Indusearre rat Liver S9-fraksje: in metabolysk aktivaasjysteem foar yn vitro genotoxisiteit en mutaasje testen

Trefwurden: OECD 471, OECD 473, OECD 476, OECD 487, Mution Test, genet Test, induzeare riven, Mini Ames Test, Micronucleus, micronucleus, HPRT / HGRT / HGRT-assay, TK Asay

IPHASE-produkt

Ynlieding

Induced rat lever s9is in wichtige komponint by it beoardieljen fan 'egenetyske toksisiteitpotensjeel fan gemikaliën, foaral yn regeljouwing texicology. It wurdt faak brûkt yn kombinaasje mei yn vitro-assays, lykas deAmes test enMutaasje tests, om de mutagenyske eigenskippen fan ferbiningen te evaluearjen. Troch enzymatyske systeem ryk te leverjen yn Cytochrome P450 (Cyp450) spilet de induzeare rolen in krúsjale rol yn dy't yn 'e lever dy't foarkomt as gemikaliën potenetyske mutaasjes of kanker kin feroarsaakje.

Induced rat lever s9

De lever S9-fraksje ferwiist nei in post - Mitochondriale Supernatant krige út Rat Leiven homogenates nei in searje sintrifugaasje stappen. De term "feroarsake" ferwiist nei de behanneling fan ratten mei spesifike ferbiningen dy't de aktiviteit fan leveringen ferbetterje, fral de Cytochrome P450), dy't ferantwurdelik binne foar it metabolisme fan in breed oanbod fan Xenobiotika.

De induzeare rat Liver S9-fraksje befettet in ferskaat oan enzymen dy't belutsen binne by de faze i en faze II metabolisme fan gemikaliën. Dit omfettet enzymen lykas Cytochrome P450 monooxenasen, dy't oksidative biotransformaasje fasilitearje fan substraten, dêrtroch minsklik levermetabolisme fan minsklike levermet.

Cyp450 aktiviteit en metabolike aktivearring

De Cytochrome P450 Enzyme-famylje (Cyp450) spilet in pivotale rol yn it metabolisme fan in breed ferskaat oan stoffen, ynklusyf in protte farmaseutika, miljeu gemikaliën, en carcinogen. De induzeare rat Liver S9-fraksje befettet dizze enzymen en is essensjeel foar evaluearjen fan gemikaliën dy't allinich genoakje wurde nei metabolike aktivearring.

In protte ferbiningen binne yn earste ynstânsje net - Toxic, mar kin giftich wurde nei metabolisme yn 'e lever. Dizze pro - MUTAGEN (dy't metabolike aktivearring nedich binne om mutagenysk te wurden) en Pro - karskippen (dy't aktivearring fereaskje om kanker te feroarsaakjen) allinich te ûntdekken dat jo in S9 METABOLIAL-systeem omfetsje. Sûnder de induksje fan metabolike enzymen lykas Cyp450 kinne dizze stoffen harmlos lykje te wêzen yn standert genotoxicity-tests.

Troch it tafoegjen fan induced rat Liver S9 nei yn Vitro-assays kinne ûndersikers beoardielje hoe't in stof ynteraksje mei de Cyp450-enzymen. Dit is foaral wichtich foar farmaseuticals, as metabolisme troch Cyp450-enzymen is in krityske stap yn 'e farmakokinetika fan in protte drugs.

Applikaasjes fan induzeare rat lever S9

1. 1 AMES TEST (OECD 471)

De ames test, sketst yn 'e rjochtlineOecd 471, Is ien fan 'e meast goed - Bekend en breed brûkte metoaden foar it beoardieljen fan mutagenisiteit. It giet om stroomstingen fan Salmonella-baktyk te eksposearjen ta in testemalië om te sjen oft it mutaasjes indiscuseart dy't de baktearia feroarsaakje om werom te gean nei in histidine - ûnôfhinklike steat.

Om it minsklik metabolysk proses te simulearjen wurdt induzeare rôt-lever S9 wurdt faak tafoege oan it testsysteem. De S9-fraksje leveret de nedige enzymen, ynklusyf Cyp450, dy't kin ferplicht wêze om de ferbining te meitsjen yn in mear reaktive foarm dy't mutaasjes koe feroarsaakje yn 'e baktearjige DNA. Dizze kombinaasje fan S9 mei de Ames-test makket it tastien foar in mear útwreidige beoardieling fan mutagenysk potensjeel troch sawol direkte as metabolysk aktivearre muntenmeganismen.

2. 2.Mutaasje tests (Chromosomale Aberration Test, Micronucleus-test, en oare yn Vitro-assays)

Njonken de ames-test wurde mutaasje-tests faak brûkt om it genoasoxyske potensjeel fan gemikaliën te evaluearjen. Dizze tests binne mear wiidweidich by it beoardieljen fan in berik fan genetyske skea, ynklusyf chromosomale mutaasjes, gene mutaasjes, en de foarming fan mikronuclei. Induced Rat Liver S9 wurdt om de folgjende redenen brûkt yn mutaasje testen:

Micronucleus Test (OECD 487)

Dizze test detekteart de foarming fan Micronuclei yn sellen, dy't lytse, ekstranukleêre lichems binne dy't befetsje mei fragminten fan chromosomen dy't net opnommen binne yn 'e kearns yn' e seldiel. De Micronucleus-testKin CLASTOGENIC (chromosome (chromosoom ôfbrekke - brekke) en anugenic (beynfloedzje chromosome nûmer) effekten. Indusearre rôt-lever S9 wurdt hjir brûkt om de testferbod te aktivearjen, om't guon gemikaliën allinich chromosomale skea feroarsaakje, ienris se binne metabolisearre troch leveringen. De SV-fraksje ferbetteret de gefoelichheid fan 'e test troch de metabolike aktivearring te simulearjen dy't kin foarkomme yn Vivo.

Chromosomale Aberration Test (OECD 473)

Dizze test evalueart as in substânsje strukturele skea feroarsaakje oan chromosomen troch induzearjen fan pauzes, wiskjen, translocations, as oare soarten Aberrations. Lykas de Micronucleus-test, deChromosomale Aberration Testkin tapast wurde mei of sûnder metabolike aktivearring. Indusearre rôt-lever S9 wurdt tafoege oan it testsysteem om de metabolike prosessen te imitearjen, wêrtroch de beoardieling fan stoffen kinne feroarsaakje yn har orizjinele foarm, mar koe dwaan nei levermet-metabolisme.

Tabel 1. Fergelikingswurden fan mutaasje-tests

HPRT / HGPRT ASSAY (OECD 476)

Yn 'eHPRT / HGPRT ASSAY, kultueren fan Sineeske hamster (Cho of V79) of Himmel Lympoblastoid (TK6) CHEMSLIKE oan it test fan 'e oanwêzige rôt, dy't Cyp450-enzymen nedich binne om Pro-Mutagens te konvertearjen yn DNA-Reactive soarten. Nei in koarte behanneling en in perioade fan sân dagen wurde sellen, wurde útdage mei 6-thioguanine; Allinich klanten dy't ferlies hawwe-fan-funksje-mutaasjes yn 'e hypoxanthine-Guanine Phosphoribosyltransferase Gene oerlibje. Troch mutante koloanje te krijen tellet ta totale leefberens, bepale ûndersikers in mutaasjefrekwinsje dat, as reprodusearjende ferhegend oerleve oer sawol betûftige as histoaryske kontrôles, toant him oan.

TK Assays (OECD 490 & Oecd 476)

DeTK Assay wurket L5178y Mûs Lymphoma-sellen (OECD 490) as CHO-sellen (Oecd 476) ENGINEERED Heterozygous by de Thymidine Kinase Locus. Nei Chemical Exposure ± S9 Mix, Cells herstelle en binne plated yn Medium befette Trifluorothymidine, dy't TK-profyske sellen deadet. Survive TK⁻ Mutants Formulieren fan koloanjes oer 10-14 dagen, mei lytse koloanen wjerspegelje faaks chromosomale eveneminten en grutte koloanje-mutten dy't punt wjerspegelje. Lykas yn 'e HPRT / HGPRT-assay, stringt Cytoxicity Controls en positive Benchmarks soargje derfoar dat waarnommen nimt yn' e mutaasjefrekwinsje dy't betrouber risch syn genotoxyske risiko is.

4. 4. Kankerrisiko-beoardieling

Indusearre rat-lever S9 wurdt ek brûkt yn stúdzjes dy't rjochte is om it kanker te beoardieljen - wêrtroch potensjeel fan stoffen. Troch de metabolike prosessen te simulearjen dy't yn 'e minsklike lever foarkomme, kin de S9-fraksje helpe te identifisearjen dy't kinne liede ta de opstelling fan Reaktive Metaboliten yn steat om te binen oan DNA en feroarsaakje dat mutaasjes feroarsaakje dat ta kanker koe liede.

Ferbettere ames test mei induced hamster lever S9

Neffens de lêste rjochtlinen útjûn troch de Jeropeeske medisinen Agency (EMA) kin de tradisjonele testen net gefoelich wêze om it mutraansysk potensjeel te detektearjen, foaral N - Nitrosodimethylamine (NDMA), ûnder oaren. Dêrom, de ferbettere Ames-test, ûntwikkele troch it National Center foar Toxicologysk ûndersyk (NCTR), in ferdieling fan 'e U.S. Fleedsadministraasje (FDA), is oanrikkemandearre as in betrouberste alternatyf. De ferbettere Ames-test yntrodusearre tafoegjen fan induzeare hamster lever S9, dy't útfierde yn befette 30% Rat Liver S9 en 30% Hamster Liver S9. Rat- en Hamster Desmosomale Supernatants (S9S) moatte wurde taret op knaagdblieders behannele mei cytochrome P450 enzym - Inducing stoffen. Troch gebrûk fan Induced Hamster Liver S9 te brûken, simuleart dizze ferbettere test better minsklike metabolisme en fergruttet de betrouberens fan 'e resultaten.

Konklúzje

Indusearre rôt-lever S9 tsjinnet as in kritysk ark yn genootoxisiteit testen, helpen, help fan ûndersikers en regeljouwende en carcinogenysk potinsjeel beoardielje. Troch it leverjen fan in metabolike aktivaasjestelsel, ferbetteret it it fermogen fan assays lykas de ames-test, mutaasje-tests, en Cyp450 aktiviteitsstúdzjes om stoffen te detektearjen dy't metabolike aktivearring nedich binne om techotoxysk te wurden. De applikaasjes binne essensjeel foar it garandearjen fan de feiligens fan nije drugs, gemikaliën, en konsuminteprodukten. Mei syn rol by simulearje yn simulearje Metabolisme, bliuwt de induzeare rie-lever S9-fraksje in ûnmisbere diel fan 'e moderne Toxicology en regeljouwingspersyksbeoardielingen.