Splenocyten in immunologisch onderzoek: over soorten en isolatie, bevriezing, ontdooide stappen

Sleutelwoorden:Splenocyten (SPLS); Cynomolgus Monkey splenocyten; Rhesus Monkey splenocyten; Hondensplenocyten; Honden splenocyten; Rattensplenocyten; Muis splenocyten; Muizen splenocyten; Konijn splenocyten; Splenocyten isolatie; Bevriezende splenocyten; Smoren van splenocyten

IPhase -product

Splenocyten (SPLS)zijn een heterogene populatie van immuuncellen geïsoleerd uit de milt, een vitaal orgaan dat betrokken is bij het filteren van bloed, het monteren van immuunresponsen en het handhaven van homeostase. Deze cellen omvatten lymfocyten (T -cellen, B -cellen), macrofagen, dendritische cellen en natuurlijke killer (NK) cellen, die allemaal een cruciale rol spelen in adaptieve en aangeboren immuniteit. Splenocyten worden veel gebruikt in preklinisch en translationeel onderzoek om de immuunfunctie, vaccinontwikkeling, auto -immuunziekten en immunotherapie van kanker te bestuderen.

De rol en samenstelling van splenocyten (SPLS)

Binnen de milt wonen splenocyten in verschillende gebieden: de rode pulp, die bloed en recycleert oude rode bloedcellen, en de witte pulp, waar immuunresponsen worden gestart. De witte pulp is georganiseerd in T -celzones en B -celfollikels, waardoor interacties tussen antigeen - cellen en lymfocyten worden vergemakkelijkt. Deze unieke architectuur maakt splenocyten (SPLS) een krachtig hulpmiddel in immunologische testen zoals ELISPOT, flowcytometrie en gemengde lymfocytenreacties.

Soorten - Specifieke splenocyten (SPLS)

-Cynomolgus Monkey splenocyten:Cynomolgus Monkey splenocyten worden gebruikt in preklinisch onderzoek omdat ze menselijke immuunresponsen beter nabootsen, waardoor cynomolgus apen splenocyten ideaal zijn voor translationele studies.

-Rhesus Monkey splenocyten:Resus Monkey splenocyten worden op dezelfde manier gewaardeerd vanwege hun nauwe immunologische overeenkomsten met mensen. Studies met behulp van resus -apensplenocyten helpen de kloof tussen diermodellen en klinische toepassingen te overbruggen.

-Hondensplenocyten / hondensplenocyten:In veterinair onderzoek worden hondensplenocyten (of hondensplenocyten) gebruikt om immuunaandoeningen in hoektanden te bestuderen en vergelijkingen te maken met menselijke immuunresponsen.

-Konijnensplenocyten: Konijnensplenocyten zijn belangrijk in studies naar de productie van antilichamen en de ontwikkeling van vaccin. Konijnensplenocyten helpen details te onthullen die kunnen verschillen van splenocyten van muizen of splenocyten van ratten.

-Muis splenocyten / muizen splenocyten:Muissplenocyten zijn een van de meest bestudeerde splenocyten (SPL's) in de immunologie. Protocollen voor isolatiesplenocyten van muizen zijn goed ingeburgerd, en zowel muizensplenocyten als muizensplenocyten worden gebruikt voor flowcytometrie, ELISPOT en andere functionele testen.

-Rattensplenocyten:Rattensplenocyten bieden een aanvullend model voor immunotoxicologie en vaccinstudies. Rattensplenocyten worden vaak vergeleken met splenocyten van muizen om interspeciesverschillen te begrijpen.

Splenocyten isolatie

Splenocyten isolatieis het proces van het extraheren van immuuncellen uit de milt die moet worden gebruikt in verschillende onderzoekstoepassingen, zoals flowcytometrie, cytokineproductietesten of gemengde lymfocytreacties.

De milt werd verwijderd onder aseptische omstandigheden, grond in isolatieoplossing en overgebracht naar een steriele buis die RPMI 1640 -medium bevat. De leukocytenlaag werd zorgvuldig verzameld na centrifugatie. De cellen werden gewassen met RPMI 1640 -medium, gecentrifugeerd en het supernatant weggegooid. Deze wasstap werd 1 - 2 keer herhaald voordat de geïsoleerde cellen werden gebruikt voor verdere experimenten.

Bevriezende splenocyten

Bevriezende splenocytenis een cruciale stap voor het behoud van cellen voor toekomstig gebruik. Cryopreservatie stelt onderzoekers in staat om splenocyten voor langere periodes op te slaan zonder hun levensvatbaarheid of functionaliteit in gevaar te brengen.

Het supernatant van de goed gecentrifugeerde celsuspensie van de isolatiestap wordt weggegooid en de celconcentratie werd verdund in vriesmedium. Voeg een hoeveelheid toe aan elke vriesbuis en breng over naar een ijskoude container, zodat de cellen in suspensie blijven. Bevries de vriezame containers snel in een vriezer van een - 80 ° C. Overdracht naar - 150 ° C vriezercontainer (of vloeibare stikstoftank) voor lange - termijnopslag.

Smoren van splenocyten

Smoren van splenocytenMoet zorgvuldig worden gedaan om de levensvatbaarheid en functionaliteit van hoge cellen na cryopreservatie te garanderen. Het ontdooide proces is meestal snel om de schadelijke effecten van DMSO en ijskristalvorming te minimaliseren.

De cryotubes worden overgebracht naar een waterbad van 37 ° C en ontdooid totdat alleen fijne ijskristallen in de buizen bleven. Voeg 0,5 - 1 ml celkweekmedium toe aan de bevroren buis, resuspend en breng de suspensie over naar een buis van 15 ml gevuld met celkweekmedium. Centrifuge, verwijder supernatant en tik op de buis om de celopstelling los te maken. Voeg 1 ml celkweekmedium toe, blaas en resuspend met een pipet, voeg medium toe tot een volume van 15 ml. Centrifuge, de - Supernatisatie, voeg 1 ml celkweekmedium toe en voeg medium toe volgens de verwachte celconcentratie. Plaats de cellen in een CO2 -incubator en incubeer gedurende 1 uur met een lichte opening in het deksel. Aan het einde van de incubatie, resuspend en vertrek voor 1 minuten om het geaggregeerde celafval te laten neerslaan. De celsuspensie zonder neerslag werd zorgvuldig overgebracht naar een nieuwe buis van 15 ml. Cellen werden geteld om celactiviteit te bepalen.

Conclusie

Splenocyten, met hun diverse samenstelling en cruciale rol in immuunresponsen, zijn onschatbare hulpmiddelen in immunologisch onderzoek. Of het nu is afgeleid van knaagdieren, primaten of andere soorten zoals konijnen en honden, splenocyten vergemakkelijken kritische studies in immuunfunctie, ziektemechanismen, vaccinontwikkeling en immunotherapie van kanker. De processen van isolatie, bevriezing en ontdooien zijn essentieel voor het behoud van hun integriteit en levensvatbaarheid, waardoor onderzoekers cellulaire dynamiek in verschillende modellen kunnen verkennen. Naarmate ons begrip van de immunologie dieper wordt, zal het gebruik van splenocyten een belangrijke rol spelen bij het overbruggen van de kloof tussen preklinische studies en klinische toepassingen, waardoor de vooruitgang in zowel menselijke als veterinaire geneeskunde wordt gewaarborgd.