С: Метаболикалық тұрақтылық зерттеулері үшін микросомалар мен гепатоциттерді қалай таңдау керек? Мен олардың біреуін ғана орындау үшін таңдай аламын ба?
Ж: Метаболикалық тұрақтылықты зерттеуде бауыр микросомаларын немесе гепатоциттердің таңдауы негізінен жоғары метаболикалық мөлшерлеме таңдалған қосылыстардың метаболикалық қасиеттеріне байланысты. Жалпы, бауыр микросомалары артықшылыққа ие, әсіресе құрама молекулалар көп болған кезде - еритін және біреуі - фазалық метаболизм - негізгі метаболикалық жол (әсіресе CYP арқылы). Гепатоциттер эксперименттер үшін екіге дәлелдер болған кезде қолданылуы мүмкін. Әдетте, бір метаболикалық жүйені қажеттіліктерді қанағаттандыру үшін таңдауға болады; Егер барлық аспектілердің шарттары рұқсат етілсе, бір уақытта екі жүйені де таңдау жақсы.
С: Неліктен ферменттік индукциялық талдау үшін негізгі гепатоциттерді пайдалану қажет?
Ж: Cyp ферменті - Индукцияланған талдау «транскрипция», «аударма» -тен «Пошта», «Пошта», «Пошта», «Пошта», белсенді CYP ферменті бар. Сондықтан, сынақ жүйесі бауыр микросомалары немесе бауырдың иісі емес бауыр ұяшықтары болуы керек.
С: Ферменттік индукциялық талдау үшін мен неге үш донорлық кадрлық алғашқы гепатоциттерді таңдауым керек?
Ж: Есірткі қарым-қатынас жөніндегі нұсқаулыққа сәйкес, кем дегенде үш донор қолданылып, әр донордың индукциялық нәтижесін бөлек бағалануы керек. Статистикалық маңызды нәтижелер шығарумен қатар, тәжірибеге үш донорды таңдау INTER - жеке вариацияны бағалау үшін де маңызды. Егер кем дегенде бір донордың нәтижесі алдын-ала анықталған шекті деңгейден асып кетсе, есірткі кандидаты іске қосылып, келесі - бағалау қажет.
С: Неліктен UGT ферменттерінің индукциясы емес, тек CYP ферменті индукциясына назар аударыңыз?
Ж: Cypase Induction-қа назар аудару себебі циказа индукциясының механизмі нақты зерттелген. Басқаша айтқанда, Ugtase индукциясын зерттеуді қажет етпеу себебі механизм әлі де түсініксіз; Алайда, бұл ugtase индукцияланбайды дегенді білдірмейді. Нұсқаулар сонымен қатар транспорттаушылар үшін стандартталған классификациялық жүйе жоқ, ал тасымалдаушылардың ингибиторлары мен II фазалық метаболизм ферменттері жоқ деп айтады.
С: Жекелеген алғашқы гепатоциттер реанимациядан кейін өмір сүре алады және реанимациядан кейін гепатоциттер қанша уақыт сақталуы мүмкін?
Ж: Пастерленген алғашқы гепатоциттер, әдетте, ферменттік индукцияның талдауы үшін қолданылады. Ұяшықты қалпына келтіруден кейін ұяшықтар пластиналы тарату ортасында тоқтатылады, тиісті концентрацияға және коллагенге мәдениетті түрде жасалған - Содан кейін ұяшықтарды 4 ~ 6 сағат ішінде пастерлендіруге болады. Ұяшықтар қабырғаға бекітілгеннен кейін, ұяшықтар күйін максималды қалпына келтіру үшін техникалық қызмет көрсету орны ауыстырылады және сақталады. Әрі қарай, ферменттік индукциялық талдау метаболикалық белсенділікті және MRNA индукциялық деңгейін анықтау үшін орындалуы мүмкін. Бүкіл цикл тұрғысынан, гепатоциттерді қабырғаға жабыстырудан кейін 6 ~ 7 күн бойы ұстауға болады. Уақыт өткен сайын, жасуша қабырғаларын жабысатын жағдайы нашарлайды, ал жасушалар бөліп, тоқтата тұрады.
Егер жабысқақ гепатоциттер мәдениілмеген болса, біз оларды 4 ~ 6 сағат ішінде жақсы күйде ұстай алатындығын тексердік. Біз әлі ұзағырақ тексеруді жүргізген жоқпыз.
С: Гепатоциттерді қолданылған әртүрлі мәдениеттерге байланысты суспензия және жабысқақ ұяшықтар ретінде пайдалануға болады ма?
Ж: Қатты тіндер мен органдардан жасалған жасушалар қабырғаға қойылады, бірақ барлық ұяшықтар - in vitro. Жасушалар қабырғаға беріле ме, жоқ па, жабыстырылған немесе жасушалардың күйіне байланысты; Сонымен қатар, қабырғаға - Жеткізуші жасушаларда белгілі бір мәдени ортасы және арнайы про-про-- Жасуша жабыны (мысалы, роомогельиноген, ламинин, ламинин, ламинин, фибронек, сарысуды кеңейту факторы) қажет. Қорытындылай келе, жабысқақ ұяшықтарды аспалы жасушалар ретінде пайдалануға болады, бірақ аспалы жасушалар жабысқақ пайдалану үшін міндетті түрде қол жетімді емес.
С: Қабырғаға учаскелерді қолданудың артықшылықтары / кемшіліктері қандай? Шешім критерийлері қандай?
Ж: Гепатоциттер оқшауланғаннан кейін оларды тоқтата тұру немесе жабысқақ қабырғада сатуға болады. Р450 ферменттерінің Цитохромдық ферменттерінің қызметі Бастапқы гепатоциттерден бастап, алғашқы 4 ~ сағат ішінде VIVO-мен сәйкес келеді, содан кейін уақыт ұзарып, тез төмендейді. Сондықтан, асқалықтың асқотентіндегі гепатоциттер, әдетте, метаболикалық тұрақтылық немесе метаболитке профильді зерттеу үшін қолданылады. Қойылған қабырғада қазылған алғашқы гепатоциттерде қалыпты гепатоциттердің биологиялық сипаттамалары мен метаболикалық белсенділігін сақтау үшін жеткілікті уақыт бар. Демек, олар көбінесе ферменттерді индукциялау, есірткі цитотоксикалануы, баяу метаболизаторлық дәрілердің метаболикалық тұрақтылығы немесе өнім шығаруды зерттеу үшін қолданылады.
Қазіргі уақытта біз веб-парақты онлайн сатып алу қызметін ұсынбаймыз. Тіркелгеннен кейін және логиннен кейін сатып алу арбасына қосылған өнімдер тек анықтама алу үшін. Егер сізге біздің өнімдерімізді сатып алу қажет болса, байланыс ақпараттарыңызды бізбен байланысу арнасы арқылы қалдырыңыз, біз қызметтерді аяқтау үшін сізге хабарласамыз.
С: Ешқандай ақуызды байланыстыратын нақты ақуызды қалай көрсетеді?
Ж: Егер дәрі-дәрмек кандидаты емес Ақуыздың концентрациясы жоғарылағандықтан, км мәні артады, нәтижесінде болжамды ішкі тазартылған болады. Сондай-ақ, препараттық препараттық кандидаттардың микросомалардағы кандидатурасын міндетті түрде микросомалардағы кандидат әр түрлі зертханалардан және әртүрлі жүйелерден алынған болуы мүмкін.
С: Бауыр микросомалды ақуызының менеджері немесе II фазалық тұрақтылық жиынтықтағы ұсынылған концентрациясы 0,1 мг / мл - 1 мг / мл - 1 мг / мл.
Ж: Алдымен бауыр микросомаларын сұйылтудың қажеті жоқ; Жинақтағы бауыр микросомаларының концентрациясы 20 мг / мл құрайды және тест жүйесіндегі бауыр микросомаларының соңғы концентрациясы - 0,1 - 1 мг / мл, оны пропорционалды түрде қосуға болады.
С: Бастапқы гепатоциттердің метаболикалық тұрақтылығын сынау үшін жасуша тығыздығы қандай? Тазартуды есептеу бауыр микросомаларымен бірдей ме?
Ж: Бастапқы гепатоциттердің метаболикалық тұрақтылығы үшін ұсынылған жасуша тығыздығы 0,5-тен 2 × 10-ға дейін6 Жасушалар / мл, және вирустық есептеулер және вегомалық метаболикалық тұрақтылық тұрақтылық таныту нәтижелерін өңдеу дәйекті болып табылады.
С: PBS буферіндегі негізгі ингредиенттер қандай? Оның құрамында KCL және NACL бар ма?
Ж: PBS буферінің негізгі компоненттері k2Шом4 және Х2PO4, және KCL және NACL тегін.
С: Фосфат буферінің мақсаты неде? Неліктен сізге фосфат керек?
Ж: Фосфат буферлері физиологиялық ортаны илеу мақсатында таңдалады, ал фосфат дененің сұйық ортасын сақтау үшін маңызды буферлік жұптардың бірі болып табылады.
С: Ферменттің әдеттегі параметрі қандай - Рецепторлардың концентрациясы? Егер жүйенің ерігіштігі тексерілетін болса, шешім бар ма?
Ж: Ферменттік индукциялық талдау 3 түрлі концентрациямен құрылуы керек, концентрация деңгейі адамдарға күтілетін тиімді қандағы есірткінің концентрациясын қамтуы керек, ал ең көп шоғырлану адамдағы орташа тиімді қандық концентрациядан жоғары болуы керек. Егер су фазасындағы ерігіш нашар болса, органикалық еріткішті оның еріткіш ретінде таңдауға болады, мысалы, E.G. DMSO, бірақ жүйеге қосылған органикалық еріткіштің мөлшерін бақылау қажет.
С: Метаболикалық тұрақтылықтан зерттеулерде екі тест жүйесін, бауыр микросомаларын және бастапқы гепатоциттерді тексеру қажет пе?
Ж: Бауыр микросомалары везериялық мембраналық, олардан жасалған құрылымдар, бомогенизация және геогенизация кезінде алынған фрагменттелген эндоплазмалық ретикулум, гепогенизация және дифференциалды центрлік центрлік центрлік цендикуляция, құрамында CYP450 ферменттері және кейбір бифазикалық ферменттер, мысалы, UG., UGS, STS бар. Бастапқы гепатоциттер (PCS) - бұл жануарлардың жер учаскелерінен тікелей оқшауланғаннан кейін дереу өсімдіктер, олар бауырдың метаболикалық функцияларын сақтай отырып, әсіресе, әсіресе VIVO-дағы ферменттер деңгейін сақтай отырып, гепатоциттер. Метаболикалық тұрақтылықты зерттеуде шығындарды қарастырудың қажеті жоқ, ал екі тест жүйесін бір уақытта таңдауға болады; Немесе тиісті тест жүйесін қосылыстың метаболикалық қасиеттеріне сәйкес таңдай алады, ал принциптің жоғары метаболикалық мөлшері таңдалады. Жалпы, бауыр микросомалары - бұл қосылыстар молекулалары көп, өйткені құрама молекулалар көп, өйткені бір-бірімен еритін және біреуі - фазалық метаболизм - негізгі метаболикалық жол (әсіресе CYP арқылы); Егер екі рет фазалық метаболизм негізгі метаболизм болып табылады, гидролиз - бұл беделді емес, бауыр микросомаларындағы нақты ақуызды байланыстыру өте жоғары, ал метаболизм бауыр микросомаларында айқын емес, тестілеуді бастауыш гепатоциттер қолдану арқылы жүзеге асыруға болады.
С: Метаболикалық тұрақтылық тестінде тексерілген микросомалардың концентрациясы ма? Тым жоғары немесе тым төмен әсері қандай?
Ж: Метаболикалық тұрақтылық тестінде, ақуыз концентрациясы метаболикалық мөлшерлемеге әсер етеді, әдетте, 0,1 мг / мл-дің концентрациясын, әдетте, 0,1 мг / мл-ге дейін концентрацияны, қосылыстың жеке метаболикалық қасиеттеріне сәйкес ақуыз концентрациясын таңдаудың нақты таңдауы. Микросомалды ақуыздың шоғырлануы тым жоғары емес - препараттың микросономалды ақуызға нақты байланысы; Микросомалды ақуыздың шоғырлануы тым төмен болғанымен, препараттың шамалы метаболизміне әкелуі мүмкін.