S: Sideen u doortaa microsomes iyo hepatocytes barashada barashada dheef-shiid kiimikaadka dheef-shiid kiimikaadka? Miyaan dooran karaa kaliya mid ka mid ah si aad u fuliso shuruudaha?
A: Daraasad deganaanshaha dheef-shiid kiimikaadka ah, doorashada microsomes beerka ama hepatocytes-ka badanaa waxay kuxirantahay astaamaha dheef-shiid kiimikaadka ee xeryaha, oo ah kan leh heerka dheef-shiid kiimikaadka sare ayaa la doortaa. Guud ahaan, microsomes beerka ayaa la door bidaa, qaasatan marka moleekuluhu ay biyo badan yihiin - ku milma hal-ka-dheelitirka wajiga. Hepatocytes waxaa loo isticmaali karaa tijaabooyin markii ay jirto caddeyn ah laba - dheef-shiid kiimikaadka wajiga, hydrolysis-ka sida dheef-galeenka dheef-shiid kiimikaadka, iyo dheef-shiid kiimikaad-dheecaanka maskaxda microsomes-ka beerka ma muuqdo. Badanaa, hal nidaam dheef-shiid kiimikaad ayaa loo dooran karaa inuu buuxiyo baahiyaha; Haddii shuruudaha dhinacyada oo dhami ay oggol yihiin, runtii waxaa ugu wanaagsan in la doorto labada nidaam isla waqti isku mid ah.
S: Maxay muhiim ugu tahay in loo isticmaalo hepatocytes-ka aasaasiga ah ee enzyme wax lagu muujiyo?
A: Cyp Enzyme - Dawladdu waxay u baahan tahay inay ka tagto "la-qori", "tarjumaad" si "loo dhigo - wax ka badalida tacliinta ee borotiinka '' 'si loo helo borotiinka cypzyme firfircoon. Sidaa darteed, nidaamka imtixaanka waa inuu noqdaa unugyada beerka, ma aha microcomes-ka beerka ama beerka ee beerka.
S
A: Sida ku xusan hordhaca tilmaamaha is dhexgalka maandooriyaha, ugu yaraan saddex deeq-bixiyeyaal waa in la istcimaalaa, natiijooyinka ku-deeqidda tabaruc kasta waa in si gooni gooni ah loo qiimeeyaa. Marka lagu daro soo saarista natiijooyinka tirakoobyada muhiimka ah, doorashada sedex deeq oo loogu talagalay tijaabada ayaa sidoo kale ka muhiimsan qiimeynta Inter - kala duwanaansho shaqsiyeed. Haddii natiijada ugu yaraan hal deeq bixiye ay ka badan tahay xadka horay loo sii qorsheeyay, murashaxiinta daroogada ayaa laga yaabaa inay la soo baxdo oo la soo raaco - qiimaynta ayaa loo baahan yahay.
S: Maxaa loogu diidayaa oo keliya oo keliya in lagu soo bandhigo Cym enzyme oo aan ku jirin soosaarka ent enzyme?
A: Sababta loo saaro saameynta sypasectionctionctionctionctionctionction-ka waa in habka loo yaqaan 'sypase of sypase uu si cad loo bartay. Si kale haddii loo dhigo, sababta aan loogu baahnayn daraasadda in la-qabsashada Unugtase waa in habka aan wali caddayn; Si kastaba ha noqotee, tani micnaheedu maahan in Uptase aan la dari doonin. Tilmaamaha ayaa sidoo kale sheegaya in uusan jirin nidaam loo dejiyey oo heersare ah oo loogu talagalay in lagu muujiyo ama xakameeyayaasha gaadiidleyda iyo wajiga II ee dheef-galeenka.
S: Muddo intee le'eg ayaa u hoggaansan karaa hepatocytes-ka aasaasiga ah
A: Qalabka aasaasiga ah ee hepatocytes-ka ah guud ahaan waxaa loo isticmaalaa in lagu hindiso enzyme. Ka dib soo kabashada unugyada kadib, unugyada ayaa laga joojiyaa faafinta faafinta dhexdhexaadka ah, oo lagu habeeyay feejignaanta habboon, laguna beeray Collagen - Taargooyin qunyar ah; Ka dib unugyada waxaa lagu dhex dhici karaa 4 ~ 6 saacadood gudahood. Ka dib marka unugyada ay derbiga ku lifaaqan yihiin, dhexdhexaadinta dhexdhexaadka ah ayaa la beddelaa loona ilaaliyaa 18 maalin si loo hubiyo soo celinta ugu badan ee gobolka. Marka xigta, enzyme wax lagu beero ayaa lagu samayn karaa si loo ogaado waxqabadka dheef-shiid kiimikaadka iyo heerka bilowga MRNA. Marka laga eego aragtida wareegga oo dhan, hepatocytes-ka waxaa lagu hayn karaa 6 ~ 7 maalmood kadib guurka darbiga ka dib. Markii waqtigu sii socdo, gobolka u hogaansanaanta darbiga ee gobolka ayaa ka sii daraya, unugyaduna way eryi doonaan oo hakinayaan.
Haddii heesaha heesaha loo yaqaan 'hepatocytes-ka aan la aqoonsaneyn, waxaan xaqiijinay in lagu ilaalin karo xaalad wanaagsan gudaheeda 4 ~ 6 saacadood gudahood. Wali kama qaban xaqiijin muddo dheer.
S: Hepatocytes-ka waxaa loo istcimaali karaa ganaaxyo iyo unugyo feejignaan leh oo ku xidhan warbaahinta dhaqanka kaladuwan ee la isticmaalay?
A: Inta badan unugyada unugyada adag iyo xubnaha ayaa lagu dhajiyay, laakiin unugyada oo dhami waa la dhigaa markii lagu beeray - vitro. Haddii unugyadu yihiin derbiga - adkeyn ama kuma xirna gobolka qolalka laftooda; Isla mar ahaantaana, derbiga - Unugyada feejignaanta waxay u baahan yihiin dhexdhexaad dhexdhexaad ah iyo qaar qaas ah Gabagabadii, unugyada feejignaanta waxaa loo istcimaali karaa unugyada eryida, laakiin unugyada hakinta qasab ma ahan inay diyaar u yihiin isticmaalka adkeynta.
S: Waa maxay faa'iidooyinka / faa'iido darrooyinka isticmaalka aayaadka derbiga addherent-ka ee eryida hepatocytes? Waa maxay shuruudaha go'aanku?
A: Ka dib markii Hepatocytes go'doonsan tahay, waxaa lagu habeyn karaa ganaax ama derbiga adkeysiga. Waxqabadka 'cytochrosto p450 enzyme ka-haynta ganaaxa hepatocytes-ka aasaasiga ah wuxuu aad ugu waafacaa tan - vivo ee ugu horreeya 4 ~ 6h, ka dibna wuxuu si dhakhso ah u yaraanayaa muddada dheer. Sidaa darteed, hakinta hakinta waxaa guud ahaan loo isticmaalaa daraasadda xasilloonida dheef-shiid kiimikaadka ama daraasadda dheecaanka dheef-galeenka. Hagaha hepatocytes-ka aasaasiga ah ee lagu aaso derbiga adkeysiga leh waxay leeyihiin waqti ku filan oo ka soo kabashada waxyeelada si loo ilaaliyo astaamaha noolaha iyo nashaadaadka dheef-shiid kiimikaadka ee hepatocytes caadi ah. Sidaa daraadeed, waxaa guud ahaan loo isticmaalaa daraasadaha enzyme-ka, daraasadaha dheef-galeenka dawada, xasilloonida dheef-shiid kiimikaadka ee dawada dheef-ka-dhaca ama daraasadaha soosaarka ee soosaarka.
Waqtigaan la joogo, ma bixino adeegga iibsashada khadka tooska ah ee websaydhka. Alaabtu waxay ku dartay gaariga wax iibsiga ka dib diiwaangelinta iyo galitaanka waxaa loogu talagalay tixraac kaliya. Haddii aad u baahan tahay inaad iibsato badeecadeena, fadlan ka tag macluumaadkaaga xiriirka ee kula soo xiriir kanaalka Mareykanka ee nagala soo xigta, oo aan kula soo xiriiri doonno waqtiga si aan u dhammaystiro adeegyadeena.
S: Sidee non non non -
A: Haddii murashaxa daroogada uu ku xirayo non - gaar ahaan borotiinnada microsomal, tani waxay keenaysaa xuduudaha isbedelka isbedelka. Maaddaama ay kordhineyso feejignaanta borotiinka, qiimaha KM-ka ayaa kordha, taasoo dhalisay in hoos loo dhigo caddeyn qoto dheer oo qoto dheer. Sidoo kale, xidhitaanka murashaxa dawada ee borotiinka ku jira microsomes-ka microsomes-ka waxay ku dambayn kartaa kala duwanaansho weyn oo ka yimaada natiijooyinka sheybaarada kaladuwan iyo nidaamyo kaladuwan.
S
A: Looma baahna in la mideeyo microsomes-ka hepatic marka hore; U fiirsashada mikrosomes-ka Hanptic ee ku jira xirmada waa 20 mg / ml iyo uruurinta ugu dambeysa ee mikrosomes-ka Hasptic ee nidaamka imtixaanka waa 0.1 - 1 ml / ml, oo si isdaba joog ah loogu dari karo.
S: Waa maxay cufnaanta unugyada ee lagu taliyay tijaabada xasilloonida dheef-shiid kiimikaadka ee hepatocytes-ka koowaad? Xisaabinta xaqiijinta ma la mid tahay mikrosomes beerka?
A: Cufnaanta unugyada ee lagu taliyay ee xasilloonida dheef-shiid kiimikaadka ee Heepatocyte Deepability desy waa 0.5 ilaa 2 × 106 Unugyada / ML, iyo xisaabinta caddeynta iyo ka baaraandegida natiijooyinka isdaba-ka-dheellitirka dheef-shiid kiimikaadka dheef-shiid kiimikaadka ee is-damiska
S: Waa maxay maaddooyinka ugu weyn ee ku jira pbs-kaaga pbs-kaaga? Ma ku jiraan kll iyo nacl?
A: Waxyaabaha ugu waaweyn ee ka kooban PBS Buffer waa K2Hihow4 iyo kh2PO4, waana ka xor ah kll iyo nacl.
S: Waa maxay ujeeddada loo hinjiro sawirrada fosfooraska? Maxaad ugu baahan tahay fosfooraska?
A: Difaaca Phosphate Buffers waxaa loo xushay ujeedadooda ku saabsan qaabeynta jawiga jir ahaaneed, iyo fosfoofinadu waa mid ka mid ah lammaanaha ugu muhiimsan ee loo yaqaan 'Buffer' ee loogu talagalay dayactirka jawiga dareeraha jirka.
S: Waa maxay goobta caadiga ah ee enzyme - Ma jiraa wax xalka ah haddii jilibka loo baahan yahay in nidaamka la tijaabiyo ay liidato?
A: Enzyme daadadku wuxuu u baahan yahay in lagu dhejiyo 3 uruurin oo kaladuwan, heerka uruurinta ayaa u baahan in la daboolo dawada dawada ee waxtarka leh ee la filayo in ay ahaato ugu yaraan hal amar weyn oo ka sarreeya daroogada daroogada dhiigga ee waxtarka leh ee daroogada dhiigga. Haddii silsiladihii ku jira wejiga aqueous ay liidato, dareeraha dabiiciga ah waxaa loo dooran karaa inay tahay xalka, tusaale ahaan Dmso, laakiin xaddiga dareeraha dabiiciga ah ee lagu daray nidaamka ayaa loo baahan yahay in la xakameeyo.
S: Daraasadaha deganaanshaha dheef-shiid kiimikaadka, ma waa lagama maarmaan in la isticmaalo laba nidaam imtixaan, microsomes beerka iyo hepatocytes aasaasiga ah, ee baaritaanka?
A: Qoys microsomes-ka ayaa ku dhow xuubka xuubka xuubka - Heerka hepatocytes-ka aasaasiga ah Daraasadda xasilloonida dheef-shiid kiimikaadka dheef-shiid kiimikaad, looma baahna in la tixgeliyo qiimaha, iyo laba nidaam oo tijaabo ah ayaa loo dooran karaa imtixaanka isla waqtigaas; Ama nidaamka imtixaanka ku habboon ee ku habboon waxaa lagu xusi karaa iyadoo loo eegayo astaamaha dheef-shiid kiimikaadka ee xarunta, waxaana mabda'a uu yahay in nidaamkee uu yahay heer dheef-shiid kiimikaad sare. Guud ahaan, microsomes beerka ayaa ah doorashada ugu fiican marka unugyada xuubka ay ay biyo badan yihiin - milatal iyo mid - dheef-shiid kiimikaadka wajiga ah ee dheef-shiid kiimikaadka ah (gaar ahaan CYP); Marka laba - dheef-shiid kiimikaadka wajiga ah, hydrolysis-ka waa dariiqa dheef-galeenka dheef-galeenka weyn, oo aan ku xirnayn - dheef-shiid kiimikaadku ma muuqato microsomes beerka, baaritaanka waxaa lagu fulin karaa iyadoo la adeegsanayo hepatocytes-ka aasaasiga ah.
S: Uruurinta microsomes-ka ma lagu baaray baaritaanka xasilloonida dheef-shiid kiimikaadka? Waa maxay saamaynta aad u sarreysa ama aad u hooseysa?
A: Imtixaanka deganaanshaha dheef-shiid kiimikaadka, feejignaanta borotiinka ayaa waliba saameyn ku yeelan doonta heerka dheef-shiid kiimikaadka, sida caadiga ah dooro qalabka 'mikrocolic', sida caadiga ah dooro protein-ka mikrosomal ee 0.1 ml / ml ~ Aad u sarreeya oo ka mid ah borotiinka mikrosomal wuxuu kuu horseedi doonaa - mid gaar ah oo daroogada ah oo ku saabsan borotiinka micronomal ah; In kasta oo aad u foorarsatid borotiinka mikrosomal waxay u horseedi kartaa dheef-shiid kiimikaad aan micno lahayn oo daroogada ah.