П: Како да одаберем микросоме и хепатоците за студије метаболичке стабилности? Могу ли да изаберем само једног од њих да бих испунио захтев?
О: У студији метаболичке стабилности, избор јетрених микросомих или хепатоцита углавном зависи од метаболичких својстава једињења, при чему је изабран са високом метаболичком стопом. Генерално, пожељни су јетрени микросоми, посебно када су једињени молекули више воде растворљиви и један - метаболизам фазе је главни метаболички пут (посебно путем ЦИП-а). Хепатоцити се могу користити за експерименте када постоје докази о два - метаболизма фазе, као главна стаза, хидролиза као главна метаболичка стаза, високо неспецифично везивање протеина у јетри у јетри микросоми и метаболизам у јетри у јетри микросоми нису евидентни. Обично се један метаболички систем може одлучити да задовољи потребе; Ако су услови у свим аспектима, дефинитивно је најбоље одабрати оба система истовремено.
П: Зашто је потребно користити примарне хепатоците за ензимску индукцију?
О: ЦИП ензим - изазвани тест мора да пређе из "транскрипције", "превод" на "пост - транслацијску модификацију протеина" да би се добио активни протеин ЦИП ензим. Стога би систем за тестирање требао бити ћелије јетре, а не јетрени микросоми или јетра С9.
П: Зашто морам да изаберем три главна хепатоцита за људске донатора за индукциони тест за индукцију ензима?
О: Према увођењу у смернице за интеракције лекова, требало би користити најмање три донатора, а индукциони резултат сваког донатора треба да се процени одвојено. Поред израде статистички значајних резултата, избор три донатора за експеримент је такође важније за процену интер - појединачних варијација. Ако је резултат од најмање једног донатора прећи унапред одређени праг, кандидат за лекове може бити индуцибилан и праћење је - потребна је евалуација.
П: Зашто се фокусирати само на индукцију ензима ЦИП-а, а не на индукцији УГТ ензима?
О: Разлог за фокусирање на индукцију ЦИПАСЕ је да је механизам индукције ЦИПАСЕ јасније проучаван. Другим речима, разлог да се не захтијева проучавање индукције УГТасе је да је механизам још увек нејасан; Међутим, то не значи да се УГТасе неће изазвати. Смјернице такође наводе да не постоји стандардизовани систем класификације за индукцију или инхибиторе транспорта и ензима метаболизма фазе.
П: Колико дуго могу да адвотирају примарни хепатоцити након оживљавања и колико дуго се хепатоцити могу одржати без адвокатске културе након оживљавања?
О: Пастеризовани примарни хепатоцити се углавном користе за испитивање индукције ензима. Након опоравка ћелије ћелије су суспендоване у средњем плочици који се шири, прилагођене одговарајућој концентрацији и култивисани у тањири премазаним колагеном; Тада ћелије могу пастеризирати у року од 4 ~ 6 сати. Након што су ћелије причвршћене на зид, медијум за одржавање је замењен и одржаван током 18 х како би се осигурала максимална рестаурација ћелијске државе. Затим се може извршити испитивање индукције ензима да би се открила метаболичка активност и ниво индукције МРНА. Из перспективе целог циклуса, хепатоцити се могу одржавати за 6 ~ 7 дана након придржавања зида. Како време пролази, држава придржавања ћелијске зида погоршава се, а ћелије ће се одвојити и суспендовати.
Ако се адхерентни хепатоцити не култивирају, верификовали смо да се могу одржати у добром стању у року од 4 ~ 6 сати. Још нисмо проверили верификацију дужег периода.
П: Хепатоцити се могу користити и као суспензију и придржавају ћелије у зависности од различитих медија за културу?
О: Већина ћелија из чврстих ткива и органа је зидана, али нису све ћелије зидане када се култивирају у витроу. Да ли су ћелије зид - придржавају или не зависе од саме државе; Истовремено, зид - придржавана ћелијама је потребна специфична култура средње и неке посебне професионалне материје (нпр., Рхамногелиноген, ламинин, фибронектин, фактор експанзије серума) који могу учествовати у процесу привржености ћелија. Закључно, адхерентне ћелије се могу користити као ћелије суспензије, али ћелије суспензије нису нужно доступне за прикупљање пријаве.
П: Које су предности / недостатке употребе адхерентног зидног стихове суспензије хепатоцита? Који су критеријуми одлучивања?
О: Након што су изоловани хепатоцити, они се могу култивирати у суспензији или у лепљивом зиду. Активност цитохроме П450 ензима из огибљење култивисаних примарних хепатоцита је најсветивнија са оним у - вивоу за прве 4 ~ х, а затим се брзо смањује уз продужење времена. Стога се суспензијски хепатоцити углавном користе за студију метаболичке стабилности или студију профилирања метаболита. Примарни хепатоцити култивисани у адхерентном зиду имају довољно времена да се опораве од штете да би се одржали биолошке карактеристике и метаболичка активност нормалних хепатоцита. Дакле, они се углавном користе за индукцијске студије ензима, студије цитотоксичности на лекове, метаболичка стабилност спорог метаболизације дрога или студија инферензора производа.
Тренутно не пружамо услугу куповине путем веб странице. Производи додани у корпу за куповину након регистрације и пријаве су само за референцу. Ако требате да купите наше производе, оставите своје контакт податке путем контактног америчког канала и ми ћемо вас контактирати на време да довршимо наше услуге.
П: Како се не привезују специфични везни протеин утиче на резултате испитивања?
О: Ако кандидат за дрогу се не налази посебно на микросомске протеине, то резултира измењеним кинетичким параметрима. Како се концентрација протеина повећава, вредност КМ се повећава, што резултира слабом претпостављеном интринсичном одобрењем. Такође, везивање кандидата за лекове у протеине у микросомима може резултирати великим варијацијама у резултатима различитих лабораторија и различитих система.
П: Препоручена концентрација микросомалног протеина јетре у приручнику за упутство за фазу И или фазе ИИ метаболичке стабилности је 0,1 мг / мл - 1 мг / мл, да ли то значи да када их користи јетрени микросоми, још увек их је потребно добро развити пре него што их ублажи у систем?
О: Нема потребе да прво разресите јетрени микросоми; Концентрација јетрених микросоми у комплету је 20 мг / мл, а коначна концентрација јетречких микросоми у тестном систему је 0,1 - 1 мг / мл, што се може додати пропорционално.
П: Која је препоручена густина ћелије за тестирање метаболичких стабилности примарних хепатоцита? Да ли је прорачун одобрења исто што и за микросоме јетре?
О: Препоручена густина ћелије за примарни хепатоцитни тест метаболичке стабилности је 0,5 до 2 × 106 Ћелије / мЛ и прорачуни клиренса и прерада резултата хепатичке микросомалне метаболичке испитивања стабилности су доследна.
П: Који су главни састојци у вашем ПБС пуферу? Да ли садржи КЦЛ и НаЦл?
О: Главне компоненте нашег ПБС пуфера су к2ХПО4 и КХ2PO4и бесплатни су од Кцл и НаЦл.
П: Која је сврха фосфатних пуфера? Зашто вам треба фосфат?
О: Фосфатни пуфери су изабрани у сврху опонашања физиолошког окружења, а фосфат је један од најважнијих парова пуфера за одржавање течно окружење тела.
П: Шта је уобичајено подешавање за ензимску концентрацију рецептора изазвана? Постоји ли неко решење ако је растворљивост система тестиран лош?
О: Потребно је поставити тест индукције ензима са 3 различите концентрације, ниво концентрације треба да покрије очекивану ефикасну концентрацију лекова у крви у људима, а највећа концентрација је одабрана барем једном редоследом веће од просечне ефикасне концентрације лекова у крви. Ако је растворљивост у воденој фази сиромашна, органски растварач се може изабрати као свој растварач, нпр. ДМСО, али количина органског растварача који се додаје у систем треба да се контролише.
П: Да ли је у метаболичким студијама стабилности потребно користити два испитивања система, микросомима јетре и примарне хепатоците за тестирање?
О: Епатични микросоми су скоро сферична мембрана весикала - попут структура које су формиране самопоузданом фрагментираном ендоплазмичком ретикулутом добијеном током хомогенизације и диференцијалне центрифугирања хепатичких ткива и садрже ЦИП450 ензими и неке бифачине ензиме, нпр., УГТС, нпр. Примарни хепатоцити (ПЗС) су хепатоцити који се култивирају одмах након директне изолације од животињског јетра, који у основи одржавају метаболичке функције јетре, посебно боље очување нивоа ензима у складу са онима ин виво. У студији метаболичке стабилности нема потребе да се разматра трошкови, а два испитивана система могу се истовремено одабрати за тест; Или одговарајући систем испитивања може се одабрати према метаболичким својствима једињења, а принцип је онај који систем има високу метаболичку брзину. Генерално, јетрени микросоми су најбољи избор када су једињени молекули више растворљиви на води и један - фазни метаболизам је главни метаболички пут (посебно путем ЦИП-а); Када је два - фазна метаболизам главни пут, хидролиза је главна метаболичка стаза, не - специфичан протеински везивање у јетрима је веома висок, а метаболизам није очигледан у јетри у микросомима, тест се може извести коришћењем примарних хепатоцита.
П: Да ли је концентрација микросоми испитана у тесту метаболичке стабилности? Какав је ефекат превисоко или прениско?
О: У тесту метаболичке стабилности, концентрација протеина ће такође утицати на метаболичку брзину, обично бира концентрацију микросомалне протеине од 0,1 мг / мл ~ 1 мг / мл, специфичан избор колико треба одабрати специфичан облик протеина у складу са сопственим својствима метаболичка једињења. Превисока концентрација микросомног протеина довешће до не специфичног везивања лека на микросомски протеин; Иако је прениска концентрација микросомских протеина може довести до безначајног метаболизма лека.