C: Conas ba chóir dom micreafóim agus hepatocytes a roghnú le haghaidh staidéar cobhsaíochta meitibileach? An féidir liom ach duine amháin díobh a roghnú chun an riachtanas a chomhlíonadh?
A: I staidéar cobhsaíochta meitibileach, braitheann an rogha micreafóim ae nó hepatocytes go príomha ar airíonna meitibileacha na gcomhdhúl, ina roghnaítear an ceann le ráta meitibileach ard. Go ginearálta, is fearr micreafóim ae, go háirithe nuair a bhíonn na móilíní cumaisc níos mó uisce - intuaslagtha agus is é meitibileacht chéim amháin an príomhbhealach meitibileach (go háirithe trí CYP). Is féidir hepatocytes a úsáid le haghaidh turgnaimh nuair a bhíonn fianaise ann go bhfuil dhá mheitibileacht chéim ann mar mhórbhealach, hidrealú mar mhórbhealach meitibileach, próitéin nonspecific ard i micreafóim ae, agus ní léir meitibileacht i microsomes ae. De ghnáth, is féidir córas meitibileach amháin a roghnú chun na riachtanais a chomhlíonadh; Má cheadaíonn na coinníollacha i ngach gné, is cinnte gur fearr an dá chóras a roghnú ag an am céanna.
C: Cén fáth a bhfuil sé riachtanach hepatocytes príomhúla a úsáid le haghaidh measúnacht ionduchtaithe einsím?
A: CYP Einsím - Ní mór measúnacht spreagtha a dhéanamh ó "trascríobh", "aistriúchán" go "post - modhnú próitéine aistritheach" chun próitéin einsím ghníomhach CYP a fháil. Dá bhrí sin, ba chóir go mbeadh an córas tástála ina chealla ae, ní i micreafóim ae ná in ae S9.
C: Cén fáth a gcaithfidh mé trí hepatocytes bunscoile daonna a roghnú don mheasúnacht ionduchtaithe einsíme?
A: De réir na réamhrá ar na treoirlínte maidir le hidirghníomhaíochtaí drugaí, ba cheart trí dheontóir ar a laghad a úsáid, agus ba cheart toradh ionduchtaithe gach deontóra a mheas ar leithligh. Chomh maith le torthaí suntasacha staitistiúla a tháirgeadh, tá an rogha de thrí dheontóir don turgnamh níos tábhachtaí freisin chun measúnú a dhéanamh ar éagsúlacht aonair. Má sháraíonn an toradh ó dheontóir amháin ar a laghad tairseach réamhshocraithe, d'fhéadfadh an t -iarrthóir drugaí a bheith dodhéanta agus tá gá le meastóireacht a leanúint.
C: Cén fáth nach ndírítear ach ar ionduchtú einsím CYP agus ní ar ionduchtú einsím UGT?
A: Is é an chúis atá le díriú ar ionduchtú cypase ná go ndearnadh staidéar níos soiléire ar mheicníocht ionduchtaithe Cypase. I bhfocail eile, is é an chúis nach gá staidéar a dhéanamh ar ionduchtú ugtase ná nach bhfuil an mheicníocht soiléir fós; Mar sin féin, ní chiallaíonn sé seo nach spreagfar Ugtase. Deir na treoirlínte freisin nach bhfuil aon chóras aicmithe caighdeánaithe ann le haghaidh ionduchtálaithe nó coscairí iompróirí agus einsímí meitibileachta Céim II.
C: Cé chomh fada is féidir le hepatocytes príomha a mhaireann tar éis athbheochana, agus cá fhad is féidir hepatocytes a choinneáil gan cultúr greamaitheach tar éis athbheochana?
A: Is iondúil go n -úsáidtear hepatocytes príomhúil pasteurized le haghaidh measúnachtaí ionduchtaithe einsíme. Tar éis aisghabháil cille, cuirtear cealla ar fionraí i meánphláta a scaiptear, arna gcoigeartú go tiúchan cuí, agus saothraithe i bplátaí brataithe collagen; ansin is féidir cealla a phacáil laistigh de 4 ~ 6 uair an chloig. Tar éis na cealla a bheith ceangailte leis an mballa, cuirtear an meán cothabhála in áit agus cothaítear é ar feadh 18 h chun an t -athchóiriú uasta ar an stát cille a chinntiú. Ansin, is féidir measúnacht ionduchtaithe einsím a dhéanamh chun gníomhaíocht mheitibileach agus leibhéal ionduchtaithe mRNA a bhrath. Ó pheirspictíocht an timthrialla iomláin, is féidir hepatocytes a choinneáil ar feadh 6 ~ 7 lá tar éis cloí leis an mballa. De réir mar a théann an t -am ar aghaidh, téann an stát cloí le ballaí cille in olcas, agus dícheanglóidh agus cuirfidh na cealla ar fionraí.
Mura bhfuil na hepatocytes greamaithe saothraithe, tá sé deimhnithe againn gur féidir iad a choinneáil i riocht maith laistigh de 4 ~ 6 uair an chloig. Ní dhearna muid fíorú go fóill ar feadh tréimhse níos faide.
C: Is féidir hepatocytes a úsáid mar chealla fionraí agus greamaitheacha ag brath ar na meáin chultúir éagsúla a úsáidtear?
A: Tá an chuid is mó de na cealla ó fhíocháin sholadacha agus orgáin ballaí, ach níl na cealla go léir ballaí nuair a bhíonn siad saothraithe i - vitro. Cibé an bhfuil na cealla ina mballa - braitheann nó nach bhfuil ag brath ar staid na gceall iad féin; Ag an am céanna, teastaíonn meán cultúir ar leith ó chealla greamaitheacha agus roinnt substaintí greamaitheachta cille speisialta (m.sh., rhamnogelinogen, laminin, fibronectin, fachtóir leathnaithe serum) a d'fhéadfadh páirt a ghlacadh sa phróiseas ceangaltas cille. Mar fhocal scoir, is féidir cealla greamaitheacha a úsáid mar chealla fionraí, ach ní gá go mbeadh cealla fionraí ar fáil le haghaidh úsáid ghreamaitheach.
C: Cad iad na buntáistí/na míbhuntáistí a bhaineann le húsáid véarsaí ballaí greamaitheacha hepatocytes fionraí? Cad iad na critéir chinnidh?
A: Tar éis hepatocytes a bheith scoite amach, is féidir iad a shaothrú i bhfionraí nó i mballa greamaitheach. Tá gníomhaíocht einsím cytochrome P450 ó hepatocytes príomhúil saothraithe fionraí is comhsheasmhaí leis an epatocytes príomhúil atá ag an gcéad 4 ~ 6h, agus laghdaíonn sé go tapaidh le fadú ama. Dá bhrí sin, is iondúil go n -úsáidtear hepatocytes fionraí le haghaidh staidéar cobhsaíochta meitibileach nó staidéar próifílithe meitibilít. Tá dóthain ama ag hepatocytes príomhúil atá saothraithe i mballa greamaitheach chun teacht ar ais ó dhamáiste chun tréithe bitheolaíocha agus gníomhaíocht mheitibileach na ngnáth -hepatocytes a choinneáil. Dá bhrí sin, is iondúil go n -úsáidtear iad le haghaidh staidéar ionduchtaithe einsím, staidéir chíteatocsaineachta drugaí, cobhsaíocht mheitibileach ar dhrugaí meitibiliúcháin mall nó staidéir ar thátal táirge.
Faoi láthair, ní sholáthraímid seirbhís ceannaigh leathanach gréasáin ar líne. Tá na táirgí a chuirtear leis an gcart siopadóireachta tar éis clárú agus logáil isteach le haghaidh tagartha amháin. Más gá duit ár dtáirgí a cheannach, fág do chuid faisnéise teagmhála tríd an gcainéal déan teagmháil linn, agus déanfaimid teagmháil leat in am chun ár seirbhísí a chomhlánú.
Q: Cén tionchar a bhíonn ag ceangal próitéine neamh -shonrach ar thorthaí tástála?
A ： Má cheanglaíonn an t -iarrthóir drugaí neamh - go sonrach le próitéiní micreafúcha, is é an toradh a bhíonn air seo ná paraiméadair chinéiteacha athraithe. De réir mar a mhéadaíonn an tiúchan próitéine, méadaíonn an luach KM, agus mar thoradh air sin tá imréiteach intreach íseal. Chomh maith leis sin, d'fhéadfadh éagsúlachtaí móra a bheith mar thoradh ar cheangal an iarrthóra drugaí le próitéiní i micreafóim.
Q: Is é an tiúchan molta de phróitéin micreafánach ae sa lámhleabhar treoracha de threalamh cobhsaíochta meitibileach chéim I nó chéim II ná 0.1 mg/ml - 1 mg/ml, an gciallaíonn sé seo go bhfuil sé fós riachtanach iad a chaolú go maith sula gcuireann siad iad leis an gcóras?
A: Níl aon ghá leis na micreafóim hepatic a chaolú ar dtús; Is é an tiúchan de mhicreafóim hepatic sa trealamh ná 20 mg/ml agus is é an tiúchan deiridh de mhicreafóim hepatic sa chóras tástála ná 0.1 - 1 mg/ml, ar féidir iad a chur leis go comhréireach.
Q: Cad é an dlús cille molta le haghaidh tástála cobhsaíochta meitibileach ar hepatocytes príomhúla? An bhfuil an ríomh imréitigh mar an gcéanna le ríomh micreafóim ae?
A: Is é 0.5 go 2 × 10 an dlús molta cille don phríomh -mheasúnacht chobhsaíochta meitibileach hepatocyte6 Tá na cealla/ml, agus na ríomhanna imréitigh agus próiseáil torthaí an mheasúnaithe cobhsaíochta meitibileach micreafánach hepatic comhsheasmhach.
Q: Cad iad na príomh -chomhábhair i do mhaolán PBS? An bhfuil KCl agus NaCl ann?
A: Is iad na príomh -chomhpháirteanna dár maolán PBS k2HPO4 agus KH2PO4, agus tá siad saor ó KCL agus NACL.
Q: Cad é cuspóir na maolán fosfáite? Cén fáth a dteastaíonn fosfáit uait?
A: Roghnaítear maoláin fosfáite chun an timpeallacht fhiseolaíoch a athmhúnlú, agus tá fosfáit ar cheann de na péirí maolánacha is tábhachtaí chun timpeallacht sreabhach an chomhlachta a choinneáil.
Q: Cad é an gnáthshuíomh le haghaidh comhchruinnithe gabhdóra einsíme - An bhfuil aon réiteach ann má tá tuaslagthacht an chórais atá le tástáil bocht?
A: Ní mór an measúnacht ionduchtaithe einsím a chur ar bun le 3 chomhchruinniú éagsúla, ní mór don leibhéal tiúchana an tiúchan éifeachtach drugaí fola a chlúdach i ndaoine, agus roghnaítear an tiúchan is airde chun ordú amháin ar a laghad a bheith níos airde ná an meán -chomhchruinniú éifeachtach drugaí fola i ndaoine. Má tá an tuaslagthacht sa chéim uiscí bocht, is féidir tuaslagóir orgánach a roghnú mar thuaslagóir, e.e. DMSO, ach ní mór an méid tuaslagóra orgánaigh a chuirtear leis an gcóras a rialú.
Q: I staidéir chobhsaíochta meitibileach, an bhfuil sé riachtanach dhá chóras tástála, micreafóim ae agus hepatocytes príomhúla a úsáid, le haghaidh tástála?
A: Tá micreafóim hepatic beagnach veicteoir membrane sféarúil - cosúil le struchtúir a chruthaítear le féin -chomhleá reticulum endoplasmic ilroinnte a fhaightear le linn aonchineálacha agus lártheifneoiriú difreálach na bhfíochán hepatic, agus tá einsímí CYP450 agus roinnt enzymes biphasic, E.G. Is éard atá i gceist le hepatocytes príomhúil (PHCanna) ná hepatocytes saothraithe díreach tar éis aonrú díreach ó aenna ainmhithe, a choinníonn feidhmeanna meitibileacha an ae go bunúsach, go háirithe na leibhéil einsíme a chaomhnú níos fearr leo siúd in vivo. Sa staidéar cobhsaíochta meitibileach, níl aon ghá leis an gcostas a bhreithniú, agus is féidir dhá chóras tástála a roghnú don tástáil ag an am céanna; nó is féidir an córas tástála cuí a roghnú de réir airíonna meitibileacha an chomhdhúile, agus is é an prionsabal ná go roghnaítear ráta meitibileach ard ag an gcóras. Go ginearálta, is iad micreafóim ae an rogha is fearr nuair a bhíonn na móilíní cumaisc níos mó uisce - intuaslagtha agus is é meitibileacht chéim amháin an príomhbhealach meitibileach (go háirithe trí CYP); Nuair is é an meitibileacht chéime an príomhbhealach, is é hidrealú an príomhbhealach meitibileach, tá an próitéin neamh -shonrach ceangailteach sna micreafóim ae an -ard, agus níl meitibileacht soiléir sna micreafóim ae, is féidir an tástáil a dhéanamh ag baint úsáide as hepatocytes príomhúil.
Q: An bhfuil an tiúchan de mhicreafóim a scrúdaítear sa tástáil cobhsaíochta meitibileach? Cad é an éifeacht atá ag ró -ard nó ró -íseal?
A: Sa tástáil chobhsaíochta meitibileach, beidh tionchar ag an tiúchan próitéine ar an ráta meitibileach, de ghnáth roghnóidh sé an tiúchan próitéine micreafánach de 0.1 mg/ml ~ 1 mg/ml, an rogha sonrach ar an méid ba chóir tiúchan próitéine a roghnú de réir airíonna meitibileacha an chomhdhúile féin. Ró -ard beidh tiúchan de phróitéin micreafánach mar thoradh ar cheangal neamh -shonrach an druga leis an bpróitéin micreafánach; Cé go bhfuil sé ró -íseal d'fhéadfadh tiúchan próitéine micreafómach a bheith mar thoradh ar mheitibileacht neamhshuntasach an druga.