FAQ

Î: Cum ar trebui să aleg microsomi și hepatocite pentru studii de stabilitate metabolică? Pot alege doar unul dintre ei pentru a îndeplini cerința?

R: În studiul de stabilitate metabolică, alegerea microsomilor hepatici sau a hepatocitelor depinde în principal de proprietățile metabolice ale compușilor, în care este aleasă cea cu o rată metabolică ridicată. În general, sunt preferate microsomii hepatici, mai ales atunci când moleculele compuse sunt mai multă apă - solubilă și o metabolism de fază este principala cale metabolică (în special prin CYP). Hepatocitele pot fi utilizate pentru experimente atunci când există dovezi ale metabolismului cu două faze ca cale principală, hidroliză ca cale metabolică majoră, legarea proteică nespecifică ridicată la microsomii hepatici și metabolismul la microsomii hepatici nu este evident. De obicei, un sistem metabolic poate fi ales pentru a răspunde nevoilor; Dacă condițiile din toate aspectele permit, este cu siguranță cel mai bine să alegeți ambele sisteme în același timp.

Î: De ce este necesar să folosiți hepatocite primare pentru testul de inducție a enzimei?

A: Enzima CYP - Testul indus trebuie să treacă de la „transcriere”, „traducere” la „post - modificarea translațională a proteinei” pentru a obține o proteină enzimatică CYP activă. Prin urmare, sistemul de testare ar trebui să fie celule hepatice, nu microsomi hepatici sau ficat S9.

Î: De ce trebuie să aleg trei hepatocite primare umane donatoare pentru testul de inducție enzimatică?

R: Conform introducerii la orientările pentru interacțiunile medicamentoase, trebuie utilizate cel puțin trei donatori, iar rezultatul de inducție al fiecărui donator trebuie evaluat separat. Pe lângă producerea rezultatelor semnificative statistic, alegerea a trei donatori pentru experiment este, de asemenea, mai importantă pentru evaluarea variației inter - individuale. Dacă rezultatul de la cel puțin un donator depășește un prag predeterminat, candidatul la droguri poate fi inductibil și este necesară o evaluare -

Î: De ce să vă concentrați doar pe inducerea enzimei CYP și nu pe inducerea enzimei UGT?

R: Motivul pentru a se concentra pe inducerea CYPASE este că mecanismul inducției CYPASE a fost studiat mai clar. Cu alte cuvinte, motivul pentru care nu necesită studiul inducției UGTASE este că mecanismul este încă neclar; Totuși, acest lucru nu înseamnă că UGTASA nu va fi indusă. Liniile directoare afirmă, de asemenea, că nu există un sistem de clasificare standardizat pentru inductorii sau inhibitorii transportatorilor și enzimelor metabolismului din faza II.

Î: Cât timp pot supraviețui hepatocitele primare aderente după resuscitare și cât timp pot fi menținute hepatocitele fără cultură aderentă după resuscitare?

R: Hepatocitele primare pasteurizate sunt utilizate în general pentru testele de inducție a enzimelor. După recuperarea celulelor, celulele sunt suspendate în mediul de răspândire a plăcilor, ajustate la concentrația adecvată și cultivate în plăci acoperite cu colagen; atunci celulele pot fi pasteurizate în 4 ~ 6 ore. După ce celulele sunt atașate de perete, mediul de întreținere este înlocuit și menținut timp de 18 ore pentru a asigura restabilirea maximă a stării celulare. În continuare, testul de inducție enzimatică poate fi efectuat pentru a detecta activitatea metabolică și nivelul de inducție a ARNm. Din perspectiva întregului ciclu, hepatocitele pot fi menținute timp de 6 ~ 7 zile după aderarea pe perete. Pe măsură ce trece timpul, starea de aderență a peretelui celular se deteriorează, iar celulele se vor detașa și suspenda.

Dacă hepatocitele aderente nu sunt cultivate, am verificat că pot fi menținute într -o stare bună în 4 ~ 6 ore. Încă nu am efectuat verificarea pentru o perioadă mai lungă.

Î: Hepatocitele pot fi utilizate atât ca suspensie, cât și ca celule aderente, în funcție de diferitele medii de cultură utilizate?

R: Majoritatea celulelor din țesuturi solide și organe sunt zidite, dar nu toate celulele sunt zidite atunci când sunt cultivate în - vitro. Dacă celulele sunt aderente sau nu depinde de starea de celule în sine; În același timp, celulele aderente de perete au nevoie de mediu de cultură specific și unele substanțe speciale de adeziune a celulelor (de exemplu, ramnogelinogen, laminină, fibronectină, factor de expansiune serică) care poate participa la procesul de atașare a celulelor. În concluzie, celulele aderente pot fi utilizate ca celule de suspensie, dar celulele de suspensie nu sunt neapărat disponibile pentru utilizarea aderentă.

Î: Care sunt avantajele/dezavantajele utilizării versurilor de perete aderente Hepatocite de suspensie? Care sunt criteriile de decizie?

R: După ce hepatocitele sunt izolate, ele pot fi cultivate în suspensie sau în peretele aderent. Activitatea enzimei citocromului P450 din hepatocitele primare cultivate în suspensie este cea mai în concordanță cu cea a in - vivo pentru primii 4 ~ 6H, apoi scade rapid odată cu prelungirea timpului. Prin urmare, hepatocitele de suspensie sunt utilizate în general pentru studiul de stabilitate metabolică sau pentru studiul de profilare a metabolitului. Hepatocitele primare cultivate în peretele aderent au suficient timp pentru a se recupera de la deteriorarea pentru a menține caracteristicile biologice și activitatea metabolică a hepatocitelor normale. Prin urmare, acestea sunt utilizate în general pentru studii de inducție a enzimelor, studii de citotoxicitate medicamentoasă, stabilitatea metabolică a medicamentelor cu metabolizare lentă sau a studiilor de inferență a produsului.

În prezent, nu oferim servicii de cumpărare online a paginilor web. Produsele adăugate la coșul de cumpărături după înregistrare și autentificare sunt doar pentru referință. Dacă aveți nevoie să cumpărați produsele noastre, vă rugăm să lăsați informațiile de contact prin canalul Contact Us și vă vom contacta la timp pentru a completa serviciile noastre.

Q ： Cum afectează legarea proteinelor specifice rezultatele testelor?

A ： Dacă candidatul la medicament se leagă în mod specific de proteine ​​microsomale, acest lucru duce la modificarea parametrilor cinetici. Pe măsură ce concentrația de proteine ​​crește, valoarea KM crește, ceea ce duce la o clearance intrinsecă scăzută. De asemenea, legarea candidatului la medicamente la proteine ​​în microsomi poate duce la variații mari ale rezultatelor din diferite laboratoare și sisteme diferite.

Q ： Concentrația recomandată a proteinei microsomale hepatice în manualul de instrucțiuni al kitului de stabilitate metabolică din faza I sau în faza II este de 0,1 mg/ml - 1 mg/ml, înseamnă că atunci când utilizați microsomi hepatici, este încă necesar să le diluați bine înainte de a le adăuga la sistem?

O: Nu este nevoie să diluați mai întâi microsomii hepatici; Concentrația microsomilor hepatici în kit este de 20 mg/ml, iar concentrația finală a microsomilor hepatici în sistemul de testare este de 0,1 - 1 mg/ml, ceea ce poate fi adăugat proporțional.

Q ： Care este densitatea celulară recomandată pentru testarea stabilității metabolice a hepatocitelor primare? Calculul de clearance este la fel ca și pentru microsomii hepatici?

A ： Densitatea celulară recomandată pentru testul primar de stabilitate metabolică a hepatocitelor este de 0,5 până la 2 × 10⁶ Celulele/ml, și calculele de clearance și prelucrarea rezultatelor testului de stabilitate metabolică microsomală hepatică sunt consecvente.

Î： Care sunt principalele ingrediente din tamponul dvs. PBS? Conține KCL și NaCl?

A ： Principalele componente ale tamponului nostru PBS sunt K₂HPO₄ și KH₂PO₄, și sunt liberi de KCL și NaCl.

Q ： Care este scopul tampoanelor cu fosfat? De ce ai nevoie de fosfat?

A ： Tampoane de fosfat sunt alese în scopul lor de a imita mediul fiziologic, iar fosfatul este una dintre cele mai importante perechi tampon pentru menținerea mediului fluid al corpului.

Q ： Care este setarea obișnuită pentru concentrația de receptori indusă de enzimă? Există vreo soluție dacă solubilitatea sistemului care trebuie testată este slabă?

A ： Testul de inducție a enzimei trebuie să fie înființat cu 3 concentrații diferite, nivelul de concentrație trebuie să acopere concentrația eficientă de medicament în sânge la om, iar concentrația cea mai mare este aleasă pentru a fi cel puțin un ordin de mărime mai mare decât concentrația medie eficientă a medicamentului de sânge la om. Dacă solubilitatea în faza apoasă este slabă, un solvent organic poate fi ales ca solvent, de ex. DMSO, dar trebuie controlată cantitatea de solvent organic adăugată la sistem.

Q ： În studiile de stabilitate metabolică, este necesar să se utilizeze două sisteme de testare, microsomi hepatici și hepatocite primare, pentru testare?

A ： Microsomii hepatici sunt vezicule ale membranei aproape sferice - Like structurile formate prin auto -fuziunea reticulului endoplasmatic fragmentat obținut în timpul omogenizării și centrifugarea diferențială a țesuturilor hepatice și conțin enzime CYP450 și unele enzime bifazice, de exemplu, UGTS, STS. Hepatocitele primare (PHC) sunt hepatocite cultivate imediat după izolarea directă de ficatele animale, care mențin practic funcțiile metabolice ale ficatului, mai ales păstrarea mai bună a nivelurilor de enzimă în concordanță cu cele in vivo. În studiul de stabilitate metabolică, nu este necesar să se ia în considerare costul, iar două sisteme de testare pot fi selectate pentru test în același timp; sau sistemul de testare adecvat poate fi selectat în funcție de proprietățile metabolice ale compusului, iar principiul este cel care are un sistem metabolic ridicat. În general, microsomii hepatici sunt cea mai bună alegere atunci când moleculele compuse sunt mai multă apă - solubilă și o metabolism de fază este principala cale metabolică (în special prin CYP); Când metabolismul cu două faze este calea principală, hidroliza este principala cale metabolică, legarea proteinei non -specifice la microsomii hepatici este foarte mare, iar metabolismul nu este evident în microsomii hepatici, testul poate fi efectuat folosind hepatocite primare.

Q ： este examinată concentrația de microsomi în testul de stabilitate metabolică? Care este efectul prea mare sau prea mic?

A ： În testul de stabilitate metabolică, concentrația de proteine ​​va afecta, de asemenea, rata metabolică, de obicei alegeți concentrația de proteine ​​microsomale de 0,1 mg/ml ~ 1 mg/ml, alegerea specifică a cât de multă concentrație de proteine ​​ar trebui selectată în funcție de proprietățile metabolice ale compusului. O concentrație prea mare de proteină microsomală va duce la legarea neființată a medicamentului la proteina microsomală; în timp ce o concentrație prea scăzută de proteine ​​microsomale poate duce la metabolismul nesemnificativ al medicamentului.