Kl.: Kaip turėčiau pasirinkti mikrosomas ir hepatocitus metabolinio stabilumo tyrimams? Ar galiu pasirinkti tik vieną iš jų, kad įvykdyčiau reikalavimą?
A: Metabolinio stabilumo tyrime, pasirinkus kepenų mikrosomus ar hepatocitus, daugiausia priklauso nuo junginių metabolinių savybių, kuriose pasirenkamas didelis metabolizmo greitis. Apskritai pirmenybė teikiama kepenų mikrosomoms, ypač kai jungtinės molekulės yra daugiau vandens - tirpios, o viena - fazės metabolizmas yra pagrindinis metabolizmo kelias (ypač per CYP). Hepatocitai gali būti naudojami eksperimentams, kai yra dviejų - fazės metabolizmo įrodymų, kaip pagrindinis kelias, hidrolizė kaip pagrindinis metabolizmo kelias, aukštas nespecifinis baltymų surišimas kepenų mikrosomose ir metabolizmas kepenų mikrosomuose nėra akivaizdus. Paprastai tenkinant poreikius, galima pasirinkti vieną metabolinę sistemą; Jei sąlygos visais aspektais leidžia, tikrai geriausia pasirinkti abi sistemas tuo pačiu metu.
Kl.: Kodėl fermentų indukcijos tyrimui reikia naudoti pirminius hepatocitus?
A: CYP fermentas - Sukeltą tyrimą reikia pereiti nuo „transkripcijos“, „vertimo“ iki „Post - vertimo baltymo modifikavimo“, kad gautumėte aktyvų CYP fermento baltymą. Todėl bandymo sistema turėtų būti kepenų ląstelės, o ne kepenų mikrosomos ar kepenų S9.
Kl.: Kodėl fermento indukcijos tyrimui reikia pasirinkti tris pirminius žmogaus hepatocitus?
A: Pagal įvedimą į vaistų sąveikos gaires, turėtų būti naudojami bent trys donorai, o kiekvieno donoro indukcijos rezultatas turėtų būti įvertintas atskirai. Be statistiškai reikšmingų rezultatų davimo, trijų eksperimento donorų pasirinkimas taip pat yra svarbesnis vertinant individualius variacijas. Jei bent vieno donoro rezultatas viršija iš anksto nustatytą ribą, kandidatas į narkotikus gali būti indukuojamas ir reikalingas atlikti UP vertinimą.
Kl.: Kodėl reikia sutelkti dėmesį tik į CYP fermento indukciją, o ne į UGT fermento indukciją?
A: Priežastis, dėl kurios sutelkti dėmesį į cIPazės indukciją, yra ta, kad CIPazės indukcijos mechanizmas buvo aiškiau ištirtas. Kitaip tariant, priežastis, dėl kurios nereikia tirti ugtazės indukcijos, yra ta, kad mechanizmas vis dar neaiškus; Tačiau tai nereiškia, kad UGTase nebus sukelta. Gairėse taip pat teigiama, kad nėra standartizuotos induktorių ar inhibitorių ir inhibitorių, o II fazės metabolizmo fermentai ar inhibitoriai.
Kl.: Kiek laiko gali išgyventi pirminiai hepatocitai po gaivinimo, ir kiek laiko hepatocitai gali būti išlaikomi be priklijuotos kultūros po gaivinimo?
A: Pasterizuoti pirminiai hepatocitai paprastai naudojami fermentų indukcijos tyrimams. Po ląstelių atsigavimo ląstelės suspenduojamos plokštelės plitimo terpėje, pritaikytos prie tinkamos koncentracijos ir auginamos kolagene - padengtose plokštelėse; Tada ląstelės gali būti pasterizuojamos per 4 ~ 6 valandas. Pritvirtinus ląsteles prie sienos, priežiūros terpė pakeičiama ir palaikoma 18 valandų, kad būtų užtikrintas maksimalus ląstelių būsenos atstatymas. Toliau fermentų indukcijos tyrimas gali būti atliekamas norint nustatyti metabolinį aktyvumą ir mRNR indukcijos lygį. Žvelgiant iš viso ciklo perspektyvos, hepatocitai gali būti palaikomi 6 ~ 7 dienas po sienos priėmimo. Laikui bėgant, ląstelės sienos laikymasis blogėja, o ląstelės atsiribos ir suspenduos.
Jei prilipę hepatocitai nėra kultivuojami, mes įsitikinome, kad jie gali būti palaikomi geroje būsenoje per 4 ~ 6 valandas. Mes dar neatliekome patikrinimo ilgesnį laiką.
Kl.: Hepatocitai gali būti naudojami kaip suspensija ir prilipusios ląstelės, atsižvelgiant į skirtingas naudojamas kultūros terpes?
A: Daugelis ląstelių iš kietų audinių ir organų yra sienos, tačiau ne visos ląstelės yra sienos, kai auginamos - in vitro. Ar ląstelės yra sienos - prilipusios, ar ne, priklauso nuo pačių ląstelių būklės; Tuo pačiu metu „Wall -“ prilipusioms ląstelėms reikalinga specifinė kultūrinė terpė ir kai kurios specialios pro - ląstelių adhezijos medžiagos (pvz., Rhamnogelinogen, lamininas, fibronektinas, serumo išsiplėtimo koeficientas), kurios gali dalyvauti ląstelių tvirtinimo procese. Apibendrinant galima pasakyti, kad prilipusios ląstelės gali būti naudojamos kaip suspensijos ląstelės, tačiau suspensijos ląstelės nebūtinai yra prieinamos naudotis.
Kl.: Kokie yra privalomų sienų eilučių pakabos hepatocitų pranašumai/trūkumai? Kokie yra sprendimų kriterijai?
A: Izoliuoti hepatocitus, jie gali būti kultivuojami suspensijoje arba priklijuotoje sienoje. Citochromo P450 fermento aktyvumas iš suspensijos auginamų pirminių hepatocitų labiausiai atitinka pirmąsias 4 ~ 6h - Vivo, tada greitai mažėja pratęsiant laiką. Todėl suspensijos hepatocitai paprastai naudojami metabolinio stabilumo tyrimui arba metabolitų profiliavimo tyrimui. Pirminiai hepatocitai, kultivuojami prie priklijuotos sienos, turi pakankamai laiko atsigauti po pažeidimo, kad būtų išlaikytos normalių hepatocitų biologinės savybės ir metabolinis aktyvumas. Taigi jie paprastai naudojami fermentų indukcijos tyrimams, vaistų citotoksiškumo tyrimams, lėto metabolizuojančių vaistų ar produkto išvadų tyrimų metaboliniam stabilumui.
Šiuo metu mes neteikiame internetinės pirkimo internetinės paslaugos. Produktai, pridedami prie pirkinių krepšelio po registracijos ir prisijungimo, yra skirti tik nuorodoms. Jei jums reikia nusipirkti mūsų produktus, palikite savo kontaktinę informaciją per „Susisiekite su mumis“ kanalu ir laiku susisieksime su jumis, kad baigtume savo paslaugas.
Q ： Kaip ne - specifinis baltymų surišimas veikia bandymo rezultatus?
A ： Jei kandidatas į narkotikus jungiasi ne - specifiškai su mikrosominiais baltymais, tai lemia pakitusius kinetinius parametrus. Didėjant baltymų koncentracijai, km vertė didėja, todėl maža numanoma vidinė klirensas. Be to, dėl narkotikų kandidato surišimo į baltymus mikrosomose gali būti labai skiriasi skirtingų laboratorijų ir skirtingų sistemų rezultatai.
Q ： Rekomenduojama kepenų mikrosominio baltymo koncentracija I fazės II fazės arba II fazės metabolinio stabilumo rinkinio instrukcijoje yra 0,1 mg/ml - 1 mg/ml, ar tai reiškia, kad naudojant kepenų mikrosomus, vis tiek reikia juos gerai praskiesti prieš pridedant prie sistemos?
A: Pirmiausia nereikia praskiesti kepenų mikrosomų; Kepenų mikrosomų koncentracija rinkinyje yra 20 mg/ml, o galutinė kepenų mikrosomų koncentracija bandymo sistemoje yra 0,1 - 1 mg/ml, kurią galima pridėti proporcingai.
Q ： Koks yra rekomenduojamas ląstelių tankis pirminių hepatocitų metabolinio stabilumo tyrimui? Ar klirenso skaičiavimas yra tas pats, kaip ir kepenų mikrosomoms?
A ： Rekomenduojamas pirminio hepatocitų metabolinio stabilumo tyrimo ląstelių tankis yra nuo 0,5 iki 2 × 106 Ląstelės/ml, klirenso skaičiavimai ir kepenų mikrosominio metabolinio stabilumo tyrimo rezultatų apdorojimas yra nuoseklūs.
Q ： Kokie yra pagrindiniai jūsų PBS buferio ingredientai? Ar jame yra KCL ir NaCl?
A ： Pagrindiniai mūsų PBS buferio komponentai yra k2HPO4 ir kh2PO4, ir nėra KCL ir NaCl.
Q ： Koks yra fosfato buferių tikslas? Kodėl jums reikia fosfato?
： Fosfato buferiai pasirenkami imituojant fiziologinę aplinką, o fosfatas yra viena iš svarbiausių buferinių porų, skirtų išlaikyti kūno skystą aplinką.
Q ： Koks yra įprastas fermento nustatymas - sukelta receptorių koncentracija? Ar yra kokių nors sprendimų, jei išbandytos sistemos tirpumas yra prastas?
A ： Reikia nustatyti fermento indukcijos tyrimą su 3 skirtingomis koncentracijomis, koncentracijos lygis turi aprėpti numatomą veiksmingą kraujo vaisto koncentraciją žmonėms, o didžiausia koncentracija pasirenkama bent vienai laipsniui didesnei nei vidutinė veiksminga kraujo vaisto koncentracija žmonėms. Jei tirpumas vandeninėje fazėje yra prastas, organinis tirpiklis gali būti pasirinktas kaip jo tirpiklis, pvz. DMSO, tačiau į sistemą pridedamas organinio tirpiklio kiekis turi būti kontroliuojamas.
Q ： Atliekant metabolinio stabilumo tyrimus, ar bandymams reikia naudoti dvi bandymo sistemas, kepenų mikrosomas ir pirminius hepatocitus?
A ： Kepenų mikrosomos yra beveik sferinės membranos pūslelės - panašios struktūros, suformuotos pagal fragmentiško endoplazminio retikulumo, gauto homogenizacijos metu ir diferencinio kepenų audinių metu, susiliejimas, juose yra CYP450 fermentų ir kai kurių bifazių enzrmų, pvz., Ugts, STS. Pirminiai hepatocitai (PHC) yra hepatocitai, auginami iškart po tiesioginio izoliacijos nuo gyvūnų kepenų, kurie iš esmės palaiko kepenų metabolines funkcijas, ypač geriau išsaugoti fermento lygį, atitinkantį in vivo in vivo. Metabolinio stabilumo tyrime nereikia atsižvelgti į išlaidas, o bandymui tuo pačiu metu galima pasirinkti dvi bandymo sistemas; arba tinkamą bandymo sistemą galima pasirinkti atsižvelgiant į junginio metabolines savybes, ir principas yra tas, kad pasirinkta aukšta medžiagų apykaitos greitis. Apskritai, kepenų mikrosomos yra geriausias pasirinkimas, kai jungtinės molekulės yra daugiau vandens - tirpios, o viena - fazės metabolizmas yra pagrindinis metabolizmo kelias (ypač per CYP); Kai pagrindinis - fazės metabolizmas yra pagrindinis kelias, hidrolizė yra pagrindinis metabolizmo kelias, ne - specifinis baltymų surišimas kepenų mikrosomose yra labai didelis, o metabolizmas nėra akivaizdus kepenų mikrosomose, testą galima atlikti naudojant pirminius hepatocitus.
Q ： Ar mikrosomų koncentracija ištirta metabolinio stabilumo teste? Koks yra per didelis ar per žemas poveikis?
A Metabolinio stabilumo testo metu baltymų koncentracija taip pat paveiks metabolizmo greitį, paprastai pasirinks mikrosominės baltymo koncentraciją 0,1 mg/ml ~ 1 mg/ml - specifinį pasirinkimą, kiek baltymų koncentracija turėtų būti pasirinkta atsižvelgiant į paties junginio metabolines savybes. Per didelė mikrosominio baltymo koncentracija sukels ne - vaisto jungimąsi su mikrosominiu baltymu; Nors per maža mikrosominių baltymų koncentracija gali sukelti nereikšmingą vaisto metabolizmą.