Savol: Metrosomlarni va metabolik barqarorlik tadqiqotlari uchun mikrosoma va gepatotsitlarni qanday tanlashim kerak? Talabni bajarish uchun ulardan birini tanlashim mumkinmi?
Javob: Jigar mikrosomalarini yoki gepatotsitlarini tanlash asosan metabolik stavka bilan jihozlangan birikmalarning metabolik xususiyatlariga bog'liq. Umuman olganda, jigar mikrososomalari afzal ko'riladi, ayniqsa aralash molekulalar ko'proq suvga ega bo'lganda, eriydi va bitta - faza metabolizm - bu asosiy metabolizm (ayniqsa CyP orqali). Gepatotsitlar ikkitadan dalillar mavjud bo'lganda, eng asosiy metabolizm, katta metabolik tutqich, jigar mikrosomalarida, jigar mikrosomalarida mikrolizik va metabolizmning yuqori nuqsonli oqsilsi aniq ko'rinmaydi. Odatda, ehtiyojlarni qondirish uchun bitta metabolik tizim tanlanishi mumkin; Agar barcha jihatlardagi shartlar imkon bersa, bu bir vaqtning o'zida ikkala tizimni tanlash yaxshidir.
Savol: Nima uchun nega indüker indeksi bo'yicha fermentlar uchun asosiy gepatototsitlardan foydalanish kerak?
Javob: Cyp Fermme - "Post - Proteinni tarjima" dan "Transpilite" ga o'tishi kerak, "Proteinni tarjima" ga o'tishi kerak. Shuning uchun, sinov tizimi jigar hujayralari, jigar mikrosomalari yoki jigar S9 emas.
Savol: Nima uchun men 3 donor insoniy gepatotsitni ferment indeksi uchun fermentning boshpanalarini tanlashim kerak?
Javob: Giyohvand moddalararo ta'sir qilish bo'yicha ko'rsatmalarga kirish bo'yicha kamida uchta donorlardan foydalanish kerak va har bir donorning induktion natijasi alohida baholanishi kerak. FASTITSTIY HAQIQAT NATBALARINI BILMAYDI, Imkoniyat uchun uchta donorni tanlash ham asosiy o'zgarishlarni baholash muhimdir. Hech bo'lmaganda bitta donordan olingan natijalar oldindan belgilangan chegaradan oshsa, preparat nomzodi asoslanib, unga baho berish talab etiladi.
Savol: Nima uchun faqat faqat Cyp ferment induktsiyasiga e'tiboringizni qaratishga qaratilgan?
Javob: Chiqarish indüksiyasini inobatga olish mexanizmi yanada aniqroq o'rganilganligi. Boshqacha aytganda, UGTAS indenatsiyasini o'rganishni talab qilmaslikning sababi shundaki, mexanizm hali ham aniq emas; Biroq, bu UGTASASASASASASASASIYA QILMAYDI. Ko'rsatmalar, shuningdek, transport vositalarini va II metabolizm fazasi fermentlari uchun standart tasniflash tizimi mavjud emasligini ta'kidlaydi.
Savol: Qayta tiklanishdan keyin qayerli gepatotsitlar qancha vaqtdan beri omon qolishlari mumkin va gepatotsitlar reanimatsiyadan keyin qayerdan asir madaniyatsiz saqlanishi mumkin?
Javob: Pasterizatsiya qilingan birlamchi gepatotsitlar odatda indüksiyon indekslari uchun ishlatiladi. Hujayralarni tiklagandan so'ng hujayralar tegishli konsentratsiyaga moslashtirilgan va kollagenga mos keladigan trafikka uchishadi - qoplangan plitalar; Keyin hujayralar 4 ~ 6 soat ichida pasterizatsiya qilinishi mumkin. Hujayralar devorga biriktirilgandan so'ng, parvarishlash vositasi hujayra shtatini maksimal darajada tiklashni maksimal darajada tiklash uchun 18 soat o'rniga almashtiriladi va saqlanadi. Keyingi, metabolik faoliyatni va metrna inkuction darajasini aniqlash uchun ferment indeksti bo'yicha indeksi o'tkazilishi mumkin. Butun tsiklning nuqtai nazaridan, gepatotsitlar devorni yopishgandan keyin 6 ~ 7 kun davomida saqlanishi mumkin. Vaqt o'tgan sayin, hujayra devori yopishqoqligi yomonlashadi va hujayralar ajratib, to'xtatib qo'yadi.
Agar tarafkash gepatotsitlar madaniy bo'lmagan bo'lsa, biz ularga 4 ~ 6 soat ichida yaxshi holatda saqlanishi mumkinligini tekshirdik. Biz hali ham ko'proq vaqt davomida tekshiruv o'tkazmadik.
Savol: Gepatotitlar turli xil madaniyat medialariga qarab to'xtatib turish va qarori hujayralari sifatida foydalanish mumkinmi?
Javob: Qattiq to'qima va organlarning aksariyat hujayralari devorga o'ralgan, ammo odatiy ekilganda barcha hujayralar o'rnatilmaydi. Hujayralar devordir yoki yo'qmi, tarafkash yoki bo'lmagan hujayralar holatiga bog'liq; at the same time, wall-adherent cells need specific culture medium and some special pro-cell adhesion substances (e.g., rhamnogelinogen, laminin, fibronectin, serum expansion factor) which may participate in the process of cell attachment. Xulosa qilib, sekiv hujayralarni to'xtatib turish hujayralari sifatida ishlatilishi mumkin, ammo to'xtatib turish hujayralari amalda foydalanish uchun mavjud emas.
Savol: Ajratish devorlarini to'xtatib turish uchun ta'sir qiluvchi devorlar oyatlaridan foydalanishning afzalliklari / kamchiliklari qanday? Qaror mezonlari qanday?
Javob: Gepatotsitlar ajratilgandan so'ng, ularni to'xtatib turish yoki amaldagi devorda etishtirish mumkin. Sitxrome p450 fermentining fermentining faolligi, birinchi 4 ~ 6 soat davomida - Vivo-ning eng mos keladi. Shuning uchun, to'xtatib turish gepatotsitlari odatda metabolik barqarorlik yoki metabolit profilli o'rganish uchun ishlatiladi. Ajralgan gepatotsitlarning biologik xususiyatlarini va metabolik faoliyatini ta'minlash uchun zarardan xalos bo'lish uchun ko'p miqdordagi gepatotsitlar etarli vaqt bo'ladi. Demak, ular odatda indüksiyonni indüksiya o'rganish, giyohvandlik tadqiqotlari, giyohvand moddalarni iste'mol qiluvchi dori yoki mahsulotning istisnolarini o'rganishning metabolik barqarorligi uchun ishlatiladi.
Hozirgi vaqtda biz veb-saytni onlayn xarid qilish xizmatini taqdim etmaymiz. Savatga kiritilgan mahsulotlar ro'yxatga olish va kirish faqat ma'lumot uchun berilgan mahsulotlar. Agar siz bizning mahsulotlarimizni sotib olishingiz kerak bo'lsa, iltimos, aloqa ma'lumotlarini AQSh kanaliga murojaat qiling va biz o'z xizmatlarimizni yakunlash uchun siz bilan o'z vaqtida bog'lanamiz.
Savol: Nobo emas - Qanday qilib aniq oqsilni tekshirish sinov natijalariga ta'sir qiladi?
Javob: Agar preparat nomzodlari mikromoliy oqsillarga - xususida mikromoliy oqsillarga ajratilgan kinetik parametrlarda keltirilgan. Protein kontsentratsiyasi oshganda KM qiymati oshadi, natijada past taxminiy tozalash kamroq miqdorida past darajada. Shuningdek, dori-darmon nomzodini mikrososomalarda majburiy ravishda majburiy ravishda majburiy ravishda turli laboratoriyalar va turli xil tizimlar natijalari bo'yicha katta o'zgarishlarga olib kelishi mumkin.
Savol: Jigar mikrosomal oqsilining II metabolik barqarorlik to'plamida tavsiya etilgan kontsentratsiyasi 0,1 mg / ml - 1 mg / ml. Bu jigar mikrosomalarini qo'llashda, ularni tizimga qo'shishdan oldin ularni suyultirish kerakmi?
A: Avval jigar mikrososomalarini suyultirishning hojati yo'q; Kitda jigar mikrososomalarining kontsentratsiyasi 20 mg / ml va sinov tizimida jigar mikrososomalarining yakuniy konsentratsiyasi 0,1 - 1 mg / ml.
Savol: Birlamchi gepatotsitlarni metabolik barqarorlikni tekshirish uchun tavsiya etilgan hujayra zichligi qanday? River mikrosomalari bilan bir xil hisoblashmi?
Javob: Birlamchi gepatotsitlar metabolik barqarorligi assi 0,5 dan 2 × 10 ni tashkil qiladi6 Hujayralar / ml, tozalash hisob-kitoblari va jigar mikrosoma metabolik barqarorligining natijalarini qayta ishlash izchil.
Savol: Sizning PBS tamponingizdagi asosiy ingredientlar nima? Unda KL va Nacl mavjudmi?
Javob: Bizning PBS buferimizning asosiy tarkibiy qismlari k2Hpo4 va X2PO4va KL va NACL-dan bepul.
Savol: Fosfat buferlarning maqsadi nima? Nega sizga fosfat kerak?
Javob: Fosfat buferlari fiziologik muhitni taqlid qilish maqsadida tanlanadi, fosfat tananing suyuq muhitini saqlash uchun eng muhim tamponlardan biridir.
Savol: Odatdagi ferment uchun qaysi parda retseptor kontsentratsiyasini keltirib chiqardimi? Agar tizimning eruvchanligi sinovdan o'tkazilsa, kamchilik bormi?
Javob: 3 xil konsentratsiya bilan ferment induatsiyasi Azizni tashkil qilish kerak, kontsentratsiya darajasi odamlarda kutilayotgan samaradorlikni qoplashi kerak va insonlarda o'rtacha ball miqdorida qonli qon giyohvand moddalar kontsentratsiyasidan yuqori bo'lishi kerak. Agar suvli bosqichda eruvchanlik kambag'al bo'lsa, organik hal qiluvchi, uning erituvchisi sifatida tanlanishi mumkin, masalan, E.G. DMSO, ammo tizimga qo'shilishi kerak bo'lgan organik erituvchilarning miqdori nazorat qilinishi kerak.
Savol: Metabolik barqarorlik bo'yicha tadqiqotlar, ikki test tizimi, jigar mikrosomalari va birlamchi gepatotsitlardan sinov uchun foydalanish kerakmi?
Javob: Jigar mikrosomalari deyarli sezgir va jigar to'qimalarining differentsial ravishda shakllangan tuzilmalari va syph450 fermentlari va ba'zi bakalavric fermentlar va ba'zi bakalavit fermentlar va ba'zi bas450 fermentlari va ba'zi bakalavik fermentlar va ba'zi bakalavit fermentlar va ba'zi bakalavit fermentlar va ba'zi bas-osma fermentlar va ba'zi bas, uyalar. Birlamchi gepatotsitlar (PHCS) - bu jigarning metabolik funktsiyalarini, ayniqsa vivo-dagi metabolik funktsiyalarini saqlab qolgan holda, gifo fazilatlarini saqlab qolgan holda, fermaning metabolik funktsiyalarini saqlab qolgandan so'ng, asta-sekin ekish vositalarini saqlab qoladi. Metabolik barqarorlikni o'rganishda xarajatlarni hisobga olishning hojati yo'q va bir vaqtning o'zida sinov uchun ikkita test tizimini tanlab olish mumkin; Yoki tegishli test tizimi aralashmaning metabolik xususiyatlariga muvofiq tanlanishi mumkin va printsip shundan iboratki, bu tizim yuqori metabolik stavka tanlangan. Umuman olganda, jigar mikrosomalari eng yaxshi tanlovdir - eriydi va bitta - faza metabolizm - bu asosiy metabolizm (ayniqsa CyP orqali); Ikkita - faza almashinuvi asosiy yo'ldir, asosiy metabolizm - bu asosiy metabolik metabolik metabolik yo'ldir, ammo jigar mikrosomalaridagi muayyan protein juda yuqori, metabolizm jigar mikrosomalarida aniq emas, testning birlamchi gepatotsitlar yordamida amalga oshirilishi mumkin.
Savol: metabolik barqarorlik sinovida ko'rib chiqilgan mikrososomalarning kontsentratsiyasi? Juda yuqori yoki juda past ta'sir nima?
Javob: Proteinning kontsentratsiyasi metabolik stavkaga ham ta'sir qiladi, odatda mikrosomalning mikrosoma kontsentratsiyasini 0,1 mg / mg mikrofon kontsentratsiyasini tanlang, mikrosoma kontsentratsiyasini murakkab konsentratsiyaning o'ziga xos tanlovi aralashadigan konsentratsiyani kuchaytirishning o'ziga xos tanlovi. Mikrosomal proteinning haddan tashqari yuqori kontsentratsiyasi preparatning mikromolmal oqsiliga xos bo'lmagan dori-darmonga olib keladi; Mikrosomal oqsilning kontsentratsiyasi ham preparatning ahamiyatsiz metabolizmiga olib kelishi mumkin.