S: Metabolik stabilite çalışmaları için mikrozomları ve hepatositleri nasıl seçmeliyim? Gereksinimi yerine getirmek için bunlardan sadece birini seçebilir miyim?
C: Metabolik stabilite çalışmasında, karaciğer mikrozomlarının veya hepatositlerin seçimi esas olarak bileşiklerin metabolik özelliklerine bağlıdır, burada yüksek metabolik hıza sahip olanı seçilir. Genel olarak, özellikle bileşik moleküller daha fazla su - çözünür ve bir - faz metabolizması ana metabolik yol (özellikle CYP yoluyla) olduğunda karaciğer mikrozomları tercih edilir. Hepatositler, ana yol olarak iki - faz metabolizması, ana metabolik yol olarak hidroliz, karaciğer mikrozomlarında yüksek spesifik olmayan protein bağlanması ve karaciğer mikrozomlarında metabolizmanın kanıtı olduğunda deneyler için kullanılabilir. Genellikle, ihtiyaçları karşılamak için bir metabolik sistem seçilebilir; Her açıdan koşullar izin veriyorsa, her iki sistemi de aynı anda seçmek kesinlikle en iyisidir.
S: Enzim indüksiyon deneyi için primer hepatositlerin kullanılması neden gereklidir?
A: CYP enzimi - İndüklenen tahlil, aktif bir CYP enzim proteini elde etmek için "transkripsiyon", "çeviri" 'den "Proteinin Post - Çeviri Değişikliği" e geçmelidir. Bu nedenle, test sistemi karaciğer mikrozomları veya karaciğer S9 değil karaciğer hücreleri olmalıdır.
S: Enzim indüksiyon deneyi için neden üç donör insan primer hepatositini seçmem gerekiyor?
C: İlaç etkileşimleri yönergelerine girişine göre, en az üç donör kullanılmalı ve her donörün indüksiyon sonucu ayrı ayrı değerlendirilmelidir. İstatistiksel olarak anlamlı sonuçlar üretmenin yanı sıra, deney için üç donör seçimi de bireysel varyasyonu değerlendirmek için daha önemlidir. En az bir donörden elde edilen sonuç önceden belirlenmiş bir eşiği aşarsa, ilaç adayı indüklenebilir ve takip - değerlendirme gereklidir.
S: Neden UGT enzim indüksiyonuna değil, sadece CYP enzim indüksiyonuna odaklanalım?
C: Cypase indüksiyonuna odaklanmanın nedeni, cypase indüksiyon mekanizmasının daha net bir şekilde incelenmesidir. Başka bir deyişle, UGTase indüksiyonunun incelenmesini gerektirmemenin nedeni, mekanizmanın hala belirsiz olmasıdır; Ancak bu, UGTase'nin indüklenmeyeceği anlamına gelmez. Kılavuzlar ayrıca taşıyıcıların indükleyicileri veya inhibitörleri ve faz II metabolizma enzimleri için standart bir sınıflandırma sistemi olmadığını da belirtmektedir.
S: Aka yapışkan primer hepatositler resüsitasyondan sonra ne kadar hayatta kalabilir ve hepatositler resüsitasyondan sonra yapışkan kültür olmadan ne kadar sürdürülebilir?
A: Pastörize birincil hepatositler genellikle enzim indüksiyon deneyleri için kullanılır. Hücre geri kazanımından sonra hücreler plaka yayma ortamında süspanse edilir, uygun konsantrasyona ayarlanır ve kollajen - kaplanmış plakalarda kültürlenir; Daha sonra hücreler 4 ~ 6 saat içinde pastörize edilebilir. Hücreler duvara bağlandıktan sonra, bakım ortamı, hücre durumunun maksimum restorasyonunu sağlamak için değiştirilir ve 18 saat süreyle korunur. Daha sonra, metabolik aktivite ve mRNA indüksiyon seviyesini tespit etmek için enzim indüksiyon deneyi gerçekleştirilebilir. Tüm döngü perspektifinden, hepatositler duvara uyumdan 6 ~ 7 gün süreyle korunabilir. Zaman geçtikçe, hücre duvarı uyum durumu bozulur ve hücreler ayrılır ve askıya alır.
Yapışık hepatositler kültürlenmezse, 4 ~ 6 saat içinde iyi bir durumda korunabileceklerini doğruladık. Henüz daha uzun bir süre doğrulama yapmadık.
S: Hepatositler, kullanılan farklı kültür ortamına bağlı olarak hem süspansiyon hem de yapıştırılmış hücreler olarak kullanılabilir mi?
C: Katı doku ve organlardan gelen hücrelerin çoğu duvarlıdır, ancak - vitro olarak kültürlendiğinde tüm hücreler duvarlı değildir. Hücrelerin duvar - yapışkan olup olmadığı veya hücrelerin durumuna bağlı olup olmadığı; Aynı zamanda, duvar - yapışık hücrelerin spesifik kültür ortamına ve bazı özel pro - hücre yapışma maddeleri (örn. Ramnogelinojen, laminin, fibronektin, serum genişleme faktörü) gerekir. Sonuç olarak, yapışkan hücreler süspansiyon hücreleri olarak kullanılabilir, ancak süspansiyon hücreleri yapışkan kullanım için mutlaka mevcut değildir.
S: Yapışık duvar ayetleri süspansiyon hepatositlerini kullanmanın avantajları/dezavantajları nelerdir? Karar kriterleri nelerdir?
C: Hepatositler izole edildikten sonra, süspansiyonda veya yapışkan duvarda kültürlenebilirler. Süspansiyon kültürlenmiş primer hepatositlerden sitokrom P450 enziminin aktivitesi, ilk 4 ~ 6H için in vivo ile en tutarlıdır, daha sonra zamanın uzatılmasıyla hızla azalır. Bu nedenle, süspansiyon hepatositleri genellikle metabolik stabilite çalışması veya metabolit profil oluşturma çalışması için kullanılır. Yapışan duvarda kültürlenen birincil hepatositlerin, normal hepatositlerin biyolojik özelliklerini ve metabolik aktivitesini korumak için hasardan kurtulmak için yeterli zaman vardır. Bu nedenle, genellikle enzim indüksiyon çalışmaları, ilaç sitotoksisite çalışmaları, yavaş metabolize edici ilaçların metabolik stabilitesi veya ürün çıkarım çalışmaları için kullanılırlar.
Şu anda, web sayfası çevrimiçi satın alma hizmeti sunmuyoruz. Kayıt ve girişten sonra alışveriş sepetine eklenen ürünler yalnızca referans içindir. Ürünlerimizi satın almanız gerekiyorsa, lütfen iletişim bilgilerinizi ABD ile iletişim kanalından bırakın, hizmetlerimizi tamamlamak için sizinle birlikte iletişim kuracağız.
S ： Non - spesifik protein bağlanması test sonuçlarını nasıl etkiler?
A ： İlaç adayı özellikle mikrozomal proteinlere bağlanırsa, bu, değişmiş kinetik parametrelerle sonuçlanır. Protein konsantrasyonu arttıkça, KM değeri artar, bu da düşük varsayılan iç boşluk ile sonuçlanır. Ayrıca, ilaç adayının mikrozomlardaki proteinlere bağlanması, farklı laboratuvarlardan ve farklı sistemlerin sonuçlarında büyük farklılıklara neden olabilir.
Q ： Faz I veya Faz II metabolik stabilite kitinin talimat kılavuzunda önerilen karaciğer mikrozomal protein konsantrasyonu 0.1 mg/ml - 1 mg/ml'dir, bu, karaciğer mikrozomlarını kullanırken, bunları sisteme eklemeden önce iyi seyreltmek için gerekli olduğu anlamına mı geliyor?
A: Önce hepatik mikrozomları seyreltmeye gerek yoktur; Kit içindeki hepatik mikrozomların konsantrasyonu 20 mg/mL'dir ve test sistemindeki hepatik mikrozomların nihai konsantrasyonu, orantılı olarak ilave edilebilen 0.1 - 1 mg/mL'dir.
S ： Birincil hepatositlerin metabolik stabilite testi için önerilen hücre yoğunluğu nedir? Boşluk hesaplaması karaciğer mikrozomları ile aynı mı?
Bir primer hepatosit metabolik stabilite deneyi için önerilen hücre yoğunluğu 0.5 ila 2 x 10'dur6 Hücreler/mL ve klirens hesaplamaları ve hepatik mikrozomal metabolik stabilite tahlilinin sonuçlarının işlenmesi tutarlıdır.
S ： PBS arabelleğinizdeki ana bileşenler nelerdir? KCL ve NaCl içeriyor mu?
A ： PBS tamponumuzun ana bileşenleri k'dır2HPO4 Ve KH2PO4ve KCL ve NaCl içermez.
S fosfat tamponlarının amacı nedir? Neden fosfata ihtiyacınız var?
Bir fosfat tamponları fizyolojik ortamı taklit etme amacıyla seçilir ve fosfat, vücudun sıvı ortamını korumak için en önemli tampon çiftlerinden biridir.
S ： Enzim - indüklenen reseptör konsantrasyonu için olağan ayar nedir? Test edilecek sistemin çözünürlüğü zayıfsa herhangi bir çözüm var mı?
A ： Enzim indüksiyon deneyi 3 farklı konsantrasyonla kurulmalıdır, konsantrasyon seviyesinin insanlarda beklenen etkili kan ilacı konsantrasyonunu kapsaması gerekir ve en yüksek konsantrasyon, insanlarda ortalama etkili kan ilacı konsantrasyonundan en az bir büyüklük sırası olarak seçilir. Sulu fazdaki çözünürlük zayıf ise, çözücü olarak organik bir çözücü seçilebilir, ör. DMSO, ancak sisteme eklenen organik çözücü miktarının kontrol edilmesi gerekir.
S ： Metabolik stabilite çalışmalarında, test için iki test sistemi, karaciğer mikrozomu ve primer hepatosit kullanmak gerekli mi?
Bir ： Hepatik mikrozomlar neredeyse küresel membran veziküldür - hepatik dokuların homojenleştirme ve diferansiyel santrifüjlenmesi sırasında elde edilen parçalanmış endoplazmik retikulumun kendi kendine füzyonu tarafından oluşturulan ve CYP450 enzimleri ve bazı iki -azik enzim, e.g. Birincil hepatositler (PHC'ler), temel olarak karaciğerin metabolik fonksiyonlarını koruyan, özellikle in vivo olanlarla tutarlı enzim seviyelerini daha iyi koruyan hayvan karaciğerlerinden doğrudan izolasyondan hemen sonra kültürlenen hepatositlerdir. Metabolik stabilite çalışmasında maliyeti dikkate almaya gerek yoktur ve test için aynı anda iki test sistemi seçilebilir; veya uygun test sistemi bileşiğin metabolik özelliklerine göre seçilebilir ve prensip, hangi sistemin yüksek metabolik hıza sahip olmasıdır. Genel olarak, bileşik moleküller daha fazla su - çözünür ve bir - faz metabolizması ana metabolik yol (özellikle CYP yoluyla) olduğunda karaciğer mikrozomları en iyi seçimdir; İki - faz metabolizması ana yol olduğunda, hidroliz ana metabolik yoldur, karaciğer mikrozomlarında - spesifik olmayan protein bağlanması çok yüksektir ve metabolizma karaciğer mikrozomlarında açık değildir, test primer hepatositler kullanılarak gerçekleştirilebilir.
S ： Mikrozomların konsantrasyonu metabolik stabilite testinde inceleniyor mu? Çok yüksek veya çok düşük etkisi nedir?
Bir ： Metabolik stabilite testinde, protein konsantrasyonu da metabolik hızı etkileyecektir, genellikle 0.1 mg/ml ~ 1 mg/mL mikrozomal protein konsantrasyonunu seçer, bu da bileşiğin kendi metabolik özelliklerine göre ne kadar protein konsantrasyonunun seçilmesi gerektiğinin spesifik bir seçimdir. Çok yüksek bir mikrozomal protein konsantrasyonu, ilacın mikrozomal proteine spesifik olmayan bir şekilde bağlanmasına yol açacaktır; Çok düşük bir mikrozomal protein konsantrasyonu, ilacın önemsiz metabolizmasına yol açabilir.