Комет Assay үчүн слайддарды кантип даярдаса болот
TheКомет AssayОшондой эле бирдиктүү - Клетка гел электрофорциясы деп да белгилүү, жеке клеткалардагы ДНКнын бузулушун эсептөө үчүн сезимтал жана ар тараптуу ыкма. Жогорку сапатты даярдооComet Assay Slides - бул ишенимдүү нерсенин ишенимдүүлүгүн жана репрослуулугун аныктаган сын кадам. Бул макалада Жылдыздардан кометсай үчүн слайддарды даярдоодо, талаадагы эксперттердин интеграциялоосун уюштуруу боюнча ар тараптуу көрсөтмө берүүгө багытталган. Биз ар бир маанилүү кадамды, биз клетканы тандоону маалыматтарды чечмелөөгө, сиз мүмкүн болушунча мыкты натыйжаларга жетишүүнү камсыз кылабыз.Кометанага киришүү жана анын мааниси
Jusing Келети Ассайга сереп
1980-жылдардын аягында иштелип чыккан комета шайкештиги ДНКнын бузулушун аныктоонун күчтүү куралы - жеке эукариот клеткаларында үзгүлтүккө учурайт. Алгачкы талааларда, мисалы, генотоксикалык сыноо, молекулярдык эпидемиология жана экологиялык биомонит. Кометанын принциби агароседеги клеткаларды камтыйт, аларды мембраналарды жана белокторду алып салууга, андан кийин ДНКны электрофорезага баяндайт. Келип чыккан айдоо, ал жакка окшош, ДНКнын бузулушуна жараша болот.ДНКнын бузулушун аныктоо
Комет Ассейлер Айлана-чөйрөгө токсиндер, нурлануу жана фармацевтикадан келип чыккан ДНКнын бузулушунда өзгөчө баалуу. Ошондой эле алар ДНКны оңдоо механизмдеринин ар кандай клеткалык түрлөрү боюнча натыйжалуулугун баалоодо маанилүү ролду ойношот. Изилдөөчүлөрдүн ДНКнын бузулгандыгына байланыштуу рак оорусун, карылыкты жана башка ооруларды изилдөө үчүн Кометун колдонушат.● Genootoxicity тестирлөө
Комент-коменталдык жана илимий-изилдөө иштеринин мааниси төмөндөйт. Алар потенциалдуу генотоксикалык кошулмаларды аныктоо үчүн алдын-ала алынган алдын ала алынган курал катары кызмат кылат. Бул ишенимдердин натыйжалары чечим кабыл алууга болотКомета үчүн ылайыктуу клеткаларды тандоо
● колдонулган клеткалардын түрлөрү
Клеткалардын тандоосу, бир жылдыздын натыйжасына бир кыйла таасир этиши мүмкүн. Көбүнчө колдонулган клеткаларга лимфоциттер, буккан клеткаларына жана ар кандай маданият клеткаларына кирет. Изилдөөчүлөр көбүнчө изилдөө иштеринин максаттарына жана үлгүлөрдү алуу мүмкүнчүлүгүнүн жеңилдигин колдонушат.● Клетканын тандоосун ойлоп табуу
Клеткаларды тандоодо клетканын жеткиликтүүлүгү, дна зыянга учураган факторлор сыяктуу факторлорду карап чыгыңыз жана изилдөө суроосуна актуалдуулук. Мисалы, лимфоциттер кандан оңой эле алынып, генотоксикалык агенттерге сезгич, аларды көптөгөн изилдөөлөр үчүн мыкты тандоо жасашат.● Assay натыйжаларына тийгизген таасири
ДНКнын бузулушуна жана клетканын дарылоосуна кандай жооп кайтаруу деңгээлин жана клетканын пайдагасынын жыйынтыгы жана абалы таасир этиши мүмкүн. Ошондуктан, терс клетка тандоо жана протоколдорду иштетүү, Кометке ишенимдүү жана репродукцияланган натыйжаларга алып келүү үчүн маанилүү.Агаросо гельдерди даярдоо
● пайдаланууга агароздун түрлөрү
Туура сүзүүнү тандоо кометунун актыгынгына ээ болуу үчүн абдан маанилүү. Төмөн эрүү чекити агароза артыкчылыктуу, анткени ал тездик менен катууланып, иштетүү учурунда ДНКнын бузулушун минималдаштырат. Абайлаган жеткирүүчүлөрдөн, мисалы, жүйөлүү жолдоштук слайд берүүчүсү же кометалык слайд-слайд өндүрүүчүсү сыяктуу сапаттуу агароза.● авароздук концентрация жана даярдоо кадамдары
Адатта, 1% төмөн эрүү чекити агароза концентрациясы колдонулат. Агарозду ылайыктуу буферге таркатыңыз, аны толугу менен эрип кеткенге чейин, андан кийин уюлдук куюлган температурага чейин муздатыңыз. Агароза Assayдеги артефакттардан алыс болуш үчүн, агароза көбүкчөлөрдөн жана сыныктардан алыс экендигин текшериңиз.● Оптималдуу гель сапатын камсыз кылуу
Agarose гельдин сапаты ынтымактын сезимталдыкына жана репродукциясына таасир этиши мүмкүн. Туура иш-аракет жана даярдоо ыкмалары ар кандай слайддардын ар кандай слайддар менен ырааттуу касиеттер менен бир гомогендик гель өндүрүү үчүн маанилүү. Бул кометалардын пайда болушу жана визуализациясы бирдей экендигин камсыз кылат.Уюлдук убактылуу токтотуу жана кычыштырган клеткаларга агароза
The Клетканы токтото турууну даярдоо
Бирдиктүү - клетканын токтото туруу менен баштаңыз. Маданияттуу клеткалар үчүн бул трипсинизацияны камтыйт, андан кийин нейтралдаштыруу жана жуунуу менен. Лимфоциттер сыяктуу башталгыч клеткалар үчүн, ылайыктуу буфердеги центрифугалоо жана жандандыруучу жана резервациялоо зарыл. Клетка концентрациялануусун болжол менен 1 X 10 ^ 5 клеткасынын / мл / мл.● Төмөндөөчүтөй клеткалардын агароза
Клетканы токтото турууну алдын-ала аралаштырыңыз - Майдалоочу пункт менен төмөндөгүлөргө төмөн эрүү пункту, клеткалардын бирдиктүү бөлүштүрүлүшүн камсыз кылат. Тез пипттте аралашманы алдын-ала толтуруңуз - Coloted Come белин щеткасы слайддарынан сатылышы мүмкүн болгон кометалык слайд фабрикасынан же ишенимдүү жеткирүүчүдөн сатып алууга болот. Агарозду жайып, аба көбүкчөлөрүнүн алдын алуу үчүн капчыкты колдонуңуз.● Слайддарды клеткаларды жайып салуу
Агароза жайылып кеткенден кийин, слайддарга муздак жана муздак жерлерде же муздаткыч чөйрөдө бекемдөөгө уруксат бериңиз. Адырозанын алдын-ала бирдей эмес шарттын алдын алуу үчүн бул кадамды натыйжалуу аткарууга болот, бул анализ учурунда кометалардын валуализациясына таасир этиши мүмкүн.Слайддардын клеткаларынын лизизи
● Лизис чечиминин курамы
Лизис чечими, адатта, накл, Эдта жана Тритон сыяктуу жогорку концентрациялангандар бар, бул клеткаларды натыйжалуу липтештирип, ДНКны бузуп жатканда, мембраналарды жана белокторду алып салышат.● Лизис жол-жобосу жана шарттары
Лизис чечими менен слайддарды слайддарды слайддарды слайддарды жок дегенде 1 ° Cда 1 саатка чейин инкубациялаңыз, бирок түн ичинде инкубация көбүнчө артыкчылыкка ээ болот. Буулуу жана булгануудан сактануудан сактануу үчүн лизисттин буулары камтылганын текшериңиз. Лизис кадамдын абалы ДНКны басмырлабастан уюлдук шайлоочуларды жок кылуу үчүн маанилүү.● Толук клетка лизинин мааниси
Толук эмес лазалар начар кометациянын пайда болушуна жана ишенимсиз маалыматтарга алып келиши мүмкүн. Демек, слайддын бардык бөлүктөрүн киргизип, бир клеткадагы бирдиктүү убакыттын үзгүлтүккө учурашы чечимди, эритмесин кылдаттык менен чечүү зарыл.Щелочтуу жана электрофорездин шарттары
● Алкалын чечимин даярдоо
Айкаланы чечүү, көбүнчө Наох менен Эдстанын аралашмасы ДНКны ачып берүү үчүн колдонулат. Анын даярдалышы туура, туура, туура, туура тел жана эрежелерди камсыз кылуу керек. Жаңы чечимди натыйжалуулугун сактоо үчүн чечимди даярдайт.● Алкалынга эч кандай мааниге ээ эмес
Айкалин жолун щелочтуу слайддарды инкубациялоо, адатта, 40 мүнөт, ДНКнын катарына жол бербөө үчүн. Бул кадам бойдок - Страндуу тыныгуу жана alkali - Шпилелге сайттарды аныктоо үчүн маанилүү. Белгиленген протоколуңузга жана клетканын түрүнө негизделген убакытты оптималдаштыруу.● Электрофоресис орнотуу жана параметрлер
Электрофоресис танкасын муздак щелочтуу электрофороз буфери менен орнотуңуз. Слайддарды танкта жайгаштырыңыз, алар толугу менен чөккөн. Таза чыңалууну (адатта, 25 v айланасында 25- тегерегинде) колдонуңуз. Электрофороздук шарттар, анын ичинде чыңалуу жана убакыт ДНК миграциясынын эң жакшы чечимине жетишүү үчүн оптимизацияланууга тийиш.Нейтралдаштыруу жана боёк процесси
● Нейтралдаштыруу буферин даярдоо жана пайдалануу
Электрофороздон кийин, слайддарды реакцияны токтотуп, ДНК турукташтыруу үчүн слайддарды нейтралдаштырыңыз. Жалпы нейтралдаштыруу буфери 4.5 тел телде трис базасы бар. Бул буфердеги слайддарды акырын чайкаңыз, щелочтуу чечиминин бардык издерин жок кылуу үчүн бир нече жолу чайкаңыз.● От жагуучу техникалар
Флуоресценттик ДНК - Бейтраптык ДНК менен бейтараптык ДНК, мисалы, этидиум бромид же SYBR GREOR жашыл. Эфидид Бромиде, ал эми классикалык мутагендик касиеттерине байланыштуу кылдаттык менен иштөөнү талап кылат. SYBR GREON жогорку сезимталдык менен коопсуз альтернатива сунуштайт. Слайддарды ботко чыгаруу чечими үчүн ылайыктуу убакытка (адатта 15 мүнөт) караңгыда (адатта 15 мүнөт) инкубациялайт.ДНК кометаларын визуализациялоо
Бүтлөдөн кийин, ашыкча такты алып салуу үчүн слайддарды акырын чайкаңыз. Слайддарды флуоресценттик микроскоп астында карап чыгыңыз. Боянын жана микроскоптун токтомунун сапаты кометалардын так сүрөттөрүн алуу үчүн өтө маанилүү.Микроскопия жана сүрөт талдоо
● Туура микроскопту тандоо
Тиешелүү фильтр менен жабдылган флуоресценция микроскопу, булганган ДНКны элестетүү үчүн зарыл. Чоң резолюциялоо жана команданын толук сүрөттөрүн тартууга жөндөмдүү камера тутумун тандаңыз.High Capturing High - сапаттуу сүрөттөр
Статистикалык маанисин камсыз кылуу үчүн бир слайдда кеминде 50 кометанын сүрөттөрүн тартуу. Артефакттардан алыс болуңуз, жарыктырууну жана көңүл буруңуз. Микроскоптун жана камера жөндөөлөрүн туура калибрлөө сүрөттүн сапатын жогорулатат.● Ком программасы Кометализация
Кометалык программалар Кометалыктар талдоо үчүн, мисалы, кометскор жана конс. Бул программаларга куйрук узундугу, куйрук интенсивдүүлүгү, куйрук интенсивдүүлүгү жана куйрук моменттери сыяктуу параметрлерди өлчөйт, бул ДНКнын бузулушуна сандык.Жалпы маселелерди чечүү
● Жалпы көйгөйлөр
Кометтүү маселелерин камсыз кылуу, эгерде АЭСтердин катарына фон флуоресценттик, төмөн жандуу калыптануу жана слайддардын ортосундагы карама-каршылыктуу натыйжалар кирет. Бул көйгөйлөр ар кандай булактардан, анын ичинде клетка менен иштөө, субоптималдык гель даярдоо жана туура эмес лизасыз же электрофороздук шарттар.● Чечимдер жана алдын алуу чаралары
Чоң фунубент-фунуречаны азайтуу үчүн, бардык реагенттердин жана гелдердин булгоочу заттардан бошотулгандыгын текшериңиз. Төмөн Комет түзүү үчүн, клетканын жарамдуулугу жогору экендигин жана лизинин шарттары оптималдуу экендигин текшериңиз. Таза слайд даярдоо жана кылдат протоколду сактоо негизги алдын алуу чаралары болуп саналат.● Репродукциялоону жана тактыкты камсыз кылуу
Кометке репродукцияга жетишүү үчүн, Assways программалык протоколду стандартташтырууну жана ар бир кадамдын үзгүлтүксүз текшерүүсүн талап кылат. Жабдууларды үзгүлтүксүз калибрлөө, жогорку окуу жайын колдонуңузМаалыматтарды чечмелөө жана отчеттуулук натыйжалары
Comet Кометка куйрук параметрлерин анализдөө
ДНКнын бузулушун эсептөө үчүн негизги параметрлерге куйрук миграциясынын жана куйрук интенсивдүүлүгүн чагылдырган куйрук узундугу бар, ал куйруктун ДНКнын көлөмүн билдирет. Зайтун куйругу учагы, курама ченөө, ошондой эле көп колдонулат.● Маалыматтардын отчетунда статистикалык ой
Маалыматтарды чечмелөө үчүн так статистикалык талдоо зарыл. ДНКнын бузулушунун деңгээлин ар кандай үлгү топторунун ортосунда салыштыруу үчүн тиешелүү статистикалык тесттерди колдонуңуз. Сайжалар жана эксперименттерден бир нече слайддардын жана эксперименттердин маалыматтарын текшерип туруңуз.● Тааныштырууну сунуштоо жана чечмелөө
Негизги табылгаларды сүрөттөө үчүн графиктерди жана таблицаларды колдонуп, натыйжаларыңызды так жана кыскача көрсөтүңүз. ДНКнын бузулушунун деңгээлин байкап, биологиялык тутумга болуунун болжолдуу таасирин талкуулаңыз.Корутунду: жогорку сапаттагы
Жогорку сапатка даярдануу - Сапаттуу Комета слайддары клетканы тандоону кылдаттык менен карап чыгуу, агарось гель даярдоо, л.ивис шарттарын, электрофорозиялуу, бактарды жана сүрөттү жана сүрөттү талдоо. Ар бир кадам ишенимдүү жана репродуктивдүү натыйжаларды камсыз кылуу үчүн кылдаттык менен оптималдаштырылган жана стандартташтырылган болушу керек. Беделдүү комьюсей менен кызматташуучулар менен кызматташуучулар менен кызматташып, өндүрүүчүлөр жогорку класстын материалдары жана техникалык колдоосу менен өзүңүздүн ишмеңиздин сапатын жогорулатышы мүмкүн.● БолжолИфадаБиоссиялык
Штаттык чокустар, Пенсильвания, Пенсильвания, биосициялары "адистештирилген, роман жана инновациялык" жогорку "техникалык ишканалар" Инновациялык биологиялык реагенттерди изилдөө, өнүктүрүү, сатуу, сатуу жана техникалык кызматтарды интеграциялоо. Илимий изилдөөсүн колдонууга жана илимий изилдөөлөр үчүн илимий тобу илимпоздорго инновациялык биологиялык реагенттерди берүү жана илимпоздорго илимпоздорго илимий аракеттерге жардам берүү үчүн илимий аракеттерге жардам берүүгө жана илимий аракеттерге жардам берүүгө жардам берүүгө милдеттүү, илимпоздорго инновациялык биологиялык реагенттерди берүү жана изилдөөчүлөрдүн илимий максаттарга жетүүсүнө жардам берүүгө жардам берет. "Инновациялык реагенттер, келечекти изилдөө", Ифаза, АКШ, Европада, Европада жана Чыгыш Азия өлкөлөрүндө, сатуучулардын жайлары, сатуу борборлору, сатуу борборлору, сатуу борборлору, сатуучуларга жана бөлүштүрүү өнөктөштөрү - 12000 чарчы метрден ашкан.Пост убактысы: 2024 - 08 - 28 14:05:21