Splenociti v imunoloških raziskavah: med vrstami in izolacijo, zamrzovanje, koraki odtajanja

Ključne besede:Splenociti (SPLS); Cynomolgus opica splenociti; Rhesus opica splenociti; Pasji splenociti; Pasji splenociti; Slenociti podgan; Mišji splenociti; Slenociti miši; Zajčji splenociti; Izolacija splenocitov; Zamrznitvene splenocite; Odmrzovanje splenocitov

IPHASE izdelek

Splenociti (SPLS)so heterogena populacija imunskih celic, izoliranih iz vranice, vitalnega organa, ki sodeluje pri filtriranju krvi, pritrditvi imunskih odzivov in vzdrževanju homeostaze. Te celice vključujejo limfocite (T celice, B celice), makrofage, dendritične celice in naravne morilske (NK) celice, ki imajo vse kritične vloge v prilagodljivi in ​​prirojeni imunosti. Splenociti se pogosto uporabljajo v predkliničnih in translacijskih raziskavah za preučevanje imunske funkcije, razvoja cepiva, avtoimunskih bolezni in imunoterapije z rakom.

Vloga in sestava splenocitov (SPLS)

Znotraj vranice splenociti prebivajo v različnih regijah: rdeča kaša, ki filtrira kri in reciklira stare rdeče krvne celice, in bela kaša, kjer se začnejo imunski odzivi. Bela kaša je organizirana v T -celične cone in B celične folikle, kar olajša interakcije med antigenom -, ki predstavljajo celice in limfociti. Ta edinstvena arhitektura naredi splenocite (SPLS) močno orodje v imunoloških testih, kot so Elispot, pretočna citometrija in mešane reakcije limfocitov.

Vrste - Specifični splenociti (SPLS)

-Cynomolgus opica splenociti:Splenociti opice Cynomolgus se uporabljajo v predkliničnih raziskavah, ker bolj posnemajo človeške imunske odzive, zaradi česar so splenociti opice Cynomolgus idealni za translacijske študije.

-Rhesus opica splenociti:Slenociti opice Rhesus so podobno cenjeni zaradi tesnih imunoloških podobnosti z ljudmi. Študije z uporabo splenocitov Rhesus Monkey pomagajo premostiti vrzel med živalskimi modeli in kliničnimi aplikacijami.

-Pasji splenociti / pasji splenociti:V veterinarskih raziskavah se za preučevanje imunskih motenj v očjih in za primerjavo s človeškimi imunskimi odzivi uporabljajo spletni spletniki (ali pasji splenociti).

-Splenociti zajcev: Zajčji splenociti so pomembni v študijah o proizvodnji protiteles in razvoju cepiva. Zajčji splenociti pomagajo razkriti podrobnosti, ki se lahko razlikujejo od mišjih splenocitov ali splenocitov podgan.

-Mišji splenociti / miši splenociti:Mišji splenociti so eden najpogosteje preučenih splenocitov (SPLS) v imunologiji. Protokoli za izolacijske splenocite iz miši so dobro uveljavljeni, tako mišji splenociti kot miši splenociti se uporabljajo za pretočno citometrijo, elispot in druge funkcionalne teste.

-Slenociti podgan:Splenociti podgan zagotavljajo komplementarni model za imunotoksikologijo in študije cepiva. Splinocite podgan pogosto primerjamo z mišjimi splenociti, da se razumejo razlike med medogami.

Izolacija splenocitov

Izolacija splenocitovje postopek ekstrakcije imunskih celic iz vranice, ki se uporablja v različnih raziskovalnih aplikacijah, kot so pretočna citometrija, teste proizvodnje citokinov ali mešane reakcije limfocitov.

Vranico smo odstranili v aseptičnih pogojih, v izolacijski raztopini in premeščeni v sterilno cev, ki vsebuje medij RPMI 1640. Plast levkocitov je bila po centrifugiranju skrbno zbrana. Celice smo sprali z medijem RPMI 1640, centrifugirali in supernatant zavrgli. Ta korak pranja se je ponovil 1 - 2 -krat, preden so bile izolirane celice uporabljene za nadaljnje poskuse.

Zamrzovalni splenociti

Zamrzovalni splenocitije ključni korak za ohranitev celic za prihodnjo uporabo. Kriokonzervacija omogoča raziskovalcem, da v daljšem obdobju shranijo splenocite, ne da bi pri tem ogrozili njihovo sposobnost ali funkcionalnost.

Supernatant vrtine centrifugirane celične suspenzije iz koraka izolacije se zavrže in koncentracijo celice razredčimo v zamrzovalnem mediju. V vsako cev za zamrzovanje dodajte alikvoto in prestavite v zamrzovalno posodo, pri čemer zagotovite, da celice ostanejo v suspenziji. Hitro zamrznite zamrzovalne posode v zamrzovalniku - 80 ° C. Prenesite na - 150 ° C zamrzovalni posodo (ali tekoči rezervoar za dušik) za dolgo - shranjevanje.

Odmrzovanje splenocitov

Odmrzovanje splenocitovje treba izvesti previdno, da se zagotovi visoka sposobnost preživetja in funkcionalnosti celic po krio konzervaciji. Postopek odtajanja je običajno hiter, da se zmanjša škodljive učinke tvorbe DMSO in ledenega kristala.

Kriotube se prenesejo v 37 ° C vodno kopel in odmrznejo, dokler v cevi niso ostali le fini ledeni kristali. V zamrznjeno cev dodajte 0,5 - 1 ml medija celične kulture, resuspendiramo in suspenzijo prenesete na 15 ml cev, napolnjeno s celično kulturno medij. Centrifuge, odstranite supernatant in tapnite cev, da zrahljate razporeditev celice. Dodajte 1 ml medija celične kulture, piha in resusperd s pipeto, dodajte medij v prostornino 15 ml. Centrifuge, de - Supenatizirajte, dodajte 1 ml medija celične kulture, dodajanje medija glede na pričakovano koncentracijo celic. Celice postavite v inkubator CO2 in inkubirajte za 1h z rahlo vrzeli v pokrovu. Na koncu inkubacije resuspendirate in pustite 1min, da se združene celične naplavine obori. Celična suspenzija brez padavin smo skrbno prenesli v novo 15ml cev. Celice smo šteli za določitev celične aktivnosti.

Zaključek

Slenociti z raznoliko sestavo in ključno vlogo pri imunskih odzivih so neprecenljiva orodja v imunoloških raziskavah. Ali izhajajo iz glodalcev, primatov ali drugih vrst, kot so zajci in psi, splenociti olajšajo kritične študije imunske funkcije, mehanizmov bolezni, razvoja cepiva in imunoterapije raka. Procesi izolacije, zamrzovanja in odmrzovanja so bistveni za ohranjanje njihove celovitosti in sposobnosti preživetja, kar omogoča raziskovalcem, da raziskujejo celično dinamiko v različnih modelih. Ko se bo naše razumevanje imunologije poglabljalo, bo uporaba splenocitov še naprej ključnega pomena za premostitev vrzeli med predkliničnimi študijami in kliničnimi aplikacijami, kar bo zagotovilo napredovanje tako v človeški kot veterinarski medicini.