Спленоцити в імунологічних дослідженнях: між видами та ізоляцією, замерзанням, відтаванням кроків

Ключові слова:Спленоцити (SPL); Спиноцити Cynomolgus Monkey; Резус -мавпа спленоцити; Собаки спленоцити; Собачі спленоцити; Щурячі спленоцити; Миші спленоцити; Миші спленоцити; Кролячі спленоцити; Ізоляція спленоцитів; Заморожування спленоцитів; Розморочення спленоцитів

Продукт IPHASE

Спленоцити (SPL)є гетерогенною популяцією імунних клітин, виділених із селезінки, життєво важливим органом, що бере участь у фільтруванні крові, монтажі імунних реакцій та підтримання гомеостазу. До таких клітин належать лімфоцити (Т -клітини, В -клітини), макрофаги, дендритні клітини та природні вбивчі (NK) клітини, які відіграють критичні ролі в адаптивному та вродженому імунітеті. Спленоцити широко використовуються в доклінічних та трансляційних дослідженнях для вивчення імунної функції, розвитку вакцини, аутоімунних захворювань та імунотерапії раку.

Роль та склад спленоцитів (SPL)

У межах селезінки спленоцити проживають у різних областях: червона пульпа, яка фільтрує кров і переробляє старі еритроцити та білу пульпу, де ініціюються імунні реакції. Біла целюлоза організовується в Т -клітинні зони та В -клітинні фолікули, полегшуючи взаємодію між антигеном - представляючи клітини та лімфоцити. Ця унікальна архітектура робить спленоцити (SPL) потужним інструментом імунологічних аналізів, таких як ELISPOT, проточна цитометрія та змішані лімфоцитарні реакції.

Види - Специфічні спленоцити (SPL)

-Спиноцити Cynomolgus Monkey:Спиленоцити Cynomolgus Monkey використовуються в доклінічних дослідженнях, оскільки вони більш тісно імітують імунні реакції людини, роблячи спленоцити Monkey Monkey Cynomolgus ідеальними для трансляційних досліджень.

-Резус -мавпа спленоцити:Спиленоцити мавпи резус аналогічно оцінюються за їх тісну імунологічну схожість з людьми. Дослідження, що використовують спленоцити мавпи резусів, допомагають подолати розрив між моделями тварин та клінічними застосуваннями.

-Собаки спленоцити / собачі спленоцити:У ветеринарних дослідженнях спленоцити собак (або собачих спленоцитів) використовуються для вивчення імунних розладів у іклах та для проведення порівняння з імунними реакціями людини.

-Кролячі спленоцити: Кроляні спленоцити важливі для дослідження вироблення антитіл та розвитку вакцини. Кроликові спленоцити допомагають розкрити деталі, які можуть відрізнятися від миші спленоцитів або спленоцитів щурів.

-Миші спленоцити / миші спленоцити:Миші спленоцити - одне з найчастіше вивчених спленоцитів (SPL) в імунології. Протоколи для ізоляційних спленоцитів від мишей добре встановлені, і як миші спленоцити, так і спленоцити мишей використовуються для проточної цитометрії, ELISPOT та інших функціональних аналізів.

-Щурячі спленоцити:Спироцити щурів забезпечують додаткову модель для імунотоксикології та вакцинних досліджень. Спленоцити щурів часто порівнюють із спленоцитами миші, щоб зрозуміти міжвидові відмінності.

Ізоляція спленоцитів

Ізоляція спленоцитів- це процес видобутку імунних клітин із селезінки, який буде використовуватися в різних дослідницьких програмах, таких як проточна цитометрія, аналіз вироблення цитокінів або змішані реакції лімфоцитів.

Селезінку видаляли в асептичних умовах, земля в ізоляційному розчині і переносили в стерильну трубку, що містить середовище RPMI 1640. Шар лейкоцитів ретельно збирали після центрифугування. Клітини промивали середовищем RPMI 1640, центрифугували і супернатант відкидали. Цей етап промивання повторювали 1 - 2 рази до того, як для подальших експериментів були використані ізольовані клітини.

Замерзання спленоцитів

Замерзання спленоцитівє вирішальним кроком для збереження клітин для подальшого використання. Кріоконсервація дозволяє дослідникам зберігати спленоцити протягом тривалих періодів, не порушуючи їх життєздатність чи функціональність.

Супернатант свердловини центрифугної клітинної суспензії від ступеня ізоляції відкидається і концентрацію клітин розводили в замерзаючому середовищі. Додайте аликвоту до кожної замерзаючої трубки та перенесіть у заморожування контейнера, гарантуючи, що клітини залишаються в суспензії. Швидко заморожуйте контейнери з заморожуванням у морозильній камері - 80 ° C. Перенесіть на - 150 ° C контейнер для морозильної камери (або рідкий резервуар азоту) для тривалого - строкового зберігання.

Розморочення спленоцитів

Розморочення спленоцитівПотрібно здійснювати ретельно для забезпечення високої життєздатності та функціональності клітин після кріоконсервації. Процес відтавання, як правило, швидкий, щоб мінімізувати згубні ефекти утворення ДМСО та кристала льоду.

Кріотрубки переносять на водяну баню 37 ° С і розморожуються, поки в трубах не залишилися лише дрібні кристали льоду. Додайте до замороженої трубки 0,5 - 1 мл середовища клітинної культури, повторно перемістіть і перенесіть суспензію в 15 мл трубку, наповнену середовищем культури клітин. Центрифуга, видаліть супернатант і торкніться трубки, щоб послабити розташування клітин. Додайте 1мл середовища культури клітин, видихіть і ресуспенд з піпеткою, додайте середовище до об'єму 15 мл. Центрифуга, DE - Supernatize, додайте 1мл середовища клітинної культури, додавання середовища відповідно до очікуваної концентрації клітин. Помістіть клітини в інкубатор CO2 і інкубуйте протягом 1 год з невеликим проміжком кришки. В кінці інкубації ресуспенд і залиште протягом 1 хв, щоб дозволити осадження агрегованих клітин. Клітинна суспензія без опадів ретельно переносилася на нову трубку 15 мл. Клітини підраховували для визначення активності клітин.

Висновок

Спленоцити з різноманітним складом та ключовою роллю в імунних реакціях є неоціненними інструментами в імунологічних дослідженнях. Незалежно від того, похідні від гризунів, приматів чи інших видів, таких як кролики та собаки, спленоцити полегшують критичні дослідження імунної функції, механізмів захворювання, розвиток вакцини та імунотерапії раку. Процеси ізоляції, заморожування та відтавання мають важливе значення для збереження їх цілісності та життєздатності, що дозволяє дослідникам досліджувати клітинну динаміку в різних моделях. У міру поглиблення нашого розуміння імунології використання спленоцитів продовжуватиметься важливим фактором для подолання розриву між доклінічними дослідженнями та клінічними застосуваннями, забезпечуючи прогресу як у людській, так і в ветеринарній медицині.