Mar a leasaicheas tu sleamhnagan airson asyay comet
AnAssay Comet, ris an canar cuideachd electrophorphoresis cealla, na dhòigh mothachail is ioma-fhallain airson milleadh DNA a lasadh ann an ceallan fa leth. Ag ullachadh càileachd àrd - càileachdSleamhnay ComestTha ceum riatanach a tha a 'dearbhadh ùpraid agus ath-riochdachadh thoraidhean Astràilia. Tha an artaigil seo ag amas air stiùireadh coileanta a thoirt seachad mu bhith ag ullachadh sleamhnagan airson Asto Assay, a 'fighe a-steach sealladh bho eòlaichean san raon. Còmhdaichidh sinn gach ceum deatamach, bho thaghadh cealla gu mìneachadh dàta, a 'dèanamh cinnteach gu bheil thu a' coileanadh nan toraidhean as fheàrr a tha comasach.Ro-ràdh airson Assay agus cho cudromach sa tha e
● Ro-shealladh air Asseay Comet
Tha an Araoidh Comet, a chaidh a leasachadh aig deireadh na 1980n, na inneal cumhachdach airson briseadh DNA a lorg ann am ceallan neach-cùraim fa-leth. Tha e air a chleachdadh gu farsaing ann an raointean leithid deuchainn Genotoxicity, giùlain mealecumular, agus bith-eòlas àrainneachd. Tha prionnsapal an Astain Arrany a 'toirt a-steach ceallan ann an Anahos, a' leigeil a-mach gus buill-bodhaig agus pròtainean a chuir a-mach, a 'toirt an DNA a' toirt a-mach an DNA ri electrophoresis. Tha an ìomhaigh a thàinig às, coltach a 'tighinn, a' ceadachadh meud a 'mhilleadh DNA a cheadachadh.● tagraidhean ann an lorg milleadh DNA
Tha Assays Comet gu sònraichte luachmhor ann a bhith a 'lorg milleadh DNA a dh' adhbhraicheas tuxins àrainneachd, rèididheachd, agus cungadairean cungaidh-leigheis. Tha pàirt riatanach aig iad cuideachd ann a bhith a 'luachadh èifeachdas a bhith a' càradh dhòighean càraidh DNA ann an diofar sheòrsaichean cealla. Bidh luchd-rannsachaidh a 'cleachdadh Astosas gus sgrùdadh a dhèanamh air aillse, a' fàs leanagan, agus galairean eile ceangailte ri milleadh DNA.● cudromachd ann an deuchainnean genotoxicity
Chan urrainnear brìgh riaghlaidh agus rannsachadh adsays a thoirt a-steach. Bidh iad nan inneal tòiseachaidh riatanach airson a bhith a 'comharrachadh todhar genotoxic comasach. Faodaidh na toraidhean bho na h-aibhnichean sin buaidh a thoirt air co-dhùnaidhean - pròiseasan ann am measaidhean leasachadh dhrogaichean agus measaidhean sàbhailteachd àrainneachd.Taghadh de cheallan iomchaidh airson asy
● seòrsaichean cheallan a chaidh a chleachdadh
Faodaidh an roghainn cheallan buaidh mhòr a thoirt gu mòr air toradh Assay Comet. Tha ceallan cumanta a 'toirt a-steach lympheòidh, ceallan boccll, agus diofar loidhnichean cealla cultar. Bidh luchd-rannsachaidh gu tric a 'taghadh seòrsaichean cealla stèidhichte air amasan an sgrùdaidh agus cho luath sa tha e a' faighinn sampaill.● Beachdachaidhean airson roghainn cealla
Nuair a thagh iad cheallan, beachdaich air factaran mar a bhith ri fhaighinn agus cugallachd ri milleadh DNA, agus buntainneachd ris a 'cheist rannsachaidh. Mar eisimpleir, tha lympheòcytes gu tric rim faighinn bho fhuil agus tha iad mothachail air riochdairean genotoxiceach, gan dèanamh na roghainn fìor mhath dha mòran sgrùdaidhean.● Buaidh air Toraidhean Assay
Faodaidh tùs agus staid nan ceallan buaidh a thoirt air ìre bhun-loidhne milleadh DNA agus freagairt an cealla airson leigheasan. Mar sin tha taghadh cealla cunbhalach agus clò-bhualadh cuibhrigeil deatamach gus toraidhean earbsach agus ath-riochdachadh fhaighinn ann an argarabaidhean Comet.Ag ullachadh Gels Agada
● Seòrsan agarose a chleachdadh
Tha a bhith a 'taghadh a' ghrèbhadh ceart Anarorose deatamach airson ionracas an Asain asas a 'tighinn. Is fheàrr le Point Low Melting Anana seach gu bheil e a 'daingneachadh gu luath agus a' lughdachadh milleadh DNA rè giollachd. Àrd-thuath - dedrose càileachd bho sholaraichean cliù, mar an fheadhainn bho sholaraiche Slide Comest Comet no Comet Tabhartas Sleamhainn.● Cuir dùmhlachd agus ceumannan ullachaidh
Mar as trice, thèid dùmhlachd gnìomhach a tha a 'leaghadh 1% a bhith air a chleachdadh. Cuir a-mach an Anaurose ann am bufair freagarrach, teas a leaghadh gus mo leaghadh gu tur, agus an uairsin galachadh gu teòthachd a tha sàbhailte airson cealla a 'fosgladh. Dèan cinnteach gu bheil na Anarose saor bho builgeanan agus sprùilleach gus artifacts a sheachnadh anns an Assay.● A 'dèanamh cinnteach à càileachd gel as fheàrr
Faodaidh càileachd Gel an Agarose buaidh a thoirt air cugallealachd agus ath-riochdachadh asstair. Tha làimhseachadh làimhseachaidh agus dòighean ullachaidh riatanach gus gel homogenous a thoirt gu buil le togalaichean cunbhalach thar sleamhnagan eadar-dhealaichte. Bidh seo a 'dèanamh cinnteach gu bheil cruthachadh agus filmeas a' chomets a 'faighinn èideadh.Crochadh cealla agus a 'daingneachadh cheallan ann an Anarorose
● Ag ullachadh a 'chasg a' chilleachaidh
Tòisich le bhith a 'faighinn aon-stad cealla. Airson ceallan cultarach, tha seo a 'toirt a-steach oidhirp trypinization, air a leantainn le neodrealachadh agus nighe. Airson a 'phrìomh cheallan mar lymphocytes, centrifugation agus ath-chuirm ann am bufair freagarrach. Cleachd Homacytometer gus dèanamh cinnteach à dùmhlachd cealla timcheall air 1 x 10 ^ 5 ceallan / ml.● Cuirmeas air ceallan ann an Litreachadh Loinge Melting Agarose
A 'measgachadh casg-cealla-cealla le PAR - Pounding Ìosal Ìosal Ìosal Ìosal Anahrose aig co-mheas a nì sgrùdadh air sgaoileadh cheallan. Pìob pìoban gu sgiobalta air a 'mheasgachadh a thaobh Pre - Slides Comest Comest - a dh'fhaodar a cheannach bho fhactaraidh sleamhnat as t-slighe no solaraiche earbsach. Cleachd còmhdairean gus an Agarose a sgaoileadh gu cothromach agus cuir casg air builgeanan èadhar.● A 'sgaoileadh cheallan air sleamhnagan
Cho luath 's a tha an Agarose air a sgaoileadh, leig leis na sleamhnagan a bhith a' fuarachadh agus a 'daingneachadh air uachdar fuar no raon fuarachaidh. Feumar an ceum seo a dhèanamh gu h-èifeachdach gus casg a chuir air an Agase bho bhith a 'dol an sàs, a bheir buaidh air fradharc a' tighinn rè anailis.Lyis de cheallan air na sleamhnagan
● A 'GABHAIL A' GABHAIL A-STEACH LINES
Anns an fhuasgladh lyis mar as trice tha dùmhlachd àrd de shalairean is ghlanaidhean, leithid NCL, EDTA, agus TRIAon X.● Modh Lysis agus cumhaichean Lyis
B 'e sin a th' ann an sleamhnagan anns an fhuasgladh lyis agus carbadan aig 4 ° C airson co-dhiù 1 uair a thìde, ged a bhios bochdaradh thar oidhche a 'b' fheàrr. Dèanamh cinnteach gu bheil an tanca lyis air a chòmhdach gus fàsachadh agus truailleadh a sheachnadh. Tha suidheachadh na ceum lyis deatamach airson a bhith a 'toirt air falbh luchd-taghaidh cealla gun a bhith a' lughdachadh an DNA.● cudromachd lyis cealla iomlan
Faodaidh lyis neo-iomlan a bhith a 'toirt a-steach bochd borb agus dàta neo-earbsach. Mar sin, tha e riatanach protocol lysis a leantainn, dèanamh cinnteach gu bheil am fuasgladh a 'dol a-steach do gach pàirt den t-sleamhnag agus gu bheil amannan giùlain gu leòr airson aimhreit cealla iomlan.Suidheachaidhean Alkaline Unwinding and Electrophoresis
● Ag ullachadh an fhuasgladh alkaline
Tha am fuasgladh alcaline, gu tric a 'measgachadh de Naoh agus Edta, air a chleachdadh gus an DNA a dhì-fhilleadh. Bu chòir an ullachadh aige a dhèanamh gu faiceallach, a 'dèanamh cinnteach gu bheil am pH ceart agus am modal ceart. Am fuasgladh ùr am fuasgladh gus a èifeachdas a chumail suas.● cudromachd neo-chudromachd a dhèanamh air cudrom agus ùine
Tha sleamhnagan incubate ann am fuasgladh alkaline, mar as trice airson 20 - 40 mionaid, gus leigeil leis na dualan DNA a bhith a 'faighinn a-mach. Tha an ceum seo deatamach airson a bhith a 'lorg singilte - briseadh strand agus alkali - làraichean labile. Ùine neo-àbhaisteach ùine stèidhichte air a 'phròtacal agus an seòrsa cealla sònraichte agad.● Suidheachadh electrophoromoresis agus paramadairean
Stèidhich an tanca electrophoresis le bufer electrophorphoromesis fuar. Cuir na sleamhnagan anns an tanca, a 'dèanamh cinnteach gu bheil iad làn uisge. Cuir a-steach bholtadh cunbhalach (mar as trice timcheall air 25 v) airson 20 - 30 mionaid. Feumar na cumhaichean electrophorphoresis, a 'toirt a-steach bholtachd agus ùine, a bharrachadh an rùn as fheàrr de imrich DNA a choileanadh.Pròiseas neodrach agus staining
● Ullachadh bufair neodrach agus cleachdadh
Às deidh electrophoromoresis, neodachadh na sleamhnagan gus stad a chuir air ath-bhualadh agus gus an DNA a lughdachadh. Tha bunait tris ann am bufair neo-christe cumanta aig p Ph de 7.5. A 'reubadh gu socair na sleamhnagan anns a' bhufair seo grunn thursan gus a h-uile clàr den fhuasgladh alcalin a thoirt air falbh.● Modhan staining
Sin na sleamhnagan neodrached le DNA fluorescent dna - ceangail dathte, leithid Birdicum bromide no sybr uaine. Bromidium Bromidium, agus feumar làimhseachadh faiceallach air sgàth na togalaichean badtagenic aige. Tha Sybr uaine a 'tabhann roghainn nas sàbhailte le cugallachd àrd. Incubate na sleamhnagan anns an fhuasgladh staining airson ùine iomchaidh (mar as trice 15 - 30 mionaid) anns an dorchadas.● Lookmention de DNA Comets
Às deidh dha staining, ruith na sleamhnagan gu socair gus cus stain a thoirt air falbh. Dèan sgrùdadh air na sleamhnagan fo mhiocroscop fluorescence. Tha càileachd nan staining agus rùn microscoppe deatamach airson ìomhaighean soilleir a bhith a 'faighinn ìomhaighean soilleir de na comets.Mion-sgrùdadh microcopy agus ìomhaigh
● A 'taghadh an Miocroscop ceart
Tha feum air miocroscomp fluorescence a tha a 'faighinn a-steach le seata sìolachaidh iomchaidh airson a bhith a' faicinn DNA le a bhith a 'lorg DNA. Tagh miocroscop le rùn àrd agus siostam camara comasach air ìomhaighean mionaideach a ghlacadh de na comets.● A 'glacadh àrd - ìomhaighean càileachd
Glacaidh ìomhaighean de Cho-dhiù 50 a 'tighinn gach sleamhnag gus dèanamh cinnteach gu bheil e làidir. Dèanamh cinnteach gu bheil daoine a 'soilleireachadh agus a' cuimseachadh gus artifacts a sheachnadh. Faodaidh calmachadh ceart a 'mhiocroscope agus suidheachaidhean camara cur gu mòr air càileachd ìomhaigh.● Bathar-bog airson sgrùdadh comet
Tha grunn phrògraman bathar-bog rim faighinn airson sgrùdadh a dhèanamh air an sgrùdadh a dhèanamh, leithid Cometscore agus Casp. Bidh na prògraman sin a 'tomhas paramadairean mar fhad isada de dhian earbaill, agus mionaid earbaill, a tha deatamach airson milleadh DNA a mheudachadh.A 'cur dragh air cùisean cumanta
● Duilgheadasan cumanta
Am measg nan cùisean cumanta ann an assays a 'toirt a-steach sluasaid cruinneachaidh àrd-dheas, cruthachadh ritt ìosal, agus toraidhean neo-chunbhalach eadar sleamhnagan. Faodaidh na duilgheadasan sin a shladh bho dhiofar àiteachan, a 'toirt a-steach ullachadh cealla bhochd, ullachaidh gel sùla, agus lysis ceàrr no lysrophorphoresis.● Fuasglaidhean agus ceumannan casg
Gus fluorescence làn-fhiosrachaidh a lasachadh, dèanamh cinnteach gu bheil gach neach-riaghlaidh agus na gelsan uile saor bho truaillearan. Airson cruthachadh ìosal, dearbhaich gu bheil an comas obrachaidh cealla àrd, agus tha suidheachaidhean luath a 'dèanamh as fheàrr. Tha ullachadh sleamhnag agus protocol domhainn leantainneach a 'toirt prìomh cheumannan dìonach.● A 'dèanamh cinnteach à ath-riochdachadh agus mionaideachd
Feumaidh coileanadh ath-riochdachadh ann an Astràilich Astos Indesation Clòstacol agus dearbhadh cunbhalach air gach ceum. Gu cunbhalach a 'calibration, cleachdadh àrd-ghoireasan ath-sheasaidhean càileachd, agus a' cumail suas clàran mionaideach de gach cumhachan deuchainn gus dèanamh cinnteach gu bheil iad ceart.Toraidhean dàta agus aithris
● A 'dèanamh anailis air paramadairean earbaill
Am measg nam prìomh bhuidhneanùthan airson milleadh DNA a tha a 'tomhas fad a' tomhas fad, a tha a 'nochdadh fad imrich DNA, agus dian earball, a tha a' comharrachadh na tha de DNA san earball air an earball. Tha a 'mhionaid earball ollaidh, tomhais measgaichte, cuideachd air a chleachdadh gu cumanta cuideachd.● Beachdachaidhean Staitistigeil ann an aithris dàta
Tha mion-sgrùdadh staitistigeil ceart a tha ceart airson mìneachadh dàta. Cleachd deuchainnean staitistigeil iomchaidh gus coimeas a dhèanamh eadar ìrean milleadh DNA eadar diofar bhuidhnean sampall. Dèanamh cinnteach gu bheil dàta bho ioma-shleamhnagan agus na deuchainnean air an toirt seachad airson caochlaideach.● A 'taisbeanadh agus a' mìneachadh co-dhùnaidhean
Thoir seachad do thoraidhean ann an dòigh shoilleir agus pongail, a 'cleachdadh grafaichean agus clàran gus prìomh thoraidhean a nochdadh. Beachdaich air buaidh air na h-ìrean milleadh DNA a chunnaic ìrean milleadh DNA agus a 'chomas air an t-siostam bith-eòlasach fo sgrùdadh.Co-dhùnadh: A 'coileanadh àrd - sleamhnagan comet as t-Urgasy
Ag ullachadh àrd - Bidh sloinnidhean asyay càileachd a 'toirt aire do sgrùdadh cumhachdach air taghadh cealla, ullachaidh ge, eleclerophoresis, staining, agus mion-sgrùdadh ìomhaigh. Feumaidh gach ceum a bhith mothachail air agus àbhaisteach gus dèanamh cinnteach gu bheil toraidhean earbsach agus ath-sgrìobhte. Le bhith a 'co-obrachadh le solaraichean is luchd-saothrachaidh faodaidh solaraichean sleamhnadair agus luchd-saothrachaidh càileachd do asail le bhith a' toirt seachad stuthan gu ìre agus taic theicnigeach.● Mu dheidhinnIphoseBioistean-bith -ineach
Tha prìomh-oifis ann an ceann a tuath na Cuimrigh, Pennsylvania na "Bienylviens tha" nobhail, nobhail, agus ùr-ghnàthach, agus seirbheisean teicnigeach de choiseachaidhean bith-eòlasach-eòlasach. Le bhith a 'leigeil seachad eòlas farsaing agus dìoghras airson rannsachadh saidheansail, tha ar Sgioba Saidheansail de chòrr air 50 eòlaiche eòlach air an t-saoghal air feadh an oidhirpean saidheansail gus na h-amasan rannsachaidh aca a choileanadh. A 'leantainn air an R & D air leth freagarrach le "Dìomhaireachd ùr-ghnàthach bha", a' cumail sùil air an àm ri teachd, ann an taighean-bathair, agus com-pàirtichean seòlta - a 'còmhdach còrr air 12,000 meatair ceàrnagach.Ùine a 'phuist: 2024 - 08 - 28 14:05:21