Q: როგორ უნდა ავირჩიო მიკროზომები და ჰეპატოციტები მეტაბოლური სტაბილურობის კვლევებისთვის? შემიძლია აირჩიოს მხოლოდ ერთი მათგანი, რომ შეასრულოს მოთხოვნა?
A: მეტაბოლური სტაბილურობის შესწავლისას, ღვიძლის მიკროზომების ან ჰეპატოციტების არჩევანი ძირითადად დამოკიდებულია ნაერთების მეტაბოლურ თვისებებზე, სადაც შეირჩევა მაღალი მეტაბოლური მაჩვენებელი. ზოგადად, ღვიძლის მიკროზომები სასურველია, განსაკუთრებით მაშინ, როდესაც ნაერთი მოლეკულები უფრო წყალია - ხსნადი და ერთი - ფაზის მეტაბოლიზმი არის ძირითადი მეტაბოლური გზა (განსაკუთრებით CYP- ის საშუალებით). ჰეპატოციტები შეიძლება გამოყენებულ იქნას ექსპერიმენტებისთვის, როდესაც არსებობს ორი - ფაზის მეტაბოლიზმის მტკიცებულება, როგორც ძირითადი გზა, ჰიდროლიზი, როგორც ძირითადი მეტაბოლური გზა, ღვიძლის მიკროზომებში მაღალი არასპეციფიკური ცილის დამაკავშირებელი და ღვიძლის მიკროზომებში მეტაბოლიზმი არ არის აშკარა. ჩვეულებრივ, შეიძლება შეირჩეს ერთი მეტაბოლური სისტემა საჭიროებების დასაკმაყოფილებლად; თუ ყველა ასპექტში არსებული პირობები საშუალებას იძლევა, ნამდვილად უმჯობესია აირჩიოთ ორივე სისტემა ერთდროულად.
Q: Why is it necessary to use primary hepatocytes for enzyme induction assay?
A: CYP ფერმენტი - გამოწვეული გამოკვლევა უნდა წავიდეს "ტრანსკრიპციიდან", "თარგმნიდან" "პოსტზე - ცილის მთარგმნელობითი მოდიფიკაცია", რათა მიიღოთ აქტიური CYP ფერმენტის ცილა. ამიტომ, ტესტის სისტემა უნდა იყოს ღვიძლის უჯრედები, არა ღვიძლის მიკროზომები ან ღვიძლის S9.
Q: Why do I need to choose three donor human primary hepatocytes for the enzyme induction assay?
პასუხი: ნარკომანიის ურთიერთქმედების სახელმძღვანელო პრინციპების დანერგვის თანახმად, მინიმუმ სამი დონორი უნდა იქნას გამოყენებული, ხოლო თითოეული დონორის ინდუქციის შედეგი უნდა შეფასდეს ცალკე. სტატისტიკურად მნიშვნელოვანი შედეგების წარმოების გარდა, ექსპერიმენტისთვის სამი დონორის არჩევანი ასევე უფრო მნიშვნელოვანია ინდივიდუალური ცვალებადობის შესაფასებლად. თუ მინიმუმ ერთი დონორის შედეგი აღემატება წინასწარ განსაზღვრულ ბარიერს, ნარკოტიკების კანდიდატი შეიძლება იყოს ინდუქციური და უნდა დაიცვას - up შეფასება.
Q: Why focus only on CYP enzyme induction and not on UGT enzyme induction?
პასუხი: CYPase ინდუქციაზე ფოკუსირების მიზეზი არის ის, რომ Cypase ინდუქციის მექანიზმი უფრო ნათლად იქნა შესწავლილი. სხვა სიტყვებით რომ ვთქვათ, Ugtase ინდუქციის შესწავლის მიზეზი არ არის ის, რომ მექანიზმი ჯერ კიდევ გაუგებარია; ამასთან, ეს არ ნიშნავს, რომ UGTASE არ გამოწვეულია. სახელმძღვანელო მითითებებში ასევე ნათქვამია, რომ არ არსებობს სტანდარტიზებული კლასიფიკაციის სისტემა ტრანსპორტირებისა და II ფაზის მეტაბოლიზმის ფერმენტების ინჰიბიტორებისთვის ან ინჰიბიტორებისთვის.
Q: რამდენ ხანს შეიძლება გადარჩეს პირველადი ჰეპატოციტების გადარჩენა რეანიმაციის შემდეგ და რამდენ ხანს შეიძლება შენარჩუნდეს ჰეპატოციტები რეანიმაციის შემდეგ ადექვატური კულტურის გარეშე?
პასუხი: პასტერიზირებული პირველადი ჰეპატოციტები ზოგადად გამოიყენება ფერმენტის ინდუქციის გამოკვლევებისთვის. უჯრედების აღდგენის შემდეგ, უჯრედები შეჩერებულია ფირფიტის გავრცელების საშუალო, რეგულირდება შესაბამის კონცენტრაციით და კულტივირებულია კოლაგენში - დაფარული ფირფიტები; შემდეგ უჯრედების პასტერიზაცია შესაძლებელია 4 ~ 6 საათში. მას შემდეგ, რაც უჯრედები მიმაგრებულია კედელზე, სარემონტო საშუალო შეიცვალა და შენარჩუნებულია 18 სთ -ზე, რათა უზრუნველყოს უჯრედის მდგომარეობის მაქსიმალური აღდგენა. შემდეგი, ფერმენტის ინდუქციური გამოკვლევა შეიძლება განხორციელდეს მეტაბოლური მოქმედებისა და mRNA ინდუქციის დონის გამოსავლენად. მთელი ციკლის თვალსაზრისით, ჰეპატოციტების შენარჩუნება შესაძლებელია კედლის დაცვით 6 ~ 7 დღის განმავლობაში. რაც დრო გადის, უჯრედის კედლის ადექვატური მდგომარეობა გაუარესდება და უჯრედები განშორდებიან და შეაჩერებენ.
თუ მიმდევარი ჰეპატოციტები არ არის კულტივირებული, ჩვენ დავადასტურეთ, რომ მათი შენარჩუნება შესაძლებელია კარგ მდგომარეობაში 4 ~ 6 საათში. ჩვენ ჯერ კიდევ არ ჩავატარეთ გადამოწმება უფრო გრძელი პერიოდის განმავლობაში.
კითხვა: ჰეპატოციტები შეიძლება გამოყენებულ იქნას როგორც სუსპენზიის, ასევე მიმდევრული უჯრედების მიხედვით, გამოყენებული სხვადასხვა კულტურის მედიის მიხედვით?
პასუხი: მყარი ქსოვილებისა და ორგანოების უჯრედების უმეტესობა კედელია, მაგრამ ყველა უჯრედი არ არის კედელი, როდესაც კულტივირებულია - vitro. არის თუ არა უჯრედები კედელი - ადექვატური თუ არა, ეს დამოკიდებულია თავად უჯრედების მდგომარეობაზე; ამავდროულად, კედელს - ადექვატურ უჯრედებს სჭირდებათ სპეციფიკური კულტურის საშუალო და რამდენიმე სპეციალური Pro - უჯრედების ადჰეზიური ნივთიერებები (მაგ., rhamnogelinogen, laminin, ფიბრონექტინი, შრატის გაფართოების ფაქტორი), რომელიც შეიძლება მონაწილეობდეს უჯრედების მიმაგრების პროცესში. დასკვნის სახით, ადექვატური უჯრედები შეიძლება გამოყენებულ იქნას როგორც სუსპენზიის უჯრედები, მაგრამ შეჩერების უჯრედები არ არის ხელმისაწვდომი ადექვატური გამოყენებისთვის.
_ რა არის უპირატესობები/უარყოფითი მხარეები, რომლებიც იყენებენ კედლის მიმდევარი ლექსების შეჩერების ჰეპატოციტებს? რა არის გადაწყვეტილების კრიტერიუმები?
პასუხი: ჰეპატოციტების იზოლირების შემდეგ, ისინი შეიძლება კულტივირებული იყოს შეჩერებით ან მიმდებარე კედელში. ციტოქრომ P450 ფერმენტის მოქმედება შეჩერებული კულტივირებული პირველადი ჰეპატოციტებისგან ყველაზე მეტად შეესაბამება - in vivo– ს პირველი 4 ~ 6H– სთვის, შემდეგ კი სწრაფად მცირდება დროის გახანგრძლივებით. ამრიგად, შეჩერების ჰეპატოციტები ზოგადად გამოიყენება მეტაბოლური სტაბილურობის შესწავლის ან მეტაბოლიტის პროფილის შესწავლისთვის. პირველადი ჰეპატოციტები, რომლებიც კულტივირებულ კედელშია კულტივირებული, აქვს საკმარისი დრო, რომ გამოჯანმრთელდეს დაზიანებისგან, რათა შეინარჩუნოს ნორმალური ჰეპატოციტების ბიოლოგიური მახასიათებლები და მეტაბოლური მოქმედება. აქედან გამომდინარე, ისინი ზოგადად გამოიყენება ფერმენტის ინდუქციური კვლევებისთვის, წამლების ციტოტოქსიურობის კვლევებისთვის, ნელი მეტაბოლიზაციის მედიკამენტების მეტაბოლური სტაბილურობით ან პროდუქტის დასკვნის კვლევებისთვის.
ამჟამად, ჩვენ არ გთავაზობთ ვებგვერდის ონლაინ შესყიდვის სერვისს. რეგისტრაციისა და შესვლის შემდეგ კალათაში დამატებული პროდუქტები მხოლოდ მითითებისთვისაა. თუ თქვენ გჭირდებათ ჩვენი პროდუქციის შეძენა, გთხოვთ, დატოვოთ თქვენი საკონტაქტო ინფორმაცია Contact US არხის საშუალებით და ჩვენ დროულად დაგიკავშირდებით ჩვენი სერვისების დასასრულებლად.
Q：How does non-specific protein binding affect test results?
A ： თუ ნარკოტიკების კანდიდატი აკავშირებს არა - კონკრეტულად მიკროზომულ ცილებს, ეს იწვევს კინეტიკური პარამეტრების შეცვლას. როგორც ცილის კონცენტრაცია იზრდება, კმ მნიშვნელობა იზრდება, რის შედეგადაც დაბალი სავარაუდო შინაგანი განბაჟება ხდება. ასევე, წამლის კანდიდატის მიკროზომებში ცილებთან დაკავშირებამ შეიძლება გამოიწვიოს სხვადასხვა ლაბორატორიების და სხვადასხვა სისტემის შედეგების დიდი ცვალებადობა.
Q ： ღვიძლის მიკროზომული ცილის რეკომენდებული კონცენტრაცია I ფაზის ან II ფაზის მეტაბოლური სტაბილურობის ნაკრები არის 0,1 მგ/მლ - 1 მგ/მლ, ეს ნიშნავს რომ ღვიძლის მიკროზომების გამოყენებისას, მაინც აუცილებელია მათი განზავება, სანამ მათ სისტემას დაამატებთ?
ა: პირველ რიგში არ არის საჭირო ღვიძლის მიკროზომების განზავება; ღვიძლის მიკროზომების კონცენტრაცია ნაკრებში არის 20 მგ/მლ, ხოლო ღვიძლის მიკროზომების საბოლოო კონცენტრაცია ტესტის სისტემაში არის 0.1 - 1 მგ/მლ, რაც შეიძლება დაემატოს პროპორციულად.
Q ： რა არის რეკომენდებული უჯრედის სიმკვრივე პირველადი ჰეპატოციტების მეტაბოლური სტაბილურობის ტესტირებისთვის? გაანგარიშების გაანგარიშება იგივეა, რაც ღვიძლის მიკროზომებისთვის?
： რეკომენდებული უჯრედის სიმკვრივე პირველადი ჰეპატოციტების მეტაბოლური სტაბილურობის გამოკვლევისთვის არის 0.5 -დან 2 × 10 -მდე6 უჯრედები/მლ, და კლირენსის გამოთვლები და ღვიძლის მიკროსომული მეტაბოლური სტაბილურობის გამოკვლევის შედეგების დამუშავება თანმიმდევრულია.
Q：What are the main ingredients in your PBS buffer? Does it contain KCl and NaCl?
A：The main components of our PBS buffer are K2HPO4 and KH2PO4, and are free of KCl and NaCl.
Q：What is the purpose of phosphate buffers? Why do you need phosphate?
ფოსფატის ბუფერები შეირჩევა ფიზიოლოგიური გარემოს მიბაძვის მიზნით, ხოლო ფოსფატი ერთ - ერთი ყველაზე მნიშვნელოვანი ბუფერული წყვილია სხეულის სითხის გარემოს შესანარჩუნებლად.
Q ： რა არის ჩვეულებრივი პარამეტრი ფერმენტისათვის - გამოწვეული რეცეპტორის კონცენტრაცია? არსებობს გამოსავალი, თუ შესამოწმებლად სისტემის ხსნადობა ცუდია?
ფერმენტის ინდუქციური გამოკვლევა უნდა შეიქმნას 3 სხვადასხვა კონცენტრაციით, კონცენტრაციის დონეს უნდა დაფაროს მოსალოდნელი ეფექტური სისხლის წამლის კონცენტრაცია ადამიანებში, ხოლო ყველაზე მაღალი კონცენტრაცია შეირჩევა, რომ მინიმუმ ერთი რიგი იყოს მასშტაბის უფრო მაღალი, ვიდრე ადამიანებში სისხლის საშუალო ეფექტური კონცენტრაცია. თუ წყალხსნარში ხსნადობა ცუდია, ორგანული გამხსნელი შეიძლება შეირჩეს როგორც მისი გამხსნელი, მაგ. DMSO, მაგრამ სისტემაში დამატებული ორგანული გამხსნელის ოდენობა უნდა იყოს კონტროლირებადი.
Q ： მეტაბოლური სტაბილურობის კვლევებში, აუცილებელია თუ არა ორი ტესტის სისტემის, ღვიძლის მიკროზომისა და პირველადი ჰეპატოციტების გამოყენება, ტესტირებისთვის?
ღვიძლის მიკროზომები თითქმის სფერული მემბრანული ვეზიკაა - მსგავსი სტრუქტურების მსგავსად, რომლებიც წარმოიქმნება ფრაგმენტული ენდოპლაზმული რეტიკულუმის მიერ წარმოებული ჰომოგენიზაციისა და ჰეპატიკური ქსოვილების დიფერენციალური ცენტრიფუგაციის დროს, და შეიცავს CYP450 ფერმენტებსა და ბიფაზური ფერმენტების, მაგ. პირველადი ჰეპატოციტები (PHCs) არის ჰეპატოციტები, რომლებიც კულტივირებულია ცხოველთა ღვიძლის უშუალო იზოლაციისთანავე, რაც ძირითადად ინარჩუნებს ღვიძლის მეტაბოლურ ფუნქციებს, განსაკუთრებით უკეთესად შეინარჩუნებს ფერმენტის დონეს, რომელიც შეესაბამება in vivo- ს. მეტაბოლური სტაბილურობის შესწავლისას, არ არის საჭირო ხარჯების განხილვა, ხოლო ტესტის ორი ტესტის სისტემა ერთდროულად შეიძლება შეირჩეს; ან შესაბამისი ტესტის სისტემა შეიძლება შეირჩეს ნაერთის მეტაბოლური თვისებების შესაბამისად, ხოლო პრინციპი არის ის, თუ რომელ სისტემას აქვს მაღალი მეტაბოლური მაჩვენებელი. ზოგადად, ღვიძლის მიკროზომები საუკეთესო არჩევანია, როდესაც რთული მოლეკულები უფრო წყალია - ხსნადი და ერთი - ფაზური მეტაბოლიზმი არის ძირითადი მეტაბოლური გზა (განსაკუთრებით CYP- ის საშუალებით); როდესაც ორი - ფაზის მეტაბოლიზმი არის მთავარი გზა, ჰიდროლიზი არის ძირითადი მეტაბოლური გზა, ღვიძლის მიკროზომებში არა - სპეციფიკური ცილის დამაკავშირებელი ძალიან მაღალია, ხოლო მეტაბოლიზმი ღვიძლის მიკროზომებში აშკარა არ არის, ტესტის ჩატარება შესაძლებელია პირველადი ჰეპატოციტების გამოყენებით.
Q ： არის თუ არა მიკროზომების კონცენტრაცია გამოკვლეული მეტაბოლური სტაბილურობის ტესტში? რა გავლენას ახდენს ძალიან მაღალი ან ძალიან დაბალი?
A მეტაბოლური სტაბილურობის ტესტის დროს, ცილის კონცენტრაცია ასევე იმოქმედებს მეტაბოლურ სიჩქარეზე, ჩვეულებრივ შეარჩიეთ მიკროზომული ცილის კონცენტრაცია 0,1 მგ/მლ ~ 1 მგ/მლ, სპეციფიკური არჩევანი, თუ რამდენი ცილის კონცენტრაცია უნდა შეირჩეს ნაერთის საკუთარი მეტაბოლური თვისებების მიხედვით. მიკროზომული ცილის ძალიან მაღალი კონცენტრაცია გამოიწვევს მედიკამენტის სპეციფიკურ კავშირს მიკროზომულ ცილასთან; მიუხედავად იმისა, რომ ძალიან დაბალია მიკროზომული ცილის კონცენტრაციამ შეიძლება გამოიწვიოს პრეპარატის უმნიშვნელო მეტაბოლიზმი.