Splenocytter i immunologisk forskning: på tvers av arter og isolasjon, frysing, tine trinn

Nøkkelord:Splenocytter (SPLS); Cynomolgus ape -splenocytter; Rhesus ape -splenocytter; Hunde splenocytter; Hjørnetann splenocytter; Rotte splenocytter; Mus -splenocytter; Mus splenocytter; Kanin -splenocytter; Splenocytter isolasjon; Frysende splenocytter; Tine splenocytter

IPhase -produkt

Splenocytter (SPLS)er en heterogen populasjon av immunceller isolert fra milten, et viktig organ involvert i filtrering av blod, montering av immunresponser og opprettholdelse av homeostase. Disse cellene inkluderer lymfocytter (T -celler, B -celler), makrofager, dendritiske celler og naturlige mordere (NK) celler, som alle spiller kritiske roller i adaptiv og medfødt immunitet. Splenocytter er mye brukt i preklinisk og translasjonsforskning for å studere immunfunksjon, vaksineutvikling, autoimmune sykdommer og kreftimmunoterapi.

Rollen og sammensetningen av splenocytter (SPLS)

Innenfor milten er splenocytter bosatt i distinkte regioner: den røde massen, som filtrerer blod og resirkulerer gamle røde blodlegemer, og den hvite massen, der immunresponsene blir initiert. Den hvite massen er organisert i T -cellesoner og B -cellefollikler, noe som letter interaksjoner mellom antigen - presenterende celler og lymfocytter. Denne unike arkitekturen gjør splenocytter (SPLS) til et kraftig verktøy i immunologiske analyser som Elispot, flowcytometri og blandede lymfocyttreaksjoner.

Arter - Spesifikke splenocytter (SPLS)

-Cynomolgus ape -splenocytter:Cynomolgus ape -splenocytter brukes i preklinisk forskning fordi de nærmer seg nærmere menneskelige immunresponser, noe som gjør Cynomolgus ape -splenocytter ideelle for translasjonsstudier.

-Rhesus ape -splenocytter:Rhesus ape -splenocytter er på samme måte verdsatt for sine nære immunologiske likheter med mennesker. Studier som bruker rhesus ape -splenocytter er med på å bygge bro mellom dyremodeller og kliniske anvendelser.

-Hundens splenocytter / hjørnetann splenocytter:I veterinærforskning brukes hundesplenocytter (eller hjørnetann splenocytter) for å studere immunforstyrrelser i hjørnetenner og for å trekke sammenligninger med menneskelige immunresponser.

-Kanin -splenocytter: Kanin -splenocytter er viktige i studier på antistoffproduksjon og vaksineutvikling. Kanin -splenocytter hjelper til med å avsløre detaljer som kan avvike fra mus -splenocytter eller rotte -splenocytter.

-Mus splenocytter / mus splenocytter:Mus -splenocytter er en av de hyppigst studerte splenocytter (SPL) i immunologi. Protokoller for isolasjonsslenocytter fra mus er godt etablert, og både mus -splenocytter og mus -splenocytter brukes til flytcytometri, Elispot og andre funksjonelle analyser.

-Rotte splenocytter:Rotteplenocytter gir en komplementær modell for immunotoksikologi og vaksinestudier. Rotte -splenocytter blir ofte sammenlignet med musesplenocytter for å forstå forskjeller mellom arter.

Splenocytter isolasjon

Splenocytter isolasjoner prosessen med å trekke ut immunceller fra milten som skal brukes i forskjellige forskningsapplikasjoner, for eksempel flowcytometri, cytokinproduksjonsanalyser eller blandede lymfocyttreaksjoner.

Milten ble fjernet under aseptiske forhold, malt isolert løsning og overført til et sterilt rør som inneholder RPMI 1640 medium. Leukocyttlaget ble nøye samlet etter sentrifugering. Cellene ble vasket med RPMI 1640 medium, sentrifugert og supernatanten kastet. Dette vasketrinnet ble gjentatt 1 - 2 ganger før de isolerte cellene ble brukt til ytterligere eksperimenter.

Frysende splenocytter

Frysende splenocytterer et avgjørende skritt for å bevare celler for fremtidig bruk. Kryopreservering lar forskere lagre splenocytter i lengre perioder uten at det går ut over deres levedyktighet eller funksjonalitet.

Supernatanten av den brønnsentrifugerte cellesuspensjonen fra isolasjonstrinnet blir kastet og cellekonsentrasjonen ble fortynnet i frysemedium. Legg en alikvot i hvert frysende rør og overfør til en frysende beholder, slik at cellene forblir i suspensjon. Frys raskt frysebeholderne i en - 80 ° C fryser. Overfør til - 150 ° C fryserbeholder (eller flytende nitrogentank) for lang - sikt lagring.

Tine splenocytter

Tine splenocyttermå gjøres nøye for å sikre høy cellens levedyktighet og funksjonalitet etter kryokonservering. Tiningsprosessen er vanligvis rask for å minimere de skadelige effektene av DMSO og iskrystalldannelse.

Kryotubene overføres til et vannbad på 37 ° C og tint til bare fine iskrystaller forble i rørene. Tilsett 0,5 - 1 ml cellekulturmedium til det frosne røret, resuspender og overfør suspensjonen til et 15 ml rør fylt med cellekulturmedium. Sentrifuge, fjern supernatanten og trykk på røret for å løsne cellearrangementet. Tilsett 1 ml cellekulturmedium, blåse og resuspender med en pipette, tilsett medium til et volum på 15 ml. sentrifuge, de - supernatiser, tilsett 1 ml cellekulturmedium, tilsett medium i henhold til forventet cellekonsentrasjon. Plasser cellene i en CO2 -inkubator og inkuber i 1H med et lite gap i lokket. På slutten av inkubasjonen, resuspender og la være 1 min for å la det aggregerte celleavfallet utfelle. Cellesuspensjonen uten nedbør ble nøye overført til et nytt 15 ml rør. Celler ble talt for å bestemme celleaktivitet.

Konklusjon

Splenocytter, med sin mangfoldige sammensetning og sentrale rolle i immunresponser, er uvurderlige verktøy i immunologisk forskning. Enten avledet fra gnagere, primater eller andre arter som kaniner og hunder, letter splenocytter kritiske studier i immunfunksjon, sykdomsmekanismer, vaksineutvikling og kreftimmunoterapi. Prosessene med isolasjon, frysing og tining er avgjørende for å bevare deres integritet og levedyktighet, slik at forskere kan utforske cellulær dynamikk på tvers av forskjellige modeller. Etter hvert som vår forståelse av immunologi utdypes, vil bruken av splenocytter fortsatt være medvirkende til å bygge bro mellom prekliniske studier og kliniske anvendelser, og sikre fremskritt innen både menneskelig og veterinærmedisin.