F: Hoe moat ik kikkeromen kieze en hepatokten foar metaboalyske stabilisearren stúdzjes? Kin ik mar ien fan har kieze om de eask te ferfoljen?
A: Yn 'e stabilike stúdzje hinget de kar fan' e levering fan 'e leveringen as hepatoseen foaral ôf fan' e metabolike eigenskippen fan 'e ferbiningen, wêrby't dejinge mei in hege metabolyske taryf wurdt keazen. Yn 't algemien wurde lever mikrosomen de foarkar, foaral as de gearstalde molekulen mear wetter binne - Soluble en ien - Fase metabolisme is de wichtichste metabolike paad (foaral fia CYP). Hepatocyten kinne brûkt wurde foar eksperiminten as der bewiis is fan twa - Faze-metabolisme as it grutte paad, hydrolys, hege net-nonspecy-binding yn lever mikroskjes, en metabolisme is net evident. Normaal kin ien metabolysk systeem wurde keazen om de behoeften te foldwaan; As de betingsten yn alle aspekten tastean, is it perfoarst it bêste om beide systemen tagelyk te kiezen.
F: Wêrom is it nedich om primêre hepatokten te brûken foar enzym Induksje-assay?
A: CYP Enzyme - Induced Assay moat gean fan "transkripsje", "oersetting" om te "Post - oersettingen fan proteïne" om in aktyf cyp enzyme proteïne te krijen. Dêrom soe it testsysteem leverje moatte leverje, net leverje mikrosomes of lever S9.
F: Wêrom moat ik trije donor kieze minsklike HEPATOCYT's foar de Enzyme Induksje Assay?
A: Neffens de ynlieding fan 'e rjochtlinen foar media foar drugs-ynteraksjes moatte teminsten trije donateurs brûkt wurde, en it induksje resultaat fan elke donor moat apart wurde beoardiele. Njonken it produsearjen fan statistysk wichtige resultaten, is de kar foar trije donateurs foar it eksperimint ek wichtiger foar it beoardieljen fan ynter (yndividuele fariaasje. As it resultaat fan op syn minst ien donor in foarbeskaaide drompel is, kin de drugsakkanduaasje ûnferskillich wêze en folgje evaluaasje fan evaluaasje.
F: Wêrom konsintrearje allinich op CYP Enzyme Induksje en net op UGT Enzyme-ynduksje?
A: De reden foar it konsintrearjen op Cypase Induksje is dat it meganisme fan kypase-ynduksje dúdliker is studearre is studearre. Mei oare wurden, de reden om de stúdzje net te fereaskjen fan 'e UNGTASE-ynduksje is dat it meganisme noch ûndúdlik is; Dit betsjuttet lykwols net dat UGTASE net sil wurde feroarsake. De rjochtlinen stelle ek dat d'r gjin standerdisearre klassifikaasjessysteem is foar inducers of ynhibitors fan ferfierders en faze II metabolisme enzymen.
F: Hoe lang kin oanhingjende primêre Hepatocyten oerlibje nei resuscitaasje, en hoe lang kin hepatokaten wurde ûnderhâlden sûnder oanhingjende kultuer nei resuscitation?
A: pasteurisearre primêre hepato's wurde yn 't algemien brûkt foar enzyme-ynduksje-assays. Nei't sel werombetelje, wurde sellen ophâlden yn plaat ferspraat medium, oanpast oan passende konsintraasje, en kultiveare yn kollagen - coated platen; Dan kinne sellen yn 4 ~ 6 oeren pasteuriseare wurde. Neidat de sellen oan 'e muorre binne hechte oan' e muorre, wurdt it ûnderhâldsmedium ferfongen en ûnderhâlden foar 18 H om maksimale restauraasje fan selstaat te garandearjen. Folgjende, enzyme Induksje-assay kin útfierd wurde om metabolike aktiviteit en mrna-ynduksjenivo te detektearjen. Fanút it perspektyf fan 'e heule syklus kinne hepato's foar 6 ~ 7 dagen nei muorre oanhâlden wurde behâlden. As de tiid trochgiet, de selwandwandmuorre ferwiderje de steat minder, en de sellen sille losmeitsje en ophâlde.
As de oanhingjende Hepatocyten net wurde kultivearre, hawwe wy ferifieare dat se binnen 4 ~ 6 oeren yn in goede steat kinne wurde behâlden. Wy hawwe noch gjin ferifikaasje útfierd foar in langere perioade.
F: Hepatocyten kinne brûkt wurde as beide ophinging as oanhingjende sellen ôfhinklik fan 'e ferskate kultuermedia brûkt?
A: De measte sellen út solide weefsels en organen binne muorren, mar net alle sellen binne muorren as kultuer yn - Vitro. Oft de sellen muorre binne - oanhingje of net hinget ôf fan 'e steat fan sellen sels; Tagelyk binne muorre, muorre - Adherent-sellen nedich en wat spesjale pro - sel-adhesion-stoffen (bgl., rhamnogelin, serum útwreiding faktor) dy't meie meidwaan oan it proses fan 'e sel bylage. Ta beslút, oanhâldende sellen kinne brûkt wurde as ophingzellen, mar suspelsellen binne net needsaaklik beskikber foar oanhingjend gebrûk.
F: Wat binne de foardielen / neidielen fan it brûken fan adherinte muorre fersen Hepatocytes? Wat binne de beslútskritearia?
A: Neidat Hepatocyten is isolearre, kinne se wurde kultivearre yn skorsing of yn oanhingjende muorre. De aktiviteit fan Cytochrome P450 enzym fan Suspusy Cultured PRIMED MPACOCYTEN is it meast konsistint mei dat fan yn - Vivo foar de earste 4 ~ 6H, nimt rap ôf mei de langere tiid. Dêrom wurde hinging Hepatocytes yn 't algemien brûkt foar metaboalyske stabilityske stúdzje as metabolite-profilearstúdzje. Primêre hepatoCyten kultiveare yn oanhingjende muorre hawwe genôch tiid om te herstellen fan skea om de biologyske skaaimerken en metabolike aktiviteit te behâlden fan normale hepatoCe's. Hjirtroch binne se oer it algemien brûkt foar enzyme Induksje-stúdzjes, Drug Cytoxicity Stúdzjes, metaboalyske stabiliteit fan trage metabolisearjende drugs as stúdzjes as produkt yn foarried.
Op it stuit leverje wy gjin webservice fan 'e webservice fan webside. De produkten tafoege oan 'e winkelkarre nei registraasje en oanmelding binne allinich foar referinsje. As jo ús produkten moatte keapje, lit jo Kontaktynformaasje asjebleaft troch it kontaktprogjen, en wy sille jo op 'e tiid kontakt opnimme om ús tsjinsten te foltôgjen.
F: Hoe docht gjin - spesifike proteïne-binding beynfloedzje testresultaten?
A: As de drugs kandidaat net bindet net - spesifyk nei microsomale proteïnen, dan resulteart dizze resultaten yn feroare kinetyske parameters. As de proteïne konsintraasje nimt ta, nimt de KM-wearde tanimt, resulteart yn in lege oannommen yntrinsike klaring. Ek de bining fan 'e drugs kandidaat nei proteïnen yn mikros kinne resultearje yn grutte fariaasjes yn resultaten út ferskate laboratoaren en ferskillende systemen.
F: De oanrikkemandearre konsintraasje fan lever MikroSomale proteïne yn 'e ynstruksjeslieding fan Fase I of Fase-II-bank - 1 Mg - 1 MG-mikrosomen, it is noch altyd nedich om se goed te verdunnen foardat se oan it systeem tafoegje?
IN: D'r is gjin needsaak om de hepatyske mikrosomes earst te verdunnen; De konsintraasje fan Hepatyske mikrosjes yn 'e kit is 20 MG / ML en de definitive konsintraasje fan Hepatyske mikrosjes yn it testsysteem is 0,1 - 1 MG / ML, dy't kin wurde tafoege.
F: Wat is de oanrikkemandearre sel-tichtens foar metabolike stabilityske testen fan primêre hepatokten? Is de klaring berekkening itselde as foar levermiksumens?
A: De oanrikkemandearre sel-tichtens foar de primêre hepatocyte metabolyske stabilisch-assay is 0,5 oant 2 × 106 Sellen / ml, en de ferklearring fan 'e klaring en de ferwurking fan' e resultaten fan 'e Hepatyske MicroSomale Metabolyske stabilityske stabilityske stabilityske stabilityske stabilityske stabilityske stabilityske stabilityske stabilityske stabilityske stabilityske stabilisitaasje binne konsekwint konsekwint.
F: Wat binne de wichtichste yngrediïnten yn jo PBS-buffer? Befettet it KCL en NACL?
A: De haadkomponinten fan ús PBS-buffer binne k2Hpo4 en KH2PO4, en binne frij fan KCL en NACL.
F: Wat is it doel fan fosfaatbuffers? Wêrom hawwe jo fosfaat nedich?
A: fosfaatbuffers wurde keazen foar har doel om de fysiologyske omjouwing te imitearjen, en fosfaat is ien fan 'e wichtichste buffer pearen foar it behâld fan it floeistof.
F: Wat is de gewoane ynstelling foar Enzyme - Induced receptor Concentration? Is d'r in oplossing as de oplosberens fan it systeem testen is min?
A: De enzyme-ynduksje-assay moat wurde ynsteld mei 3 ferskillende konsintraasje moat de ferwachte effektive konsintraasje hawwe om teminsten ien folchoarder te wêzen as de gemiddelde effektive bloedfergriemen yn 'e gemiddelde effektive bloed drugs. As de oplosberens yn 'e waterige faze min is, kin in organyske solvent wurde keazen as syn oplosmiddel, bgl. DMSO, mar de hoemannichte organyske oplosmiddel tafoege oan it systeem moat wurde regele.
F: Yn 'e stabilisearjende stabilisearjende stúdzjes, is it nedich om twa testsystemen te brûken, leverje mikrosomes en primêre hepatokten, foar testen?
A: Hepatyske mikrosomen binne hast sferysk membraan - lykas struktueren dy't binne foarme troch it sels fan fragement en ûnderskieding en wat biphasyske enzymen, bgl. E.g. Ugts, sts. Primêre hepatoCyten (PHC) binne hepatocytes fuortendaliks nei direkte isolaasje fan dierlike libbensferliening, dy't yn prinsipe ûnderhâld fan 'e lever, foaral better behâld fan' e enzyme-nivo's konsekwint mei dy yn vivo. Yn 'e stúdzje fan metabolike stabilisearren is d'r net nedich om de kosten te beskôgjen, en twa testsystemen kinne tagelyk wurde selekteare foar de test; Of it geskikte testsysteem kin wurde selektearre neffens de metabolike eigenskippen fan 'e ferbining, en it prinsipe is dat hokker systeem in hege metabolike taryf is selektearre. Yn 't algemien binne lever mikrosomes de bêste kar as de gearstalde molekulen mear wetter binne - Soluble en ien - Fase metabolisme is de wichtichste metabolike paad (foaral fia CYP); As twa - Faze Metabolism is, is hydrolyse, is hydrolyse, net - SPESIFIKE PROTEIN BINNING IN DE Liver, en metabolisme is net blykber yn 'e leveranmikus, kin wurde útfierd mei primêre hepatoCe's.
F: Is de konsintraasje fan mikrosomes ûndersocht yn 'e metabolyske stabilisearste test? Wat is it effekt fan te heech of te leech?
A: yn 'e testen fan' e metaboalyske stabilisearren sille de protolyske taryf hawwe, kies normaal de mikrosomale proteïne fan 0,1 MG / ML, de spesifike kar foar hoefolle proteïne-konsintraasje moat wurde selektearre neffens de eigen metabolike eigenskippen. Te heech in konsintraasje fan Microsomale-proteïne sil liede ta net - spesifike binend fan it medisyn nei it mikrosomale proteïne; Wylst te leech in konsintraasje fan microsomale proteïne kin liede ta ûnbidich metabolisme fan it drugs.