T: Bagaimana saya harus memilih mikrosom dan hepatosit untuk studi stabilitas metabolik? Dapatkah saya memilih hanya satu dari mereka untuk memenuhi persyaratan?
A: Dalam studi stabilitas metabolisme, pilihan mikrosom hati atau hepatosit terutama tergantung pada sifat metabolisme senyawa, di mana yang dengan laju metabolisme tinggi dipilih. Secara umum, mikrosom hati lebih disukai, terutama ketika molekul senyawa lebih banyak air - larut dan satu metabolisme fase adalah jalur metabolisme utama (terutama melalui CYP). Hepatosit dapat digunakan untuk percobaan ketika ada bukti dari dua metabolisme fase sebagai jalur utama, hidrolisis sebagai jalur metabolisme utama, pengikatan protein nonspesifik tinggi dalam mikrosom hati, dan metabolisme dalam mikrosom hati tidak jelas. Biasanya, satu sistem metabolisme dapat dipilih untuk memenuhi kebutuhan; Jika kondisi dalam semua aspek memungkinkan, sebaiknya memilih kedua sistem secara bersamaan.
T: Mengapa perlu menggunakan hepatosit primer untuk uji induksi enzim?
A: Enzim CYP - Uji yang diinduksi perlu beralih dari "transkripsi", "terjemahan" ke "pasca - modifikasi translasi protein" untuk mendapatkan protein enzim CYP aktif. Oleh karena itu, sistem uji harus sel hati, bukan mikrosom hati atau hati S9.
T: Mengapa saya perlu memilih tiga donor hepatosit utama manusia untuk uji induksi enzim?
A: Menurut pengantar pedoman untuk interaksi obat, setidaknya tiga donor harus digunakan, dan hasil induksi dari setiap donor harus dievaluasi secara terpisah. Selain menghasilkan hasil yang signifikan secara statistik, pilihan tiga donor untuk percobaan juga lebih penting untuk menilai variasi inter -individu. Jika hasil dari setidaknya satu donor melebihi ambang batas yang telah ditentukan, kandidat obat dapat diinduksi dan evaluasi yang ditindaklanjuti.
T: Mengapa hanya fokus pada induksi enzim CYP dan bukan pada induksi enzim UGT?
A: Alasan untuk fokus pada induksi CYPASE adalah bahwa mekanisme induksi CYPASE telah dipelajari lebih jelas. Dengan kata lain, alasan untuk tidak memerlukan studi tentang induksi UGTase adalah bahwa mekanismenya masih belum jelas; Namun, ini tidak berarti bahwa UGTase tidak akan diinduksi. Pedoman ini juga menyatakan bahwa tidak ada sistem klasifikasi standar untuk penginduksi atau penghambat transporter dan enzim metabolisme fase II.
T: Berapa lama hepatosit primer dapat bertahan hidup setelah resusitasi, dan berapa lama hepatosit dapat dipertahankan tanpa budaya yang patuh setelah resusitasi?
A: Hepatosit primer yang dipasteurisasi umumnya digunakan untuk uji induksi enzim. Setelah pemulihan sel, sel ditangguhkan dalam media penyebaran pelat, disesuaikan dengan konsentrasi yang sesuai, dan dikultur dalam pelat kolagen - maka sel dapat dipasteurisasi dalam waktu 4 ~ 6 jam. Setelah sel -sel melekat pada dinding, media pemeliharaan diganti dan dipelihara selama 18 jam untuk memastikan pemulihan keadaan sel yang maksimal. Selanjutnya, uji induksi enzim dapat dilakukan untuk mendeteksi aktivitas metabolisme dan tingkat induksi mRNA. Dari perspektif seluruh siklus, hepatosit dapat dipertahankan selama 6 ~ 7 hari setelah kepatuhan dinding. Seiring berjalannya waktu, keadaan kepatuhan dinding sel memburuk, dan sel -sel akan melepaskan dan menangguhkan.
Jika hepatosit yang patuh tidak dikultur, kami telah memverifikasi bahwa mereka dapat dipertahankan dalam keadaan yang baik dalam waktu 4 ~ 6 jam. Kami belum melakukan verifikasi untuk jangka waktu yang lebih lama.
T: Hepatosit dapat digunakan sebagai suspensi dan sel yang patuh tergantung pada media kultur yang berbeda yang digunakan?
A: Sebagian besar sel dari jaringan padat dan organ berdinding, tetapi tidak semua sel berdinding ketika dikultur dalam - vitro. Apakah sel -sel itu melekat atau tidak tergantung pada keadaan sel itu sendiri; Pada saat yang sama, sel -sel dinding - yang patuh membutuhkan media kultur spesifik dan beberapa zat adhesi pro - sel khusus (mis., Rhamnogelinogen, laminin, fibronektin, faktor ekspansi serum) yang dapat berpartisipasi dalam proses perlekatan sel. Sebagai kesimpulan, sel yang patuh dapat digunakan sebagai sel suspensi, tetapi sel suspensi tidak harus tersedia untuk penggunaan yang patuh.
T: Apa kelebihan/kekurangan menggunakan hepatosit suspensi ayat dinding yang patuh? Apa kriteria keputusan?
A: Setelah hepatosit diisolasi, mereka dapat dikultur dalam suspensi atau di dinding yang patuh. Aktivitas enzim sitokrom P450 dari suspensi hepatosit primer yang dikultur paling konsisten dengan in - vivo untuk 4 ~ 6 jam pertama, kemudian berkurang dengan cepat dengan perpanjangan waktu. Oleh karena itu, hepatosit suspensi umumnya digunakan untuk studi stabilitas metabolik atau studi profil metabolit. Hepatosit primer yang dikultur di dinding yang patuh memiliki waktu yang cukup untuk pulih dari kerusakan untuk mempertahankan karakteristik biologis dan aktivitas metabolisme hepatosit normal. Oleh karena itu, mereka umumnya digunakan untuk studi induksi enzim, studi sitotoksisitas obat, stabilitas metabolik obat metabolisme lambat atau studi inferensi produk.
Saat ini, kami tidak menyediakan layanan pembelian online halaman web. Produk yang ditambahkan ke keranjang belanja setelah pendaftaran dan login hanya untuk referensi. Jika Anda perlu membeli produk kami, silakan tinggalkan informasi kontak Anda melalui saluran hubungi US, dan kami akan menghubungi Anda tepat waktu untuk menyelesaikan layanan kami.
Q ： Bagaimana non - pengikatan protein spesifik mempengaruhi hasil tes?
A ： Jika kandidat obat mengikat non - khusus pada protein mikrosomal, ini menghasilkan parameter kinetik yang diubah. Dengan meningkatnya konsentrasi protein, nilai KM meningkat, menghasilkan pembersihan intrinsik yang diduga rendah. Juga, pengikatan kandidat obat dengan protein dalam mikrosom dapat menghasilkan variasi besar dalam hasil dari berbagai laboratorium dan sistem yang berbeda.
Q ： Konsentrasi protein mikrosomal hati yang direkomendasikan dalam manual instruksi kit stabilitas metabolisme fase I atau fase II adalah 0,1 mg/ml - 1 mg/ml, apakah ini berarti bahwa ketika menggunakan mikrosom hati, masih perlu untuk mencairkannya dengan baik sebelum menambahkannya ke sistem?
A: Tidak perlu mencairkan mikrosom hati terlebih dahulu; Konsentrasi mikrosom hati dalam kit adalah 20 mg/mL dan konsentrasi akhir mikrosom hati dalam sistem uji adalah 0,1 - 1 mg/mL, yang dapat ditambahkan secara proporsional.
Q ： Apa kepadatan sel yang direkomendasikan untuk pengujian stabilitas metabolik hepatosit primer? Apakah perhitungan clearance sama seperti untuk mikrosom hati?
A ： Kepadatan sel yang disarankan untuk uji stabilitas metabolisme hepatosit primer adalah 0,5 hingga 2 × 106 Sel/mL, dan perhitungan clearance dan pemrosesan hasil uji stabilitas metabolisme mikrosomal hepatik konsisten.
Q ： Apa bahan utama dalam buffer PBS Anda? Apakah itu berisi KCL dan NaCl?
A ： Komponen utama buffer PBS kami adalah k2HPO4 dan KH2PO4, dan bebas dari KCL dan NaCl.
Q ： Apa tujuan buffer fosfat? Mengapa Anda membutuhkan fosfat?
A ： Buffer fosfat dipilih untuk tujuan meniru lingkungan fisiologis, dan fosfat adalah salah satu pasangan penyangga paling penting untuk mempertahankan lingkungan cairan tubuh.
Q ： Apa pengaturan biasa untuk konsentrasi reseptor enzim - yang diinduksi? Apakah ada solusi jika kelarutan sistem yang akan diuji buruk?
A ： Uji induksi enzim perlu diatur dengan 3 konsentrasi yang berbeda, tingkat konsentrasi perlu mencakup konsentrasi obat darah efektif yang diharapkan pada manusia, dan konsentrasi tertinggi dipilih untuk menjadi setidaknya satu urutan besarnya lebih tinggi dari konsentrasi obat darah efektif rata -rata pada manusia. Jika kelarutan dalam fase berair buruk, pelarut organik dapat dipilih sebagai pelarutnya, mis. DMSO, tetapi jumlah pelarut organik yang ditambahkan ke sistem perlu dikendalikan.
Q ： Dalam studi stabilitas metabolik, apakah perlu menggunakan dua sistem uji, mikrosom hati dan hepatosit primer, untuk pengujian?
A ： Mikrosom hepatik hampir spherical membran vesikel - seperti struktur yang dibentuk oleh retikulum endoplasma yang terfragmentasi yang diperoleh selama homogenisasi dan disrifugasi diferensial jaringan hati, dan mengandung enzim CYP450 dan beberapa enzim bip, e.g., E.g., E.g., E.g., E.G., E.G., E.G., E.G., E.G., E.G., E.G., E.G., E.G., yang ”. Hepatosit primer (PHCs) adalah hepatosit yang dikultur segera setelah isolasi langsung dari hati hewan, yang pada dasarnya mempertahankan fungsi metabolisme hati, terutama yang lebih baik menjaga kadar enzim yang konsisten dengan yang in vivo. Dalam studi stabilitas metabolik, tidak perlu mempertimbangkan biaya, dan dua sistem uji dapat dipilih untuk pengujian pada saat yang sama; atau sistem uji yang sesuai dapat dipilih sesuai dengan sifat metabolisme senyawa, dan prinsipnya adalah sistem mana yang memiliki laju metabolisme yang tinggi dipilih. Secara umum, mikrosom hati adalah pilihan terbaik ketika molekul senyawa lebih banyak air - larut dan satu metabolisme fase adalah jalur metabolisme utama (terutama melalui CYP); Ketika dua - fase metabolisme adalah jalur utama, hidrolisis adalah jalur metabolisme utama, pengikatan protein spesifik dalam mikrosom hati sangat tinggi, dan metabolisme tidak jelas dalam mikrosom hati, tes dapat dilakukan dengan menggunakan hepatosit primer.
Q ： Apakah konsentrasi mikrosom yang diperiksa dalam uji stabilitas metabolik? Apa efek dari terlalu tinggi atau terlalu rendah?
A ： Dalam uji stabilitas metabolisme, konsentrasi protein juga akan mempengaruhi laju metabolisme, biasanya memilih konsentrasi protein mikrosomal 0,1 mg/ml ~ 1 mg/mL, pilihan spesifik berapa banyak konsentrasi protein yang harus dipilih sesuai dengan sifat metabolisme senyawa sendiri. Konsentrasi protein mikrosomal yang terlalu tinggi akan menyebabkan pengikatan obat yang tidak spesifik ke protein mikrosomal; Sementara konsentrasi protein mikrosomal yang terlalu rendah dapat menyebabkan metabolisme obat yang tidak signifikan.