Me pehea te whakarite i nga kiriata mo te komero
Tecomet Assay, e mohiotia ana ko te mea kotahi - Ko te tikanga o te miihini Gell Sell, he tikanga nui me te tikanga mohio mo te aukati i te DNA te kino o nga pūtau takitahi. Te whakarite i te teitei - KoungaKoromatua a CometKo te taahiraa whakahirahira e whakatau ana i te pono me te whakaputa i nga hua o te tauanga. Ko te kaupapa nei e whai ana ki te whakarato i tetahi aratohu whanui mo te whakarite kiriata mo te komero i te komero, te whakauru i nga mohiotanga mai i nga tohunga o te mara. Ka kapi tatou i ia taahiraa whakahirahira, mai i te kowhiringa o nga pūtau ki te whakamaarama raraunga, kia pai ai koe ki te whakatutuki i nga hua pai.He kupu whakataki ki a Comet Assay me tona hiranga
● Tuhinga o mua
Ko te komero i hangaia i te mutunga o te 1980, he taputapu kaha mo te tirotiro i nga waahanga o te kapa Aukaryotic. Kei te whakamahia whānuitia i roto i nga mara penei i te whakamatautau genotoxcity, eplidemiology karedemiology, me te koiora taiao. Ko te parau tumu o te comet Assay e uru ana ki te whakauru i nga pūtau i Agatarose, e tuku ana ki te tango membranes me nga pūmua, ka pa ki te dna ki nga miihini. Ko te ahua o te hua, te rite ki te kometa, ka taea te rahinga o te kino o te DNA.● Nga tono i roto i te kitenga DNA DNA
Ko nga korero a Comet e tino whai kiko ana i te kitenga o te kino o te ao, na te paitini o te taiao, te radiation, me nga rongoā. Ka whai wāhi nui hoki ratou ki te aro turuki i te whai huatanga o nga huarahi whakatikatika DNA i roto i nga momo pūtau. Ka whakamahia e nga kairangahau te whakapae i nga korero ki te ako i te mate pukupuku, te koroheke, me etahi atu mate e hono ana ki te DNA pakaru.● Te hiranga ki te whakamatautau genotoxcity
Ko te tikanga o te ture me te rangahau mo te kometa e kore e taea te whakaatu. Ko ta raatau mahi hei taputapu tirotiro tuatahi mo te tautuhi i nga pūhui konutai. Ko nga hua mai i enei taangata ka taea te awe i te whakatau - te whakarite i nga whakaritenga o te tarukino me nga aromatawai haumaru taiao.Te kowhiringa o nga pūtau e tika ana mo te kometa
● Nga momo o nga pūtau e whakamahia ana
Ko te whiriwhiri i nga pūtau ka tino pa te putanga o te putanga o te kometa. Kei roto i nga pūtau e whakamahia ana ko Lymphocytes, nga pūtau bukal, me nga momo momo pūtau whai hua. I te nuinga o te wa ka tohua e nga kairangahau nga momo pūtau i runga i nga whaainga o te rangahau me te ngawari ki te tiki tauira.● Whakaarohia mo te whiriwhiri pūtau
I te wa e whiriwhiri ana i nga pūtau, whakaarohia nga mea penei i te kohinga o te tipu, te taapiri ki te DNA kino, me te whai take ki te patai rangahau. Hei tauira, ko te LymphocyTe he ngawari te tango mai i te toto, ka aro ki nga kaihoko konnoxic, he pai te whiriwhiri mo te maha o nga rangahau.● Te paanga ki nga hua o te ASSAY
Ko te takenga mai me te ahua o nga pūtau ka pa ki te taumata o te tau o te DNA me te urupare a te pūtau ki nga maimoatanga. Nō reira, he mea nui te kawa pūtau me te whakahaere i nga kawa, kia whiwhi ai hoki i nga hua pono me te whakaputa i roto i te komero.Te whakarite i nga tohu agarose
● Nga momo o Agaroase ki te whakamahi
Ko te whiriwhiri i te aakapa tika he mea nui mo te pono o te komero. Ko te iti o te Agatarose iti e pai ana na te mea ka tere te kino me te whakaiti i te kino o te DNA i te wa e tukatuka ana. Rua - Ko te Agaruku Kounga mai i nga kaiwhakarato rongonui, penei i te kaihoroi mo te kaiwhakaari mo te kaiwhakaari a Comety, ko te kaiwhakanao ranei o te kaiwhakanao shonay.● Te kukū me nga mahi whakahiatotanga me nga waahanga whakarite
Ko te tikanga, ko te 1% iti o te kukū Agarose iti e whakamahia ana. Whakakorehia te agroase i roto i te kaihoroi tika, wera kia rewa ra ano, ka matao ki te pāmahana e haumaru ana mo te whakauru pūtau. Me whakarite kia koreutu te agarose mai i nga mirumiru me nga otaota hei karo i nga mahi toi i roto i te arearea.● Te whakarite kounga pai ake
Ko te kounga o te Agarose Gel ka taea te awe i te taangata me te whakaputa uri. He mea nui te whakahaere i nga tikanga me nga tikanga whakarite ki te whakaputa i te kiri homogenous me nga waahi rereke puta noa i nga kiriata rereke. Ka whakarite tenei ko te waihanga me te tirohanga a te comhets he riterite.Whakatārewatanga pūtau me te whakauru i nga pūtau i roto i te agatarose
● Te whakarite i te aukati i te pūtau
Timata ma te whiwhi i te kotahi - te aukati pūtau. Mo nga pūtau whakatipu, ko te Trypsinization, ka whai i te whakakotahitanga me te horoi. Mo nga pūtau tuatahi penei i te lymphocytes, he centrifugation me te whakaohooho i roto i te kaihoroi pai e tika ana. Whakamahia he hemcytometer hei whakarite i te kukume pūtau o te 1 x 10 ^ 5 c pūtau / ml.● Whakauruhia nga pūtau i roto i te waahi rewa iti
Whakaranuhia te whakatārewatanga o te pūtau i mua - whakamahana iti noa o te wa whakatikatika i te ōwehenga e whakarite i te tohatoha o nga pūtau. Ka tere te whakapiri i te ranunga ki mua - Ka taea te hoko mai i tetahi wheketere whakaata a Comety, he kaiwhakarato pono ranei. Whakamahia he hipoki hei hora i te agarose me te aukati i nga mirumiru hau.● Te hora i nga pūtau ki runga i nga kiriata
Ina horahia ana te agatarose, tukua nga maaka ki te whakamatao me te whakakakahu i te papa makariri, i te waahi ranei. Me mahi tenei mahi kia kore ai e taea te aukati i te agroase mai i te whakatakoto i te waatea, ka pa ki te tirohanga o nga kometa i te wa e tātarihia ana.Lysis o nga pūtau i runga i nga kiriata
● Te otinga riki lysis
Ko te otinga Lysis te nuinga o nga kohinga nui o nga tote me nga taapapa, penei i te Nacl, Edta, a Triton X -● Te tikanga a Lysis me nga tikanga
Ko nga kiriata i roto i te otinga Lysis me te whakauru i te 4 ° C mo te 1 haora, ahakoa he pai te hiahia o te po. Me whakarite kia kapi te tank Lysis kia kore ai e whakaukuhia te whakaetonga me te aukati. Ko nga tikanga o te taahiraa Lysis he mea nui ki te tango i nga umanga pūkoro kaore i te whakakore i te DNA.● Te hiranga o te hamumutu pūtau
Ka taea e te Lysis te hua ka puta i te hanganga comeet poauau me nga raraunga kaore e pono. Na reira, he mea nui ki te whai i te kawa a Lysis, whakarite kia uru te otinga ki nga waahanga katoa o te kiriata me te aukati i te ngoikoretanga o te pūtau.Alkaline e wetene me nga tikanga electrophoresis
● Te whakarite i te otinga o te alkaline
Ko te otinga o te alkaline, he maha tonu te ranunga o Naoh raua ko Edta, ka whakamahia hei ine i te DNA. Ko tana whakaritenga kia pai te whakarite, me whakarite te pH tika me te tikanga. Kia rite ki te whakarite i te otinga kia mau tonu ai tona whaihua.● Ackaline e kore e hiahiatia te hiranga me te waa
Ko nga Kiriata Kiriata i roto i te otinga o te Alkaline, te nuinga mo te 20 - 40 meneti, kia taea ai e te DNA nga whiu. Ko tenei taahiraa he mea tino nui mo te rapu kotahi - pakaru me te alkali - papanga taiwhanga. Whakamahia te wa whakangahau e pa ana ki to kawa motuhake me te momo pūtau.● Te whakatakotoranga electrophoresis me nga taatai
Whakatu i te tank electrophoresis me te kowhatu ilecrophoresis electrophoresis makariri. A tuu i nga kiriata ki te tank, kia pai ai te heke. Te whakamahi i te huringa riterite (te nuinga o te 25 v) mo te 20 - 30 meneti. Ko nga tikanga electrophoresis, tae atu ki te ngaohiko me te waa, me whakarite kia tutuki ai te whakatau pai o te heke DNA.Te tikanga me te tarai
● Te whakariterite me te whakamahi i te kaimoana
I muri i te mokowhiti, te whakakore i nga kiriata hei aukati i te tauhohenga ka whakapumautia te dna. Kei roto i te kohinga e haangai ana i te turanga tuuturu i te pH o te 7.5. Me horoi i nga kiriata i roto i tenei peene i nga wa maha ki te tango i nga waahanga katoa o te otinga o te alkaline.● Nga tikanga mamati
Ko te whakamarumaru i nga kiriata e mau ana me te DNA Flea - Tekau te waikano, penei i te ahuru bromide, te matomato ranei. Ko te ethidium Bromide, i te wa e hiahia ana koe ki te whakahaere i te mahi maana i runga i ona momo mutagenic. Ka tukuna e Sybre Green tetahi whiringa haumaru me te tino kaha. Whakanohia nga kiriata i roto i te otinga tuuturu mo te waa e tika ana (te nuinga o te 15 - 30 meneti) i roto i te pouri.● Tirohia te DNA Comets
I muri i te takahanga, horoia nga riipene ma te ata ka tangohia te nuinga. Me tirotirohia nga kiriata i raro i te whaikorero mauruuru. Ko te kounga o te taatai me te taumira o te whaikorero he mea nui mo te whiwhi whakaahua maamaa o nga kometa.Tātaritanga microscopy me te whakaahua whakaahua
● Te kōwhiri i te whaikorero matau
He mea nui te whaikorero microscope me te tohu tātari tika mo te whakakitenga i te DNA STAU. Kōwhiria he whaikorero me te taumira teitei me te punaha kāmera e kaha ana ki te hopu i nga whakaahua taipitopito o nga kometa.● Te hopu tiketike - Nga whakaahua kounga
Tangohia nga whakaahua o te iti rawa o te 50 kapo ia Kiriata hei whakarite i te hiranga tatauranga. Te whakarite me te whakamarama me te aro ki te karo i nga mahi toi. Ko te whakatikatika tika o te whaikorero me nga tautuhinga kamera ka taea te whakarei ake i te kounga o te whakaahua.● Pūmanawa mo te tātaritanga comet
He maha nga papatono raupaparorohiko e waatea ana mo te tātari comet, penei i te compscore me te casp. Ko enei papatono me whangai i nga tohu penei i te roa o te hiku, te kaha o te hiku, me te waa hiku, he mea nui mo te pakaru o te DNA.Te raru i nga take noa
● Nga raru noa
Ko nga take noa i roto i te Comet Aset kei roto i nga papamuri teitei, ko te waihanga o te comet, me nga hua i waenga i nga kiriata. Ka taea e enei raru te kakau mai i nga momo punawai, tae atu ki te whai i te pūtau pūtau ngoikore, te faaineineraa gofoptimal, me te hē o te lysis ranei nga tikanga electrophoresis.● Nga rongoā me nga tikanga aukati
Ki te whakaiti i te kaha o te whakatakotoranga o te papamuri, whakarite kia koreutu nga rehitatanga katoa me nga reera mai i nga poke o nga mate. Mo te waihanga o te comeet iti, manatoko he pai te whaihua o te pūtau, ka tino pai nga tikanga o te lysis. Ko te whakarite mo te riipene whakaata rite me te kawa taapiri tino pai ko nga tikanga aukati.● Te whakarite i te whakaputa uri me te tika
Ko te whakatutuki i te reera i roto i te kometa e hiahia ana ki te paerewa paerewa me te whakamana i ia waahanga. Taputapu i nga wa katoa, whakamahia nga taputapu tiketike - te kounga o te kounga, me te pupuri i nga rekoata mo nga waahanga whakamatautau katoa hei whakarite kia tika.Ko te whakamaarama raraunga me te ripoata nga hua
● Te tātari i te hiku o te kometa
Ko nga tohu matua mo te Raru DNA ko te roa o te hiku, e whakaatu ana i te nui o te heke DNA, me te kaha o te hiku, e whakaatu ana i te nui o te DNA i te hiku. Ko te wa o te oriwa oriwa, he inenga whakahiato, ka whakamahia ano hoki.● Nga whakaaro tatauranga i roto i te ripoata raraunga
He mea nui te tātaritanga tatauranga tatauranga mo te whakamaarama raraunga. Whakamahia nga whakamatautau tatauranga tika hei whakataurite i nga taumata kino o te DNA i waenga i nga roopu tauira rereke. Me whakarite ko nga raraunga mai i nga kiriata maha me nga whakamatautau ka poipoihia kia whai kiko ai te rereke.● Te whakaatu me te whakamaori i nga kitenga
Whakaatuhia o hua ki te maarama me te poto, ma te whakamahi i nga kauwhata me nga tepu hei whakaatu i nga kitenga matua. Matapakitia te whai pānga o nga taumata o te DNA DNA i kitea, me te paanga pea ki te punaha koiora i raro i te ako.Te Whakamutunga: Te Whakapiki - Ko te Kounga Kounga Kounga Kounga
Te whakarite i te High - Comeet Kiriata Ka whai whakaaro nui ki te whiriwhiri i te pūtau waea, te whakarite i te Cel, he tikanga lysis, te mea iti, te tātaritanga whakaahua. Ko ia taahiraa me tino pai te arotau me te whakamana hei whakarite i nga hua pono me te whakaputa i nga hua. Ko te mahi tahi me nga kaiwhakarato whakaata a te kaiwhakaari me nga kaihanga ka whakarei ake i te kounga o to matea ma te whakarato i nga rauemi teitei me te tautoko hangarau.● Mo teIphaseKoiora
Ko te upoko ki te raki o te raki, ko Pennsylvania, he mea motuhake, he hou, he auaha hou "Te Hangarau Hangarau Hangarau - Te Hangarau Hangarau. Te whakamahi i te matauranga nui me te aroha ki te rangahau pūtaiao, e kaha ana ki te tuku i nga tohungatanga koiora o te ao ki te awhina i a raatau kaupapa pūtaiao. Te whai i te R & D Pai o te "Whakahoahoa Hou, Rangahau Nga Rauemi Rererangi R & Ad, Whare Toa, me nga Taonga Tohunga.Te wa tuku: 2024 - 08 - 28 14 14:05:21