksan mikrosomeissa on erittäin korkea ja aineenvaihdunta ei ole ilmeinen maksan mikrosomeissa, testi voidaan suorittaa käyttämällä primaarisia hepatosyyttejä.

K ： Onko metabolisen stabiilisuustestissä tutkittu mikrosomien pitoisuus? Mikä on liian korkea tai liian matala?

A ： Metabolisessa stabiilisuuskokeessa proteiinipitoisuus vaikuttaa myös metaboliseen nopeuteen, valitse yleensä mikrosomaalinen proteiinipitoisuus 0,1 mg/ml ~ 1 mg/ml, mikä on erityinen valinta siitä, kuinka paljon proteiinipitoisuutta tulisi valita yhdisteen omien metabolisten ominaisuuksien mukaan. Liian korkea mikrosomaalisen proteiinikonsentraatio johtaa lääkkeen spesifiseen sitoutumiseen mikrosomaaliseen proteiiniin; Vaikka mikrosomaalisen proteiinin pitoisuus on liian pieni, voi johtaa lääkkeen merkityksettömään aineenvaihduntaan.