In vitro тестване на генна мутация на клетка на бозайник за генетични токсикологични изследвания

Ключови думи: Тест за генна мутация на TK, тест за генна мутация на HGPRT, тест за HPRT, тест за тимидин киназа, in vitro анализ за генна мутация на клетка на бозайник, OECD TG 476, OECD TG 490, тест за генотоксичност, генетична токсикология, тест за мутация, оценка на безопасността на лекарствата

Продукти IPHASE

Въведение

In vitro тестването на генна мутация на клетка на бозайник е важен подход в генетичната токсикология за оценка на мутагенния потенциал на химичните вещества. Две от най-широко използваните системи за анализ в тази област сатимидин киназа (TK) тест за генна мутация иHGPRT тест за генни мутации. Тези анализи се използват често, защото предоставят биологично релевантен клетъчен модел на бозайник за откриване на мутационни събития при контролирани експериментални условия. Насока за тестване на OECD 490 обхваща базирано на TK- тестване за генна мутация на клетка на бозайник, докато Насока за тестване на OECD 476 обхваща in vitro тестове за генна мутация на клетка на бозайник, използвайкиHprt иxprt гени.

Тъй като разработването на лекарства, оценката на химическата безопасност и предклиничният скрининг продължават да изискват надеждни инструменти за генотоксичност, тези анализи на генни мутации остават от съществено значение при оценката на безопасността на ранен етап. Те помагат на изследователите да идентифицират съединения с потенциална мутагенна отговорност, преди кандидатите да преминат по-нататък в разработката.

Анализ на TK генни мутации и OECD TG 490

Тестът за TK генна мутация е стандартизиран тест за клетъчна мутация на бозайник, описан в OECD TG 490. Насоките включват две валидирани системи за анализ, които използват TK-хетерозиготни клетъчни линии: L5178Y tk+/− 3.7.2C миши лимфомни клетки и TK6 tk+/− човешки лимфобластоидни клетки. Тези системи са широко използвани, защото осигуряват възпроизводима рамка за идентифициране на генни мутации, предизвикани от химически вещества.

Една от силните страни на TK анализа е способността му да открива както генни мутации, така и хромозомни събития в TK локуса. Това дава на изследователите по-широк поглед върху генетичните ефекти на тестовото съединение и прави анализа особено ценен в генетичната токсикология, фармацевтичния скрининг и неклиничната оценка на безопасността.

HGPRT анализ на генни мутации и OECD TG 476

Тестът за генна мутация HGPRT е друга установена in vitro система за мутация на клетки на бозайници, използвана в генетичната токсикология. В OECD TG 476 стандартизираният метод е описан като anin vitro тест за генна мутация на клетка на бозайник с помощта на гените Hprt и Xprt, което е рамката, обикновено свързвана с HGPRT/HPRT-базиран мутационен тест. Насоките първоначално бяха приети в подкрепа на тестването на химически мутации в клетки на бозайници и остават широко призната референция в изследванията за генотоксичност.

От практическа гледна точка, анализът HGPRT/HPRT се използва за идентифициране на мутации, които засягат функцията на пътя за спасяване на пурини в клетки на бозайници. Поради дългата си история в генетичната токсикология, той остава полезен инструмент за оценка на мутагенния потенциал, сравняване на ефектите на съединенията и подпомагане на ранни решения за безопасност при откриване на лекарства и работни процеси за скрининг на химикали.

Научна основа

И двата теста за TK и HGPRT се основават на една и съща основна концепция: след излагане на изпитвано вещество, мутантни клетки с променена генна функция могат да бъдат избрани и анализирани, за да се определи дали съединението е предизвикало мутационни събития. Тези анализи са ценни, защото се извършват в клетки на бозайници, което ги прави по-биологично значими от по-простите системи за скрининг, различни от бозайници.

От изследователска гледна точка, тези анализи помагат на учените да проучат как излагането на химикали засяга целостта на ДНК, пътищата на мутация и механизмите за възстановяване на клетките. Следователно те се използват широко в профилиране на съединения, разработване на анализи и по-широки токсикологични програми.

Приложения

Тестът за TK генна мутация и HGPRT тестът за генна мутация обикновено се използват при скрининг за генотоксичност по време на ранното откриване на лекарства. На този етап изследователите трябва бързо да идентифицират съединения с потенциален мутагенен риск, за да могат да вземат информирани решения, преди да инвестират в по-късна развойна работа. OECD TG 490 и OECD TG 476 предоставят стандартизирани рамки, които поддържат този тип ранна оценка на безопасността.

Тези анализи също се използват широко в предклинични токсикологични изследвания и оценка на безопасността на съединението. В тези условия те могат да допринесат важни доказателства за това дали дадено вещество може да индуцира мутации в клетки на бозайници при контролирани експериментални условия. Тъй като и двата метода са отдавна установени и международно признати, те често се включват като част от по-широка стратегия за тестване на генотоксичност.

Освен това системите, базирани на TK и HGPRT-, са полезни при разработването на анализи и оптимизирането на методите. Лабораториите често разчитат на тези тестове, за да установят експериментални условия, да подобрят възпроизводимостта и да генерират последователни данни при многократни серии. За екипи, които се нуждаят от практично и повторяемо решение, тестването на генна мутация на клетка на бозайник, базирано на комплект, може да рационализира настройката на работния процес и рутинния скрининг.

За лаборатории, които търсят удобен изследователски формат, IPHASE In Vitro Тест за генна мутация на клетка на бозайник (TK) и IPHASE In Vitro Тест за генна мутация на клетка на бозайник (HGPRT) се доставят в спецификация на тестове от 20 mL × 36, поддържаща многократна употреба при рутинно тестване и разработване на анализи.

Заключение

In vitro тестването на генни мутации в клетки на бозайници остава основен инструмент в генетичните токсикологични изследвания. Тестът TK и HGPRT/HPRT анализът осигуряват стандартизирана клетъчна платформа на бозайник за оценка на мутагенния потенциал и подпомагане на ранна оценка на безопасността. OECD TG 490 и OECD TG 476 предлагат международно признати рамки за тези методи, като помагат на лабораториите да генерират възпроизводими и сравними данни.

За лаборатории, участващи в скрининг за генотоксичност, оценка на безопасността на съединението и предклинични токсикологични изследвания, IPHASE In Vitro Тест за генна мутация на клетка на бозайник (TK) и IPHASE In Vitro Тест за генна мутация на клетка на бозайник (HGPRT) предоставят практически решения за подкрепа на рутинни изследвания на клетъчна мутация на бозайник.

ЧЗВ

Каква е разликата между анализите TK и HGPRT?
TK анализът оценява мутациите в локуса на тимидин киназата и е обхванат от OECD TG 490, докато HGPRT/HPRT анализът е свързан с OECD TG 476, който обхваща базирано на Hprt/Xprt- тестване за генна мутация на клетка на бозайник.

Защо тези анализи са важни в генетичната токсикология?
Те са важни, защото помагат да се установи дали дадено химическо вещество може да индуцира генни мутации в клетки на бозайници, което ги прави ценни инструменти за ранен скрининг за безопасност и предклинична оценка.

Кой анализ трябва да избере лабораторията?
Това зависи от дизайна на изследването, историческия работен процес и предпочитаната регулаторна или изследователска рамка. Анализите, базирани на TK- и HGPRT/HPRT-, са добре установени опции при тестване на генни мутации в клетки на бозайници.