ՀՏՀ

- Ինչպես պետք է ընտրեմ միկրոզներ եւ հեպատոցիտներ նյութափոխանակության կայունության ուսումնասիրությունների համար: Կարող եմ ընտրել նրանցից միայն մեկը `պահանջը կատարելու համար:

Ա. Մեխաբոլիկ կայունության ուսումնասիրության մեջ լյարդի միկրոհագուստի կամ հեպատոցիտների ընտրությունը հիմնականում կախված է միացությունների նյութափոխանակության հատկություններից, որոնցում ընտրվում է բարձր նյութափոխանակության բարձր մակարդակով: Ընդհանուր առմամբ, գերակշռում են լյարդի միկրոզոմները, մանավանդ, երբ բարդ մոլեկուլներն ավելի շատ ջուր են - Լուծելի է եւ մեկ - Փուլետային նյութափոխանակությունը (հատկապես CYP- ի միջոցով): Հեպատոցիտները կարող են օգտագործվել փորձերի համար, երբ կա երկուի ապացույցներ: Մետալիզմը, որպես հիմնական ուղի, հիդրոլիզատոր, որպես հիմնական նյութափոխանակության մայրիկ, լյարդի միկրոհագուստի մեջ լիարժեք չլինի: Սովորաբար, կարիքները բավարարելու համար կարող է ընտրվել մեկ նյութափոխանակության համակարգ. Եթե ​​բոլոր ասպեկտների պայմանները թույլ են տալիս, միանշանակ լավագույնն է ընտրել երկու համակարգերը միաժամանակ:

Հ. Ինչու է անհրաժեշտ օգտագործել ֆերմենտային ինդուկցիայի համար առաջնային հեպատոցիտներ:

- Cyp- ի ֆերմենտ - Ներմուծվող փորձարկումը պետք է գնա «տառադարձումից», «Թարգմանություն» «գրառումը» սպիտակուցի ձեւափոխումը «ակտիվ CYP ֆերմենտի սպիտակուց ստանալու համար: Հետեւաբար, թեստային համակարգը պետք է լինի լյարդի բջիջներ, ոչ թե լյարդի միկրոօժամներ կամ լյարդի S9:

Հ. Ինչու ես պետք է ընտրեմ երեք դոնոր մարդկային առաջնային հեպատոցիտներ ֆերմենտային ինդուկցիայի համար:

- Թմրամիջոցների փոխազդեցության ուղեցույցների ներկայացման համաձայն, առնվազն երեք դոնոր պետք է օգտագործվի, եւ յուրաքանչյուր դոնորի ինդուկցիոն արդյունքը պետք է գնահատվի առանձին: Վիճակագրական նշանակություն ունեցող արդյունքների արտադրությունից բացի, փորձի համար երեք դոնորների ընտրությունը նույնպես ավելի կարեւոր է ինտերիշխանության գնահատման համար: Եթե ​​գոնե մեկ դոնորից արդյունքը գերազանցում է կանխորոշված ​​շեմն, թմրանյութերի թեկնածուն կարող է լինել անպարկելի եւ հետեւել - Պահանջվում է գնահատումը:

Հ. Ինչու կենտրոնանալ միայն CYP ֆերմենտի ինդուկցիայի վրա եւ ոչ թե UGT ֆերմենտային ինդուկցիայի վրա:

- Cypase- ի ինդուկցիայի վրա կենտրոնանալու պատճառը այն է, որ Cypase- ի ինդուկցիայի մեխանիզմը ավելի պարզ ուսումնասիրվել է: Այլ կերպ ասած, Ugtase Induction- ի ուսումնասիրությունը չպահանջելու պատճառը այն է, որ մեխանիզմը դեռ պարզ չէ. Այնուամենայնիվ, սա չի նշանակում, որ ugtase- ը չի առաջադրվի: Ուղեցույցները նշում են նաեւ, որ չկա ստանդարտացված դասակարգման համակարգ, ինչպես նաեւ տրանսպորտային միջոցների եւ II փլեյնաբիզմի ֆերմենտների ինդուկցիաների կամ խանգարողների համար:

Հ. Որքան ժամանակ կարող է գոյատեւել առաջնային հեպատոցիտները վերակենդանացումից հետո, եւ որքան ժամանակ կարող է պահպանվել հեպատոցիտները, վերակենդանացումից հետո առանց հետեւողական մշակույթի:

- Պաստերիզացված առաջնային հեպատոցիտները հիմնականում օգտագործվում են ֆերմենտային ինդուկցիայի փորձերի համար: Բջջային վերականգնումից հետո բջիջները կասեցված են ափսեի տարածման մեջ, հարմարեցված են համապատասխան համակենտրոնացման եւ կոլագենում մշակված - ծածկված ափսեներ; Այնուհետեւ բջիջները կարող են պաստառապատվել 4 ~ 6 ժամվա ընթացքում: Բջիջները պատին կցելուց հետո պահպանման միջոցը փոխարինվում եւ պահպանվում է 18 ժամվա ընթացքում `բջջային վիճակի առավելագույն վերականգնումն ապահովելու համար: Հաջորդը, ֆերմենտային ինդուկցիայի փորձարկումը կարող է իրականացվել նյութափոխանակության գործունեության եւ MRNA ինդուկցիայի մակարդակի հայտնաբերման համար: Ամբողջ ցիկլի տեսանկյունից հեպատոցիտները կարող են պահպանվել պատի հավատարիմությունից 6 ~ 7 օրվա ընթացքում: Ժամանակն անցնում է, բջջային պատի հավատարմության վիճակը վատթարանում է, եւ բջիջները կհեռանան եւ կասեցնում:

Եթե ​​հավատարիմ հեպատոցիտները չեն մշակվում, մենք հաստատեցինք, որ դրանք կարող են պահպանվել լավ վիճակում 4 ~ 6 ժամվա ընթացքում: Մենք դեռ չենք իրականացրել ստուգում ավելի երկար ժամանակահատվածով:

Հ. Հեպատոցիտները կարող են օգտագործվել ինչպես կասեցումը, այնպես էլ հավատարիմ բջիջները, կախված մշակ մշակույթի տարբեր լրատվամիջոցներից:

- Կոշտ հյուսվածքներից եւ օրգաններից բջիջներից շատերը պատված են, բայց բոլոր բջիջները պարիսպ են, երբ մշակվում են - Vitro: Անկախ նրանից, թե բջիջները պատ են - Կատարված, թե ոչ, կախված է իրենք իրենց բջիջների վիճակից. Միեւնույն ժամանակ: Եզրափակելով, հավատարիմ բջիջները կարող են օգտագործվել որպես կասեցման բջիջներ, բայց կասեցման բջիջները պարտադիր չէ, որ մատչելի լինեն հավատարիմ օգտագործման համար:

Հարց. Որոնք են հավատարիմ պատի համարների կասեցման հեպատոցիտների օգտագործման առավելությունները / թերությունները: Որոնք են որոշման չափանիշները:

Հեպատոցիտներ մեկուսացված լինելու մասին, դրանք կարող են կառուցվել կասեցման կամ հավատարիմ պատի մեջ: Cytochrome P450 ֆերմենտի գործունեությունը կասեցման մեջ գտնվող առաջնային հեպատոցիտներից առավել համահունչ է - Առաջին 4 ~ 6 ժամվա ընթացքում - Vivo- ն, այնուհետեւ արագորեն նվազում է ժամանակի երկարաձգմամբ: Հետեւաբար, կասեցման հեպատոցիտները հիմնականում օգտագործվում են նյութափոխանակության կայունության ուսումնասիրության կամ նյութափոխանակության պրոֆիլավորման ուսումնասիրության համար: Կատարվող պատի մեջ մշակված առաջնային հեպատոցիտները բավարար ժամանակ ունեն վերականգնվել վնասներից `նորմալ հեպատոցիտների կենսաբանական բնութագրերը եւ նյութափոխանակության ակտիվությունը պահպանելու համար: Հետեւաբար, դրանք հիմնականում օգտագործվում են ֆերմենտային ինդուկցիոն ուսումնասիրությունների, թմրամիջոցների ցիտոտոքսիկության ուսումնասիրությունների, դանդաղ նյութափոխանակող դեղերի կամ արտադրանքի եզրակացության նյութափոխանակության կայունության համար:

Ներկայումս մենք չենք տրամադրում վեբ-էջի առցանց գնումների ծառայություն: Գրանցվելուց եւ մուտքից հետո զամբյուղին ավելացված արտադրանքները միայն հղման համար են: Եթե ​​Ձեզ անհրաժեշտ է գնել մեր արտադրանքը, խնդրում ենք թողարկել ձեր կոնտակտային տվյալները կապի միջոցով ԱՄՆ ալիքով, եւ մենք ժամանակին կկապվենք ձեզ հետ `մեր ծառայությունները լրացնելու համար:

Հ. Ինչպես է ոչ - հատուկ սպիտակուցային կապը ազդում թեստի արդյունքների վրա:

- Եթե թմրանյութերի թեկնածուն կապի է ոչ-ոքի, մասնավորապես միկրոզոմեական սպիտակուցներ, դա հանգեցնում է փոփոխված կինետիկ պարամետրերի: Քանի որ սպիտակուցների համակենտրոնացումը մեծանում է, կմ-ի արժեքը մեծանում է, ինչը հանգեցնում է ցածր ենթադրյալ ներգոհության մաքրման: Բացի այդ, թմրանյութերի թեկնածուի պարտադիրությունը միկրոզոմներում կարող է հանգեցնել տարբեր տատանումների, տարբեր լաբորատորիաների եւ տարբեր համակարգերի արդյունքների:

Հարց. Լյարդի միկրոոզիտային սպիտակուցի առաջարկվող կոնցենտրացիան I I II փուլի «II մետաբոլային կայունության հավաքածու» - ը 0,1 մգ / մլ է:

Ա. Պետք չէ նախ եւ առաջ ջրբաժանային միկրոզոմները նոսրացնել. Հավաքածուի մեջ գտնվող հեպատիկ միկրոմսի կոնցենտրացիան կազմում է 20 մգ / մլ, իսկ թեստային համակարգում հեպատիկ միկրոսոմների վերջնական կենտրոնացումը 0,1 - 1 մգ / մլ, որը կարելի է ավելացնել համամասնությամբ:

Հարց. Որն է առաջնային հեպատոցիտների նյութափոխանակության կայունության փորձարկման առաջարկվող բջջային խտությունը: Արդյոք մաքրման հաշվարկը նույնն է, ինչ լյարդի միկրոօջախների համար:

Առաջարկվող բջջային խտությունը առաջնային հեպատոցիտի մետաբոլիկ կայունության գնահատման համար `0,5-ից 2 × 10⁶ Բջիջներ / ML, եւ մաքսազերծման հաշվարկները եւ լուրային Mic յուրիոմեական նյութափոխանակության կայունության արդյունքների վերամշակումը հետեւողական են:

Հարց. Որոնք են հիմնական բաղադրիչները ձեր PBS բուֆերի մեջ: Արդյոք այն պարունակում է KCL եւ NACL:

- Մեր PBS բուֆերի հիմնական բաղադրիչներն են k₂HPO₄ եւ Խ₂PO₄եւ անվճար են KCL- ից եւ NACL- ից:

- Որն է ֆոսֆատ բուֆերների նպատակը: Ինչու է ձեզ հարկավոր ֆոսֆատ:

Ֆոսֆատի բուֆերներն ընտրվում են ֆիզիոլոգիական միջավայրը ընդօրինակելու նպատակով, իսկ ֆոսֆատը ամենակարեւոր բուֆերային զույգերից մեկն է `մարմնի հեղուկ միջավայրը պահպանելու համար:

Հարց. Որն է ֆերմենտի սովորական կարգավորումը - Անցկացված ընկալիչների համակենտրոնացում: Կա որեւէ լուծում, եթե փորձարկվելու համակարգի լուծելիությունը աղքատ է:

Ա. Enzyme ինդուկցիայի փորձը պետք է ստեղծվի 3 տարբեր կոնցենտրացիաների միջոցով, համակենտրոնացման մակարդակը պետք է ծածկի մարդկանց մեջ արյան թմրանյութերի արդյունավետ կոնցենտրացիան, եւ ամենաբարձր կոնցենտրացիան ընտրվում է մարդկանց մեջ միջինից բարձրագույն դեղերի համակենտրոնացում: Եթե ​​ջրային փուլում լուծելը վատ է, ապա օրգանական լուծիչը կարող է ընտրվել որպես դրա լուծիչ, օրինակ: DMSO, բայց համակարգին ավելացված օրգանական լուծիչի չափը պետք է վերահսկվի:

Հ. Մեխաբոլիկ կայունության ուսումնասիրություններում անհրաժեշտ է օգտագործել երկու փորձարկման համակարգ, լյարդի միկրոզմներ եւ առաջնային հեպատոցիտներ, փորձարկման համար:

Հեպատիկ միկրոզոմները գրեթե գնդաձեւ թաղանթային են: Առաջնային հեպատոցիտները (ԱԱՊ) Հեպատոցիտներ են, որոնք կուլտուրական են, որոնք ունեն կենդանական լյարդից ուղղակի մեկուսացումից անմիջապես հետո, ինչը հիմնականում պահպանում է լյարդի նյութափոխանակության գործառույթները, հատկապես ավելի լավ է պահպանել ֆերմենտային մակարդակները, որոնք համահունչ են ֆերմենտային մակարդակի վրա: Մետրաբոլիկ կայունության ուսումնասիրության մեջ անհրաժեշտ չէ հաշվի առնել ծախսը, եւ փորձարկման համար կարող են ընտրվել երկու փորձարկման համակարգ. Կամ համապատասխան թեստային համակարգը կարող է ընտրվել ըստ բաղադրության նյութափոխանակության հատկությունների, եւ սկզբունքն այն է, որ ընտրվում է բարձր նյութափոխանակության բարձր մակարդակ: Ընդհանուր առմամբ, լյարդի միկրոզիաները լավագույն ընտրությունն են, երբ բարդ մոլեկուլներն ավելի շատ ջուր են - Լուծելի է եւ մեկ - Փետաբոլիզմը նյութափոխանակության հիմնական ուղին է (հատկապես CYP- ի միջոցով). Երբ երկուսը - Մետաբոլիզմը հիմնական ուղին է, հիդրոլիզը հիմնական նյութափոխանակության ուղին է, ոչ էլ լյարդի միկրոօջախների հատուկ սպիտակուցը շատ բարձր է, թեստը կարող է իրականացվել առաջնային հեպատոցիտների միջոցով:

Հարց. Արդյոք նյութափոխանակության կայունության թեստում ուսումնասիրված միկրոմների կոնցենտրացիան է: Որն է չափազանց բարձր կամ շատ ցածր ազդեցությունը:

- Մետրաբոլիկ կայունության թեստում սպիտակուցի կոնցենտրացիան նույնպես կազդի նյութափոխանակության մակարդակի վրա, սովորաբար ընտրում է 0,1 մգ / մգ ~ 1 մգ / մլ-ի միկրոզոմիական սպիտակուցային կոնցենտրացիան: Մանրէկոսալական սպիտակուցի կոնցենտրացիան կհանգեցնի դեղամիջոցի հատուկ պարտադիր մասնիկ սպիտակուցին. Մինչդեռ շատ ցածր է միկրոզոմեական սպիտակուցի կոնցենտրացիան կարող է հանգեցնել թմրամիջոցների աննշան նյութափոխանակության: