Спленоцити во имунолошки истражувања: преку видови и изолација, замрзнување, чекори за топење

Клучни зборови:Спленоцити (СПЛ); Циномолгус мајмун спленоцити; Резус мајмун спленоцити; Кучиња спленоцити; Кучешки спленоцити; Спленоцити на стаорец; Глувци спленоцити; Глувци спленоцити; Зајаци спленоцити; Изолација на спленоцити; Замрзнување на спленоцити; Одмрзнување на спленоцити

Iphase производ

Спленоцити (СПЛ)се хетерогена популација на имуните клетки изолирани од слезината, витален орган вклучен во филтрирање на крв, монтирање на имунолошкиот одговор и одржување на хомеостазата. Овие клетки вклучуваат лимфоцити (Т -клетки, Б -клетки), макрофаги, дендритични клетки и природни убијци (НК) клетки, сите тие играат критични улоги во адаптивниот и вродениот имунитет. Спленоцитите се користат во претклинички и преведувачки истражувања за да се проучи имунолошката функција, развој на вакцини, автоимуни заболувања и имунотерапија со карцином.

Улогата и составот на спленоцитите (SPLs)

Во рамките на слезината, спленоцитите престојуваат во различни региони: црвената пулпа, која ја филтрира крвта и ги рециклира старите црвени крвни клетки и белата пулпа, каде што се иницираат имунолошки реакции. Белата пулпа е организирана во зони на Т -клетки и фоликули на Б -клетки, олеснувајќи ги интеракциите помеѓу антиген - презентирање на клетки и лимфоцити. Оваа уникатна архитектура ги прави спленоцитите (SPLS) моќна алатка во имунолошки испитувања како што се ELISPOT, цитометрија на проток и мешани реакции на лимфоцити.

Видови - Специфични спленоцити (СПЛ)

-Циномолгус мајмун спленоцити:Спленоцитите на циномолгус мајмуни се користат во претклиничките истражувања затоа што тие поблиску ги имитираат човековите имунолошки реакции, правејќи циномолгус мајмун спленоцити идеални за преведувачки студии.

-Резус мајмун спленоцити:Спленоцитите на Мајмун од резус се исто така ценети за нивните блиски имунолошки сличности со луѓето. Студиите кои користат спленоцити на мајмуни од резус помагаат да се премости јазот помеѓу моделите на животни и клиничките апликации.

-Кучиња спленоцити / кучешки спленоцити:Во ветеринарните истражувања, спленоцитите на кучиња (или кучешки спленоцити) се користат за проучување на имуните нарушувања во кучешки и да се извлечат споредби со имунолошкиот одговор на човекот.

-Зајаци спленоцити: Спленоцитите на зајакот се важни во студиите за производство на антитела и развој на вакцини. Спленоцитите на зајакот помагаат да се откријат детали што може да се разликуваат од спленоцитите на глувчето или спленоцитите на стаорци.

-Спленоцити на глувчето / глувци спленоцити:Спленоцитите на глувчето се еден од најчесто проучените спленоцити (СПЛ) во имунологијата. Протоколите за изолациска спленоцити од глувци се добро воспоставени, а и спленоцитите на глувчето и глувците спленоцити се користат за цитометрија на проток, елиспот и други функционални испитувања.

-Спленоцити на стаорец:Спленоцитите на стаорци обезбедуваат комплементарен модел за студии за имунотоксикологија и вакцини. Спленоцитите на стаорци честопати се споредуваат со спленоцитите на глувчето за да се разберат разликите во меѓусебните страни.

Изолација на спленоцити

Изолација на спленоцитие процес на вадење на имуните клетки од слезината што се користи во различни апликации за истражување, како што се цитометрија на проток, испитувања за производство на цитокини или мешани реакции на лимфоцити.

Слезината беше отстранета под асептични услови, земја во изолационо раствор и се пренесува на стерилна цевка што содржи медиум RPMI 1640. Леукоцитниот слој беше внимателно собран по центрифугирање. Клетките беа измиени со медиум RPMI 1640, центрифугирани и супернантот беше отфрлен. Овој чекор за перење беше повторен 1 - 2 пати пред да се користат изолираните клетки за понатамошни експерименти.

Замрзнување на спленоцити

Замрзнување на спленоцитие клучен чекор за зачувување на клетките за идна употреба. Криопрезервацијата им овозможува на истражувачите да ги чуваат спленоцитите за подолги периоди без да ја загрозат нивната одржливост или функционалност.

Супернатантот на суспензијата на центрифугираната клеточна суспензија од чекорот на изолацијата е отфрлена и концентрацијата на клетките се разредува во медиум за замрзнување. Додадете дел од секоја цевка за замрзнување и префрлете се во сад за замрзнување, осигурувајќи дека клетките остануваат во суспензија. Брзо замрзнете ги контејнерите за замрзнување во замрзнувач на - 80 ° C. Трансфер на - 150 ° C контејнер за замрзнување (или течен резервоар за азот) за долго - термино складирање.

Одмрзнување на спленоцити

Одмрзнување на спленоцитиМора да се направи внимателно за да се обезбеди висока одржливост и функционалност на клетките по криопрезервацијата. Процесот на топење е обично брз за да се минимизираат штетните ефекти на формирањето на ДМСО и мразот кристал.

Критубите се пренесуваат во водена бања од 37 ° C и се одмрзнуваат додека не останат само фини ледени кристали во цевките. Додадете 0,5 - 1мл медиум за клеточна култура на замрзната цевка, повторно разгледајте и пренесете ја суспензијата во цевка од 15мл исполнета со медиум за клеточна култура. Центрифуга, извадете го супернатантот и допрете ја цевката за да го олабавите аранжманот на клетките. Додадете 1мл медиум за клеточна култура, удар и повторно суспендирајте со пипета, додадете медиум до волумен од 15 ml. Центрифуга, de - Супернитизирајте, додадете 1 ml медиум за култура на клетки, додавајќи медиум според очекуваната концентрација на клетките. Ставете ги ќелиите во инкубатор CO2 и инкубирајте за 1H со мал јаз во капакот. На крајот на инкубацијата, повторно разгледувајте и оставете 1 мин за да се овозможи да се таложат збирните остатоци од клетки. Суспензијата на ќелијата без врнежи беше внимателно пренесена во нова цевка од 15 мл. Клетките беа броени за да се утврди активност на клетките.

Заклучок

Спленоцитите, со нивниот разновиден состав и клучна улога во имуните реакции, се непроценливи алатки во имунолошкото истражување. Без разлика дали се добиени од глодари, примати или други видови како зајаци и кучиња, спленоцитите ги олеснуваат критичните студии во имунолошката функција, механизмите на болести, развојот на вакцините и имунотерапијата на карцином. Процесите на изолација, замрзнување и топење се од суштинско значење за зачувување на нивниот интегритет и одржливост, овозможувајќи им на истражувачите да ја истражуваат клеточната динамика кај различни модели. Како што се продлабочува нашето разбирање за имунологијата, употребата на спленоцити ќе продолжи да биде инструментална во премостувањето на јазот помеѓу претклиничките студии и клиничките апликации, обезбедувајќи напредок и во човечката и ветеринарната медицина.