K: Hogyan válasszam a mikroszómákat és a májsejteket az anyagcsere -stabilitási vizsgálatokhoz? Kiválaszthatok -e csak egyet a követelmény teljesítéséhez?
V: A metabolikus stabilitási vizsgálatban a májmikroszómák vagy a májsejtek megválasztása elsősorban a vegyületek metabolikus tulajdonságaitól függ, ahol a magas anyagcsere -sebességgel rendelkező személyt választják. Általánosságban elmondható, hogy a máj mikroszómái előnyösek, különösen akkor, ha a vegyület molekulái több víz oldható, és egy - fázisú metabolizmus a fő metabolikus út (különösen a CYP -n keresztül). A hepatociták felhasználhatók kísérletekhez, ha két - fázisú anyagcserére bizonyíték van, mint a fő út, a hidrolízis, mint a fő metabolikus út, a magas nem -specifikus protein -kötés a máj mikroszómáiban, és a máj mikroszómáiban az anyagcsere nem nyilvánvaló. Általában egy metabolikus rendszert lehet választani az igények kielégítésére; Ha a feltételek minden szempontból lehetővé teszik, akkor határozottan a legjobb, ha egyszerre választunk mindkét rendszert.
K: Miért szükséges az elsődleges májsejtek felhasználása az enzim -indukciós vizsgálathoz?
V: A CYP enzim - indukált vizsgálatnak a "transzkripció", a "transzláció" -ról a "Post - a protein transzlációs módosítása" -ra kell mennie, hogy aktív CYP enzimfehérjét kapjon. Ezért a tesztrendszernek májsejteknek, nem pedig májmikroszómáknak vagy S9 májnak kell lennie.
K: Miért kell három donor humán primer májsejtet választanom az enzim indukciós vizsgálatához?
V: A kábítószer -interakciókra vonatkozó iránymutatások bevezetése szerint legalább három donort kell használni, és az egyes donorok indukciós eredményét külön kell értékelni. A statisztikailag szignifikáns eredmények elérése mellett a három donor megválasztása a kísérlethez is fontosabb az egyéni variációk értékeléséhez. Ha legalább egy donor eredménye meghaladja az előre meghatározott küszöböt, akkor a kábítószer -jelölt indukálható lehet, és követheti az értékelést.
K: Miért összpontosítson csak a CYP enzim indukciójára, és nem az UGT enzim indukciójára?
V: A CYPáz -indukcióra való összpontosítás oka az, hogy a CYPáz indukciójának mechanizmusát tisztábban megvizsgálták. Más szavakkal, az UGTáz indukciójának vizsgálatának oka az, hogy a mechanizmus továbbra sem tisztázott; Ez azonban nem azt jelenti, hogy az UGTáz nem indukálódik. Az iránymutatások azt is kijelentik, hogy nincs szabványosított osztályozási rendszer a transzporterek induktoraira vagy inhibitoraira és a II. Fázisú metabolizmus enzimekre.
K: Meddig lehet túlélni az újraélesztést követően, és mennyi ideig lehet a tapadó primer májsejtek fennmaradni, és mennyi ideig lehet fenntartani a hepatocitákat az újraélesztés utáni tapadási tenyészet nélkül?
V: A pasztőrözött primer májsejteket általában enzim -indukciós vizsgálatokhoz használják. A sejtek visszanyerése után a sejteket lemezen elterjedő tápközegben szuszpendálják, a megfelelő koncentrációhoz igazítják, és kollagénben tenyésztett tenyésztőkben tenyésztjük; Ezután a sejteket 4 ~ 6 órán belül pasztőrözhetik. Miután a sejteket a falhoz rögzítették, a karbantartási tápközeget cserélik és 18 órán át tartják, hogy biztosítsák a sejtállapot maximális visszaállítását. Ezután enzim -indukciós vizsgálat elvégezhető az anyagcsere -aktivitás és az mRNS indukciós szintjének kimutatására. A teljes ciklus szempontjából a májsejtek a fali betartást követő 6 ~ 7 napig fenntarthatók. Az idő múlásával a sejtfal tapadási állapota romlik, és a sejtek leválnak és felfüggesztenek.
Ha a tapadó májsejteket nem tenyésztik, akkor ellenőrizzük, hogy 4 ~ 6 órán belül jó állapotban tarthatók -e. Még nem végeztünk ellenőrzést hosszabb ideig.
K: A hepatociták szuszpenziós és tapadó sejtekként is használhatók, az alkalmazott különféle táptalajoktól függően?
V: A szilárd szövetekből és szervekből származó sejtek legtöbb sejtje fallal rendelkezik, de nem minden sejt van fallal, ha - in vitro -ban tenyésztik. Hogy a sejtek fali -e -e - tapadó vagy sem, a sejtek állapotától függ; Ugyanakkor a fal - tapadó sejteknek specifikus tenyésztési tápközegre és néhány speciális pro - sejtadhéziós anyagra (például ramnogelinogén, laminin, fibronektin, szérum expanziós faktor) van szükségük, amelyek részt vehetnek a sejtek kötődésének folyamatában. Összegezve, a tapadó sejtek szuszpenziós sejtekként használhatók, de a szuszpenziós sejtek nem feltétlenül állnak rendelkezésre tapadó felhasználásra.
K: Milyen előnyei/hátrányai vannak a tapadó fali versek szuszpenziós májsejtek használatának? Milyen döntési kritériumok vannak?
V: Miután a májsejteket izolálják, szuszpenzióban vagy tapadó falban tenyészthetők. A citokróm P450 enzim aktivitása szuszpenzióval tenyésztett primer májsejtekből a leginkább összhangban áll az IN - vivo -val az első 4 ~ 6H -nál, majd az idő meghosszabbításával gyorsan csökken. Ezért a szuszpenziós májsejteket általában metabolikus stabilitási vagy metabolitprofil -vizsgálathoz használják. A tapadó falban tenyésztett primer májsejtek elegendő idővel rendelkeznek a károsodásból való visszatéréshez, hogy fenntartsák a normál májsejtek biológiai tulajdonságait és anyagcseréjét. Ezért általában enzim -indukciós vizsgálatokhoz, gyógyszer citotoxicitási vizsgálatokhoz, lassú metabolizáló gyógyszerek metabolikus stabilitásához vagy termék következtetési vizsgálatokhoz használják.
Jelenleg nem nyújtunk weboldal online vásárlási szolgáltatást. A regisztráció és a bejelentkezés után a bevásárlókosárhoz hozzáadott termékek csak referenciaként szolgálnak. Ha meg kell vásárolnia termékeinket, kérjük, hagyja el elérhetőségi adatait a Contact Us csatornán keresztül, és időben kapcsolatba lépünk Önnel, hogy teljesítsük szolgáltatásainkat.
Q ： Hogyan befolyásolja a nem specifikus protein -kötés a teszt eredményeit?
A ： Ha a gyógyszerjelölt nem - nem kötődik a mikroszomális fehérjékhez, ez megváltozott kinetikai paramétereket eredményez. Ahogy a fehérjekoncentráció növekszik, a KM érték növekszik, ami alacsony feltételezett belső clearance -t eredményez. Ezenkívül a gyógyszerjelöltnek a mikroszómák fehérjékéhez való kötődése a különféle laboratóriumok és különböző rendszerek eredményeiben nagy eltéréseket eredményezhet.
Q ： A májmikroszomális fehérje ajánlott koncentrációja az I. vagy II. Fázisú metabolikus stabilitási készlet használati útmutatójában 0,1 mg/ml - 1 mg/ml, ez azt jelenti, hogy ha májmikroszómákat használ, még mindig szükség van arra, hogy jóval hígítsák őket, mielőtt a rendszerhez hozzáadnák őket?
A: Először nincs szükség a máj mikroszómáinak hígítására; A máj mikroszómáinak koncentrációja a készletben 20 mg/ml, és a máj mikroszómáinak végső koncentrációja a tesztrendszerben 0,1 - 1 mg/ml, ami arányosan hozzáadható.
K ： Mi az ajánlott sejtsűrűség az elsődleges májsejtek metabolikus stabilitási vizsgálatához? A clearance kiszámítása megegyezik -e a májmikroszómákkal?
A ： Az elsődleges májsejtes metabolikus stabilitási vizsgálat az ajánlott sejtsűrűség 0,5–2 × 106 A sejtek/ml, valamint a máj mikroszomális metabolikus stabilitási vizsgálatának eredményeinek feldolgozása és feldolgozása következetes.
K ： Melyek a fő összetevők a PBS -pufferben? Tartalmazza a KCL -t és a NaCl -t?
A ： A PBS pufferünk fő alkotóelemei K2HPO4 És KH2PO4, és mentesek a KCL -től és a NaCl -től.
K ： Mi a foszfátpufferek célja? Miért van szüksége foszfátra?
A ： A foszfátpuffereket a fiziológiai környezet utánozására választják, és a foszfát az egyik legfontosabb pufferpár a test folyadékkörnyezetének fenntartásához.
Q ： Mi az enzim szokásos beállítása - indukált receptor koncentráció? Van -e megoldás, ha a tesztelni kívánt rendszer oldhatósága gyenge?
A ： Az enzim indukciós vizsgálatát 3 különböző koncentrációval kell felállítani, a koncentráció szintjének fedeznie kell az emberek várható hatékony vérkoncentrációját, és a legmagasabb koncentrációt úgy választják meg, hogy legalább egy nagyságrenddel magasabb, mint az emberben az átlagos hatékony vér gyógyszerkoncentráció. Ha a vizes fázisban az oldhatóság gyenge, akkor a szerves oldószert választhatjuk oldószerként, pl. DMSO, de ellenőrizni kell a rendszerhez hozzáadott szerves oldószer mennyiségét.
Q ： A metabolikus stabilitási vizsgálatokban szükség van -e két tesztrendszert, a májmikroszómát és az elsődleges májsejteket a teszteléshez?
A ： A májmikroszómák szinte gömb alakú membrán vezikulumok, mint például az önmagát képződött struktúrák - fragmentált endoplazmatikus retikulum fúziója, amelyet a hepatikus szövetek homogenizációja és differenciális centrifugálása során kaptak, és tartalmaznak CYP450 enzimeket és néhány biphaszikus enzimeket, E.G., Ugts. Az elsődleges májsejtek (PHC -k) az állati májból való közvetlen izolálás után közvetlenül tenyésztettek májsejtek, amelyek alapvetően fenntartják a máj metabolikus funkcióit, különösen jobban megőrizve az enzimszintet az in vivo -val összhangban. A metabolikus stabilitási tanulmányban nem kell figyelembe venni a költségeket, és két tesztrendszert lehet kiválasztani a teszthez egyszerre; vagy a megfelelő tesztrendszer kiválasztható a vegyület metabolikus tulajdonságainak megfelelően, és az elv az, hogy melyik rendszernek van magas anyagcsere -sebessége. Általában véve a májmikroszómák a legjobb választás, ha a vegyület molekulái több víz, és egy - fázisú metabolizmus a fő metabolikus út (különösen a CYP -n keresztül); Ha a fő út két - fázisú metabolizmus, akkor a hidrolízis a fő metabolikus út, a májmikroszómákban a nem specifikus proteinkötés nagyon magas, és a metabolizmus nem egyértelmű a májmikroszómákban, a teszt primer hepatocitákkal végezhető.
Q ： A mikroszómák koncentrációját vizsgálják -e a metabolikus stabilitási tesztben? Mi a túl magas vagy túl alacsony hatása?
A ： A metabolikus stabilitási tesztben a fehérjekoncentráció szintén befolyásolja az anyagcserét, általában választja a 0,1 mg/ml ~ 1 mg/ml mikroszomális fehérjekoncentrációt, a specifikus választást, hogy mennyi fehérjekoncentrációt kell választani a vegyület saját metabolikus tulajdonságai szerint. A túl magas a mikroszomális fehérje koncentrációja a gyógyszer nem specifikus kötődéséhez vezet a mikroszomális fehérjéhez; Míg a túl alacsony a mikroszomális fehérje koncentrációja a gyógyszer jelentéktelen metabolizmusához vezethet.