س: میٹابولک استحکام کے مطالعے کے لئے مجھے مائکروسوم اور ہیپاٹائٹس کا انتخاب کیسے کرنا چاہئے؟ کیا میں ضرورت کو پورا کرنے کے لئے ان میں سے صرف ایک کا انتخاب کرسکتا ہوں؟
A: میٹابولک استحکام کے مطالعے میں ، جگر کے مائکروسومز یا ہیپاٹائٹس کا انتخاب بنیادی طور پر مرکبات کی میٹابولک خصوصیات پر منحصر ہوتا ہے ، جس میں ایک اعلی میٹابولک ریٹ والا انتخاب کیا جاتا ہے۔ عام طور پر ، جگر کے مائکروسوم کو ترجیح دی جاتی ہے ، خاص طور پر جب کمپاؤنڈ انو زیادہ پانی ہوتے ہیں - گھلنشیل اور ایک - فیز میٹابولزم مرکزی میٹابولک راستہ ہے (خاص طور پر سی وائی پی کے ذریعے)۔ ہیپاٹوسائٹس کو تجربات کے لئے استعمال کیا جاسکتا ہے جب دو مرحلے کے میٹابولزم کے بڑے راستے کے طور پر ، ہائیڈولائسز ، بڑے میٹابولک راستے کے طور پر ہائیڈولیسس ، جگر کے مائکروسومز میں اعلی نان اسپیسفک پروٹین بائنڈنگ ، اور جگر کے مائکروسوم میں میٹابولزم واضح نہیں ہے۔ عام طور پر ، ضروریات کو پورا کرنے کے لئے ایک میٹابولک نظام کا انتخاب کیا جاسکتا ہے۔ اگر تمام پہلوؤں کی شرائط کی اجازت ہے تو ، ایک ہی وقت میں دونوں سسٹم کا انتخاب کرنا یقینی طور پر بہتر ہے۔
س: انزائم انڈکشن پرکھ کے لئے پرائمری ہیپاٹائٹس کا استعمال کیوں ضروری ہے؟
A: CYP انزائم - حوصلہ افزائی پرکھ کو "ٹرانسکرپشن" ، "ترجمہ" سے "پوسٹ - پوسٹ - پروٹین کی ترجمانی ترمیم" سے جانے کی ضرورت ہے تاکہ ایک فعال CYP انزائم پروٹین حاصل کیا جاسکے۔ لہذا ، ٹیسٹ سسٹم جگر کے خلیات ہونا چاہئے ، جگر مائکروسوم یا جگر S9 نہیں۔
س: مجھے انزائم انڈکشن پرکھ کے لئے تین ڈونر ہیومن پرائمری ہیپاٹائٹس کا انتخاب کرنے کی ضرورت کیوں ہے؟
ج: منشیات کی بات چیت کے لئے رہنما خطوط کے تعارف کے مطابق ، کم از کم تین ڈونرز استعمال کیے جائیں ، اور ہر ڈونر کے شامل ہونے کے نتیجے میں الگ سے اندازہ کیا جانا چاہئے۔ اعداد و شمار کے لحاظ سے اہم نتائج پیدا کرنے کے علاوہ ، تجربے کے لئے تین ڈونرز کا انتخاب انٹر - انفرادی تغیرات کا اندازہ کرنے کے لئے بھی زیادہ اہم ہے۔ اگر کم از کم ایک ڈونر کا نتیجہ پہلے سے طے شدہ حد سے تجاوز کر جاتا ہے تو ، منشیات کا امیدوار ناقابل تسخیر ہوسکتا ہے اور اس کی پیروی کی جاسکتی ہے۔ تشخیص کی ضرورت ہے۔
س: صرف سی وائی پی انزائم انڈکشن پر کیوں توجہ مرکوز کریں اور یو جی ٹی انزائم انڈکشن پر نہیں؟
A: Cypase شامل کرنے پر توجہ دینے کی وجہ یہ ہے کہ Cypase شامل کرنے کے طریقہ کار کا زیادہ واضح طور پر مطالعہ کیا گیا ہے۔ دوسرے لفظوں میں ، یوگٹیس انڈکشن کے مطالعہ کی ضرورت نہ کرنے کی وجہ یہ ہے کہ یہ طریقہ کار ابھی بھی واضح نہیں ہے۔ تاہم ، اس کا مطلب یہ نہیں ہے کہ یوگٹیس کی حوصلہ افزائی نہیں کی جائے گی۔ رہنما خطوط میں یہ بھی بتایا گیا ہے کہ ٹرانسپورٹرز اور فیز II میٹابولزم انزائمز کے انڈوسیسرز یا روکنے والوں کے لئے کوئی معیاری درجہ بندی کا نظام موجود نہیں ہے۔
س: بحالی کے بعد پرائمری ہیپاٹائٹس کی پیروی کتنی دیر تک زندہ رہ سکتی ہے ، اور بحالی کے بعد ہیپاٹائکسائٹس کو کس حد تک برقرار رکھنے کے بغیر برقرار رکھا جاسکتا ہے؟
A: عام طور پر انزائم انڈکشن اسیس کے لئے پیسٹورائزڈ پرائمری ہیپاٹائٹس استعمال کیے جاتے ہیں۔ سیل کی بازیابی کے بعد ، خلیوں کو پلیٹ پھیلانے والے درمیانے درجے میں معطل کیا جاتا ہے ، مناسب حراستی میں ایڈجسٹ ہوتا ہے ، اور کولیجن میں مہذب ہوتا ہے - لیپت پلیٹیں ؛ پھر خلیوں کو 4 ~ 6 گھنٹوں کے اندر اندر پیسٹورائز کیا جاسکتا ہے۔ خلیوں کو دیوار سے منسلک کرنے کے بعد ، سیل اسٹیٹ کی زیادہ سے زیادہ بحالی کو یقینی بنانے کے لئے بحالی کا میڈیم 18 گھنٹے کے لئے تبدیل اور برقرار رکھا جاتا ہے۔ اگلا ، میٹابولک سرگرمی اور ایم آر این اے انڈکشن لیول کا پتہ لگانے کے لئے انزائم انڈکشن پرکھ کی جاسکتی ہے۔ پورے چکر کے نقطہ نظر سے ، دیوار کی پیروی کے بعد ہیپاٹائٹس کو 6 ~ 7 دن تک برقرار رکھا جاسکتا ہے۔ جیسے جیسے وقت گزرتا جارہا ہے ، سیل دیوار کی پابندی کی حالت خراب ہوجاتی ہے ، اور خلیات الگ اور معطل ہوجائیں گے۔
اگر پیروکار ہیپاٹائٹس کو مہذب نہیں کیا جاتا ہے تو ، ہم نے تصدیق کی ہے کہ 4 ~ 6 گھنٹوں کے اندر اندر انہیں اچھی حالت میں برقرار رکھا جاسکتا ہے۔ ہم نے ابھی تک طویل عرصے تک توثیق نہیں کی ہے۔
س: استعمال شدہ مختلف ثقافت میڈیا پر منحصر ہے کہ ہیپاٹائکسائٹس کو معطلی اور پیروکار دونوں خلیوں کے طور پر استعمال کیا جاسکتا ہے؟
A: ٹھوس ؤتکوں اور اعضاء کے زیادہ تر خلیات دیواروں پر دیوار لگائے جاتے ہیں ، لیکن جب تمام خلیوں کو 'وٹرو میں مہذب نہیں کیا جاتا ہے تو وہ دیوار نہیں لگاتے ہیں۔ چاہے خلیات دیوار ہیں - پیروی کرتے ہیں یا نہیں خود خلیوں کی حالت پر منحصر ہیں۔ ایک ہی وقت میں ، دیوار - پیروکار خلیوں کو مخصوص ثقافت کے درمیانے درجے اور کچھ خاص پرو - سیل آسنجن مادے (جیسے ، رامنوگیلینوجین ، لامینن ، فائبرونیکٹین ، سیرم توسیع عنصر) کی ضرورت ہوتی ہے جو سیل منسلک کے عمل میں حصہ لے سکتے ہیں۔ آخر میں ، پیروکار خلیوں کو معطلی کے خلیوں کے طور پر استعمال کیا جاسکتا ہے ، لیکن معطلی کے خلیات ضروری طور پر پیروکار استعمال کے لئے دستیاب نہیں ہوتے ہیں۔
س: دیوار آیات معطلی ہیپاٹائٹس کے استعمال کے فوائد/نقصانات کیا ہیں؟ فیصلے کے معیار کیا ہیں؟
ج: ہیپاٹائٹس کو الگ تھلگ ہونے کے بعد ، ان کو معطلی میں یا پیروکار دیوار میں مہذب کیا جاسکتا ہے۔ معطلی مہذب پرائمری ہیپاٹوسائٹس سے سائٹوکوم P450 انزائم کی سرگرمی پہلے 4 ~ 6H کے لئے IN - Vivo کے ساتھ مطابقت رکھتی ہے ، پھر وقت کی لمبائی کے ساتھ تیزی سے کمی واقع ہوتی ہے۔ لہذا ، معطلی ہیپاٹائٹس عام طور پر میٹابولک استحکام کے مطالعے یا میٹابولائٹ پروفائلنگ اسٹڈی کے لئے استعمال ہوتے ہیں۔ پیروکار دیوار میں مہذب پرائمری ہیپاٹوسائٹس کے پاس عام ہیپاٹائٹس کی حیاتیاتی خصوصیات اور میٹابولک سرگرمی کو برقرار رکھنے کے لئے نقصان سے صحت یاب ہونے کے لئے کافی وقت ہوتا ہے۔ لہذا ، وہ عام طور پر انزائم انڈکشن اسٹڈیز ، منشیات کے سائٹوٹوکسائٹی اسٹڈیز ، سست میٹابولائزنگ دوائیوں یا مصنوعات کی تشخیص کے مطالعے کے میٹابولک استحکام کے لئے استعمال ہوتے ہیں۔
فی الحال ، ہم ویب پیج آن لائن خریداری کی خدمت فراہم نہیں کرتے ہیں۔ رجسٹریشن اور لاگ ان کے بعد شاپنگ کارٹ میں شامل کی جانے والی مصنوعات صرف حوالہ کے لئے ہیں۔ اگر آپ کو ہماری مصنوعات خریدنے کی ضرورت ہے تو ، براہ کرم ہم سے رابطہ کریں ہم چینل سے رابطہ کریں ، اور ہم اپنی خدمات کو مکمل کرنے کے لئے وقت کے ساتھ آپ سے رابطہ کریں گے۔
Q ： غیر - مخصوص پروٹین بائنڈنگ ٹیسٹ کے نتائج کو کس طرح متاثر کرتی ہے؟
A ： اگر منشیات کا امیدوار غیر - خاص طور پر مائکروسوومل پروٹینوں سے منسلک ہوتا ہے تو ، اس کے نتیجے میں بدلا ہوا متحرک پیرامیٹرز ہوتے ہیں۔ جیسے جیسے پروٹین کی حراستی میں اضافہ ہوتا ہے ، کے ایم کی قیمت میں اضافہ ہوتا ہے ، جس کے نتیجے میں کم قیاس شدہ داخلی کلیئرنس ہوتی ہے۔ نیز ، مائیکروزومز میں پروٹینوں کے لئے منشیات کے امیدوار کو پابند کرنے کے نتیجے میں مختلف لیبارٹریوں اور مختلف نظاموں کے نتائج میں بڑی مختلف حالتیں ہوسکتی ہیں۔
Q ： مرحلہ I یا فیز II میٹابولک استحکام کٹ کے انسٹرکشن دستی میں جگر کے مائکروسومل پروٹین کی تجویز کردہ حراستی 0.1 ملی گرام/ملی لیٹر - 1 ملی گرام/ملی لیٹر ہے ، کیا اس کا مطلب یہ ہے کہ جب جگر کے مائکروسومز کا استعمال کرتے ہیں تو ، ان کو سسٹم میں شامل کرنے سے پہلے ان کو اچھی طرح سے کمزور کرنا ضروری ہے؟
a: پہلے ہیپاٹک مائکروسومز کو کمزور کرنے کی ضرورت نہیں ہے۔ کٹ میں ہیپاٹک مائکروسومز کی حراستی 20 ملی گرام/ملی لیٹر ہے اور ٹیسٹ سسٹم میں ہیپاٹک مائکروسومس کی حتمی حراستی 0.1 - 1 ملی گرام/ملی لیٹر ہے ، جسے متناسب طور پر شامل کیا جاسکتا ہے۔
Q primary پرائمری ہیپاٹائٹس کے میٹابولک استحکام کی جانچ کے لئے تجویز کردہ سیل کثافت کیا ہے؟ کیا کلیئرنس کا حساب کتاب جگر کے مائکروسومس کے لئے یکساں ہے؟
A ： پرائمری ہیپاٹوسائٹ میٹابولک استحکام پرکھ کے لئے تجویز کردہ سیل کثافت 0.5 سے 2 × 10 ہے6 خلیات/ایم ایل ، اور کلیئرنس کے حساب کتاب اور ہیپاٹک مائکروسومل میٹابولک استحکام پرکھ کے نتائج کی پروسیسنگ مستقل ہیں۔
Q you آپ کے پی بی ایس بفر میں اہم اجزاء کیا ہیں؟ کیا اس میں کے سی ایل اور این سی ایل شامل ہیں؟
A our ہمارے پی بی ایس بفر کے اہم اجزاء K ہیں2HPO4 اور KH2PO4، اور کے سی ایل اور این سی ایل سے پاک ہیں۔
Q the فاسفیٹ بفرز کا مقصد کیا ہے؟ آپ کو فاسفیٹ کی ضرورت کیوں ہے؟
جسمانی ماحول کی نقالی کرنے کے ان کے مقصد کے لئے ایک ： فاسفیٹ بفرز کا انتخاب کیا جاتا ہے ، اور فاسفیٹ جسم کے سیال ماحول کو برقرار رکھنے کے لئے ایک اہم بفر جوڑے میں سے ایک ہے۔
Q ： انزائم کے لئے معمول کی ترتیب کیا ہے - حوصلہ افزائی رسیپٹر حراستی؟ کیا کوئی حل ہے اگر اس نظام کی گھلنشیلتا کا تجربہ کیا جائے؟
A ： انزائم انڈکشن پرکھ کو 3 مختلف حراستی کے ساتھ ترتیب دینے کی ضرورت ہے ، حراستی کی سطح کو انسانوں میں متوقع موثر خون کے منشیات کی حراستی کا احاطہ کرنے کی ضرورت ہے ، اور سب سے زیادہ حراستی کو انسانوں میں اوسط موثر خون کے منشیات کی حراستی سے کم از کم ایک ترتیب کا انتخاب کیا جاتا ہے۔ اگر پانی کے مرحلے میں گھلنشیلتا ناقص ہے تو ، نامیاتی سالوینٹ کو اس کے سالوینٹ کے طور پر منتخب کیا جاسکتا ہے ، جیسے۔ ڈی ایم ایس او ، لیکن نظام میں شامل نامیاتی سالوینٹ کی مقدار کو کنٹرول کرنے کی ضرورت ہے۔
Q met میٹابولک استحکام کے مطالعے میں ، کیا جانچ کے لئے دو ٹیسٹ سسٹم ، جگر کے مائکروسومس اور پرائمری ہیپاٹوسائٹس کا استعمال کرنا ضروری ہے؟
ایک ： ہیپاٹک مائکروسومز تقریبا کروی جھلیوں کے واسیکل ہوتے ہیں جیسے خود سے تشکیل پائے جانے والے ڈھانچے - بکھرے ہوئے endoplasmic reticulum کے فیوژن کے فیوژن کے فیوژن اور ہیپاٹک ؤتکوں کی ہم آہنگی کے دوران حاصل کیے جاتے ہیں ، اور CYP450 انزائمز اور کچھ بائیفاسک انزائمز ، جیسے پر مشتمل ہیں۔ پرائمری ہیپاٹائکسائٹس (پی ایچ سی) جانوروں کے رہائشیوں سے براہ راست تنہائی کے فورا. بعد ہیپاٹائٹس مہذب ہیں ، جو بنیادی طور پر جگر کے میٹابولک افعال کو برقرار رکھتے ہیں ، خاص طور پر ویوو میں ان لوگوں کے ساتھ مطابقت رکھنے والے انزائم کی سطح کو بہتر بنانا۔ میٹابولک استحکام کے مطالعے میں ، لاگت پر غور کرنے کی ضرورت نہیں ہے ، اور ایک ہی وقت میں ٹیسٹ کے لئے دو ٹیسٹ سسٹم کا انتخاب کیا جاسکتا ہے۔ یا مناسب ٹیسٹ سسٹم کا انتخاب کمپاؤنڈ کی میٹابولک خصوصیات کے مطابق کیا جاسکتا ہے ، اور اصول یہ ہے کہ کس نظام میں اعلی میٹابولک شرح کا انتخاب کیا جاتا ہے۔ عام طور پر ، جگر کے مائکروسومز بہترین انتخاب ہوتے ہیں جب کمپاؤنڈ انو زیادہ پانی ہوتے ہیں - گھلنشیل اور ایک - فیز میٹابولزم مرکزی میٹابولک راستہ ہے (خاص طور پر سی وائی پی کے ذریعے) ؛ جب دو - فیز میٹابولزم مرکزی راستہ ہے تو ، ہائیڈولیسس ایک اہم میٹابولک راستہ ہے ، جگر کے مائکروسومز میں غیر - مخصوص پروٹین بائنڈنگ بہت زیادہ ہے ، اور جگر کے مائکروسومز میں میٹابولزم واضح نہیں ہے ، پرائمری ہیپاٹائٹس کا استعمال کرتے ہوئے ٹیسٹ کیا جاسکتا ہے۔
Q ： کیا میٹابولک استحکام ٹیسٹ میں مائکروسومز کی حراستی کی جانچ کی گئی ہے؟ بہت زیادہ یا بہت کم کا اثر کیا ہے؟
A met میٹابولک استحکام ٹیسٹ میں ، پروٹین کی حراستی میٹابولک کی شرح کو بھی متاثر کرے گی ، عام طور پر 0.1 ملی گرام/ملی لیٹر ~ 1 ملی گرام/ملی لیٹر کے مائکروسوومل پروٹین حراستی کا انتخاب کریں ، کمپاؤنڈ کی اپنی میٹابولک خصوصیات کے مطابق پروٹین کی حراستی کو کتنا منتخب کیا جانا چاہئے۔ مائکروسوومل پروٹین کی بہت زیادہ حراستی مائکروسوومل پروٹین کو منشیات کے مخصوص پابند کرنے کا باعث بنے گی۔ جبکہ مائکروسومل پروٹین کی حراستی بہت کم ہے تو اس سے منشیات کی معمولی تحول کا سبب بن سکتا ہے۔