Splenocyter i immunologisk forskning: Över arter och isolering, frysning, tinningssteg

Nyckelord:Splenocyter (SPLS); Cynomolgus Monkey splenocyter; Rhesus Monkey splenocyter; Hundsplanocyter; Canine splenocyter; Råtta splenocyter; Mus splenocyter; Möss splenocyter; Kanin splenocyter; Splenocyterisolering; Frysande splenocyter; Tinande splenocyter

IPhase -produkt

Splenocyter (SPLS)är en heterogen population av immunceller isolerade från mjälten, ett viktigt organ som är involverat i att filtrera blod, montera immunsvar och upprätthålla homeostas. Dessa celler inkluderar lymfocyter (T -celler, B -celler), makrofager, dendritiska celler och naturliga mördare (NK) -celler, som alla spelar kritiska roller i adaptiv och medfödd immunitet. Splenocyter används ofta i preklinisk och translationell forskning för att studera immunfunktion, vaccinutveckling, autoimmuna sjukdomar och cancerimmunterapi.

Rollen och sammansättningen av splenocyter (SPLS)

Inom mjälten bor splenocyter i distinkta regioner: den röda massa, som filtrerar blod och återvinner gamla röda blodkroppar, och den vita massan, där immunsvar initieras. Den vita massan är organiserad i T -cellzoner och B -cellfolliklar, vilket underlättar interaktioner mellan antigen - som presenterar celler och lymfocyter. Denna unika arkitektur gör splenocyter (SPLS) till ett kraftfullt verktyg i immunologiska analyser såsom ELISPOT, flödescytometri och blandade lymfocytreaktioner.

Arter - Specifika splenocyter (SPLS)

-Cynomolgus apa splenocyter:Cynomolgus -apa splenocyter används i preklinisk forskning eftersom de närmare efterliknar mänskliga immunsvar, vilket gör Cynomolgus Monkey splenocyter idealiska för translationella studier.

-Rhesus Monkey Splenocyter:Rhesus Monkey splenocyter värderas på samma sätt för sina nära immunologiska likheter med människor. Studier som använder rhesus -apa splenocyter hjälper till att överbrygga klyftan mellan djurmodeller och kliniska tillämpningar.

-Hundplenocyter / hundsplenocyter:I veterinärforskning används hundsplenocyter (eller hundspaltare) för att studera immunstörningar i hundar och för att göra jämförelser med mänskliga immunsvar.

-Kaninspynt: Rabbit splenocyter är viktiga i studier på antikroppsproduktion och vaccinutveckling. Rabbit splenocyter hjälper till att avslöja detaljer som kan skilja sig från mus -splenocyter eller råtta splenocyter.

-Mus splenocyter / möss splenocyter:Musplenocyter är en av de oftast studerade splenocyter (SPLS) i immunologi. Protokoll för isoleringssplenocyter från möss är väl etablerade, och både mus -splenocyter och möss splenocyter används för flödescytometri, elispot och andra funktionella analyser.

-Råtta splenocyter:Råttens splenocyter ger en kompletterande modell för immunotoxikologi och vaccinstudier. Råttens splenocyter jämförs ofta med mus -splenocyter för att förstå skillnader i mellanrum.

Splenocyterisolering

Splenocyterisoleringär processen att extrahera immunceller från mjälten som ska användas i olika forskningsapplikationer, såsom flödescytometri, cytokinproduktionsanalyser eller blandade lymfocytreaktioner.

Mjälten avlägsnades under aseptiska förhållanden, mark i isoleringslösning och överfördes till ett sterilt rör innehållande RPMI 1640 -medium. Leukocytskiktet uppsamlades noggrant efter centrifugering. Cellerna tvättades med RPMI 1640 -medium, centrifugerades och supernatanten kasserades. Detta tvättsteg upprepades 1 - 2 gånger innan de isolerade cellerna användes för ytterligare experiment.

Frysande splenocyter

Frysande splenocyterär ett avgörande steg för att bevara celler för framtida användning. Kryopreservation gör det möjligt för forskare att lagra splenocyter under längre perioder utan att kompromissa med deras livskraft eller funktionalitet.

Supernatanten av den brunncentrifugerade cellsuspensionen från isoleringssteget kasseras och cellkoncentrationen utspäddes i frysmedium. Lägg till en alikvot i varje frysning av röret och överför till en frysbehållare, så att cellerna förblir i suspension. Frys snabbt frysbehållarna i en - 80 ° C frys. Överför till - 150 ° C frysbehållare (eller flytande kvävetank) för lång - Term lagring.

Tinande splenocyter

Tinande splenocyterMåste göras noggrant för att säkerställa hög cellviabilitet och funktionalitet efter kryokonservering. Tinningsprocessen är vanligtvis snabb för att minimera de skadliga effekterna av DMSO och iskristallbildning.

Cryotubes överförs till ett vattenbad på 37 ° C och tinas tills endast fina iskristaller förblev i rören. Tillsätt 0,5 - 1 ml cellodlingsmedium till det frysta röret, återsuspendera och överför suspensionen till ett 15 ml rör fylld med cellodlingsmedium. Centrifug, ta bort supernatanten och knacka på röret för att lossa cellarrangemanget. Tillsätt 1 ml cellodlingsmedium, blåsa och återsuspendera med en pipett, tillsätt medium till en volym av 15 ml. Centrifuge, de - Supernatize, tillsätt 1 ml cellodlingsmedium, tillsätt medium enligt förväntad cellkoncentration. Placera cellerna i en CO2 -inkubator och inkubera för 1H med ett litet gap i locket. I slutet av inkubationen, återsuspendera och lämna i 1 min för att låta det aggregerade cellskräpet fälla ut. Cellsuspensionen utan nederbörd överfördes noggrant till ett nytt 15 ml rör. Celler räknades för att bestämma cellaktivitet.

Slutsats

Splenocyter, med sin olika sammansättning och viktig roll i immunsvar, är ovärderliga verktyg i immunologisk forskning. Oavsett om det härrör från gnagare, primater eller andra arter som kaniner och hundar, splenocyter underlättar kritiska studier i immunfunktion, sjukdomsmekanismer, vaccinutveckling och cancerimmunterapi. Processerna för isolering, frysning och tining är viktiga för att bevara deras integritet och livskraft, vilket gör det möjligt för forskare att utforska cellulär dynamik över olika modeller. När vår förståelse av immunologi fördjupas kommer användningen av splenocyter att fortsätta att vara avgörande för att överbrygga klyftan mellan prekliniska studier och kliniska tillämpningar, vilket säkerställer framsteg inom både mänsklig och veterinärmedicin.