Q: Làm thế nào tôi nên chọn microsome và tế bào gan cho các nghiên cứu ổn định trao đổi chất? Tôi chỉ có thể chọn một trong số họ để đáp ứng yêu cầu?
Trả lời: Trong nghiên cứu ổn định trao đổi chất, việc lựa chọn microsome gan hoặc tế bào gan chủ yếu phụ thuộc vào tính chất trao đổi chất của các hợp chất, trong đó một loại có tốc độ trao đổi chất cao được chọn. Nói chung, microsome gan được ưa thích, đặc biệt là khi các phân tử hợp chất có nhiều nước hơn - hòa tan và một - chuyển hóa pha là con đường trao đổi chất chính (đặc biệt là thông qua CYP). Tế bào gan có thể được sử dụng cho các thí nghiệm khi có bằng chứng về hai - chuyển hóa pha là con đường chính, thủy phân là con đường trao đổi chất chính, liên kết protein không đặc hiệu cao trong microsome gan và chuyển hóa trong microsome gan là không rõ ràng. Thông thường, một hệ thống trao đổi chất có thể được chọn để đáp ứng nhu cầu; Nếu các điều kiện trong tất cả các khía cạnh cho phép, tốt nhất là chọn cả hai hệ thống cùng một lúc.
Hỏi: Tại sao cần sử dụng tế bào gan nguyên phát cho xét nghiệm cảm ứng enzyme?
Trả lời: enzyme CYP - Xét nghiệm cảm ứng cần đi từ "phiên mã", "dịch" sang "sau - Sửa đổi protein" để thu được protein enzyme CYP hoạt động. Do đó, hệ thống xét nghiệm phải là tế bào gan, không phải microsome gan hoặc gan S9.
Hỏi: Tại sao tôi cần chọn ba tế bào gan nguyên phát của người hiến cho xét nghiệm cảm ứng enzyme?
Trả lời: Theo giới thiệu về hướng dẫn tương tác thuốc, nên sử dụng ít nhất ba nhà tài trợ và kết quả cảm ứng của mỗi nhà tài trợ nên được đánh giá riêng. Ngoài việc tạo ra kết quả có ý nghĩa thống kê, việc lựa chọn ba nhà tài trợ cho thí nghiệm cũng quan trọng hơn để đánh giá biến thể cá nhân. Nếu kết quả từ ít nhất một nhà tài trợ vượt quá ngưỡng được xác định trước, ứng cử viên thuốc có thể được cảm ứng và theo yêu cầu đánh giá.
Q: Tại sao chỉ tập trung vào cảm ứng enzyme CYP và không phải vào cảm ứng enzyme UGT?
Trả lời: Lý do tập trung vào cảm ứng CYPase là cơ chế cảm ứng CYPase đã được nghiên cứu rõ ràng hơn. Nói cách khác, lý do không yêu cầu nghiên cứu cảm ứng ugtase là cơ chế vẫn chưa rõ ràng; Tuy nhiên, điều này không có nghĩa là ugtase sẽ không được gây ra. Các hướng dẫn cũng nói rằng không có hệ thống phân loại tiêu chuẩn hóa cho các chất gây cảm ứng hoặc chất ức chế của các chất vận chuyển và các enzyme chuyển hóa giai đoạn II.
Hỏi: Các tế bào gan nguyên phát bám dính tồn tại bao lâu sau khi hồi sức và tế bào gan có thể được duy trì trong bao lâu mà không cần nuôi cấy sau khi hồi sức?
Trả lời: Các tế bào gan nguyên phát thường được sử dụng cho các xét nghiệm cảm ứng enzyme. Sau khi phục hồi tế bào, các tế bào được treo trong môi trường lan truyền tấm, điều chỉnh theo nồng độ thích hợp và nuôi cấy trong các tấm phủ collagen - Sau đó, các tế bào có thể được tiệt trùng trong vòng 4 ~ 6 giờ. Sau khi các tế bào được gắn vào tường, môi trường bảo trì được thay thế và duy trì trong 18 giờ để đảm bảo phục hồi tối đa trạng thái tế bào. Tiếp theo, xét nghiệm cảm ứng enzyme có thể được thực hiện để phát hiện hoạt động trao đổi chất và mức độ cảm ứng mRNA. Từ quan điểm của toàn bộ chu kỳ, tế bào gan có thể được duy trì trong 6 ~ 7 ngày sau khi tuân thủ tường. Thời gian trôi qua, trạng thái tuân thủ thành tế bào giảm dần, và các tế bào sẽ tách ra và đình chỉ.
Nếu các tế bào gan tuân thủ không được nuôi cấy, chúng tôi đã xác minh rằng chúng có thể được duy trì ở trạng thái tốt trong vòng 4 ~ 6 giờ. Chúng tôi chưa thực hiện xác minh trong một thời gian dài hơn.
Q: Tế bào gan có thể được sử dụng làm cả tế bào huyền phù và tế bào tuân thủ tùy thuộc vào môi trường nuôi cấy khác nhau được sử dụng?
Trả lời: Hầu hết các tế bào từ các mô và cơ quan rắn đều có tường bao quanh, nhưng không phải tất cả các tế bào đều được bao phủ khi nuôi cấy trong - vitro. Liệu các tế bào có phải là thành - tuân thủ hay không phụ thuộc vào trạng thái của chính các tế bào; Đồng thời, tường - Các tế bào tuân thủ cần môi trường nuôi cấy cụ thể và một số chất kết dính tế bào pro - đặc biệt (ví dụ: rhamnogelinogen, laminin, fibronectin, yếu tố mở rộng huyết thanh) có thể tham gia vào quá trình gắn tế bào. Tóm lại, các tế bào tuân thủ có thể được sử dụng làm tế bào huyền phù, nhưng các tế bào treo không nhất thiết phải có sẵn để sử dụng tuân thủ.
Hỏi: Những ưu điểm/nhược điểm của việc sử dụng các tế bào gan treo tường tuân thủ là gì? Các tiêu chí quyết định là gì?
Trả lời: Sau khi tế bào gan bị cô lập, chúng có thể được nuôi cấy trong hệ thống treo hoặc trong tường tuân thủ. Hoạt động của enzyme Cytochrom P450 từ các tế bào gan nguyên phát nuôi cấy huyền phù phù hợp nhất với hoạt động trong - vivo trong 4 ~ 6H đầu tiên, sau đó giảm nhanh khi kéo dài thời gian. Do đó, các tế bào gan huyền phù thường được sử dụng để nghiên cứu ổn định trao đổi chất hoặc nghiên cứu hồ sơ chuyển hóa. Các tế bào gan nguyên phát được nuôi cấy trong thành tế bào có đủ thời gian để phục hồi sau thiệt hại để duy trì các đặc điểm sinh học và hoạt động trao đổi chất của tế bào gan bình thường. Do đó, chúng thường được sử dụng cho các nghiên cứu cảm ứng enzyme, nghiên cứu độc tế bào thuốc, sự ổn định trao đổi chất của thuốc chuyển hóa chậm hoặc nghiên cứu suy luận sản phẩm.
Hiện tại, chúng tôi không cung cấp dịch vụ mua hàng trực tuyến trang web. Các sản phẩm được thêm vào giỏ hàng sau khi đăng ký và đăng nhập chỉ để tham khảo. Nếu bạn cần mua sản phẩm của chúng tôi, vui lòng để lại thông tin liên lạc của bạn thông qua kênh liên hệ với chúng tôi và chúng tôi sẽ liên hệ với bạn kịp thời để hoàn thành các dịch vụ của chúng tôi.
Q ： Làm thế nào để liên kết protein không - đặc biệt ảnh hưởng đến kết quả thử nghiệm?
Một ứng cử viên thuốc liên kết không phải - cụ thể với protein microsome, điều này dẫn đến các thông số động học thay đổi. Khi nồng độ protein tăng lên, giá trị KM tăng lên, dẫn đến độ thanh thải nội tại được cho là thấp. Ngoài ra, sự ràng buộc của ứng cử viên thuốc với protein trong microsome có thể dẫn đến sự khác biệt lớn trong kết quả từ các phòng thí nghiệm khác nhau và các hệ thống khác nhau.
Q ： Nồng độ khuyến cáo của protein microsome gan trong hướng dẫn sử dụng của bộ ổn định chuyển hóa pha I hoặc pha II là 0,1 mg/ml - 1 mg/ml, điều này có nghĩa là khi sử dụng microsome gan, vẫn cần phải pha loãng chúng trước khi thêm chúng vào hệ thống?
MỘT: Không cần phải pha loãng các microsome gan trước; Nồng độ microsome gan trong bộ là 20 mg/mL và nồng độ microsome gan cuối cùng trong hệ thống thử nghiệm là 0,1 - 1 mg/ml, có thể được thêm vào theo tỷ lệ.
Q ： Mật độ tế bào được khuyến nghị cho xét nghiệm ổn định trao đổi chất của tế bào gan nguyên phát là gì? Là tính toán giải phóng mặt bằng giống như đối với microsome gan?
Một mật độ tế bào được khuyến nghị cho xét nghiệm ổn định chuyển hóa tế bào gan chính là 0,5 đến 2 × 106 Các tế bào/mL, và các tính toán giải phóng mặt bằng và xử lý kết quả của xét nghiệm ổn định chuyển hóa vi mô gan là phù hợp.
Q ： Các thành phần chính trong bộ đệm PBS của bạn là gì? Nó có chứa KCl và NaCl không?
A ： Các thành phần chính của bộ đệm PBS của chúng tôi là k2HPO4 và KH2PO4, và không có KCL và NaCl.
Q ： Mục đích của bộ đệm phốt phát là gì? Tại sao bạn cần phốt phát?
Một bộ đệm phốt phát được chọn cho mục đích bắt chước môi trường sinh lý và phốt phát là một trong những cặp đệm quan trọng nhất để duy trì môi trường chất lỏng của cơ thể.
Q ： Cài đặt thông thường cho enzyme - Nồng độ thụ thể gây ra là gì? Có giải pháp nào nếu độ hòa tan của hệ thống được kiểm tra là kém?
Một xét nghiệm cảm ứng enzyme cần được thiết lập với 3 nồng độ khác nhau, mức độ nồng độ cần bao gồm nồng độ thuốc có hiệu quả dự kiến ở người và nồng độ cao nhất được chọn là ít nhất một thứ tự cao hơn một thứ tự cao hơn nồng độ thuốc hiệu quả trung bình ở người. Nếu độ hòa tan trong pha nước kém, dung môi hữu cơ có thể được chọn làm dung môi của nó, ví dụ: DMSO, nhưng lượng dung môi hữu cơ được thêm vào hệ thống cần được kiểm soát.
Q ： Trong các nghiên cứu ổn định trao đổi chất, có cần thiết phải sử dụng hai hệ thống xét nghiệm, microsome gan và tế bào gan nguyên phát, để thử nghiệm?
Một microsome gan là một túi màng gần như hình cầu - giống như các cấu trúc được hình thành bởi bản thân của mạng lưới nội chất bị phân mảnh thu được trong quá trình đồng nhất và ly tâm vi phân của các mô gan và chứa enzyme CYP450 và enzym. Các tế bào gan nguyên phát (PHC) là tế bào gan được nuôi cấy ngay sau khi phân lập trực tiếp khỏi gan động vật, về cơ bản duy trì các chức năng trao đổi chất của gan, đặc biệt bảo tồn mức độ enzyme phù hợp với những người in vivo. Trong nghiên cứu ổn định trao đổi chất, không cần phải xem xét chi phí và hai hệ thống thử nghiệm có thể được chọn cho thử nghiệm cùng một lúc; Hoặc hệ thống thử nghiệm thích hợp có thể được chọn theo các đặc tính trao đổi chất của hợp chất và nguyên tắc là hệ thống nào có tốc độ trao đổi chất cao được chọn. Nói chung, microsome gan là lựa chọn tốt nhất khi các phân tử hợp chất có nhiều nước hơn - hòa tan và một - chuyển hóa pha là con đường trao đổi chất chính (đặc biệt là thông qua CYP); Khi chuyển hóa hai pha là con đường chính, thủy phân là con đường trao đổi chất chính, liên kết protein không cụ thể trong microsome gan rất cao, và sự trao đổi chất không rõ ràng ở microsome gan, xét nghiệm có thể được thực hiện bằng cách sử dụng tế bào gan nguyên phát.
Q ： Nồng độ của các microsome được kiểm tra trong xét nghiệm ổn định trao đổi chất? Tác dụng của quá cao hoặc quá thấp là gì?
Một trong xét nghiệm ổn định trao đổi chất, nồng độ protein cũng sẽ ảnh hưởng đến tốc độ trao đổi chất, thường chọn nồng độ protein microsome là 0,1 mg/ml ~ 1 mg/ml, lựa chọn cụ thể về nồng độ protein nên được chọn theo tính chất chuyển hóa của hợp chất. Nồng độ protein microsome quá cao sẽ dẫn đến liên kết không đặc hiệu của thuốc với protein microsomal; Trong khi nồng độ protein microsome quá thấp có thể dẫn đến sự chuyển hóa không đáng kể của thuốc.