FAQ

Vraag: Hoe moet ik kiezen voor microsomen en hepatocyten voor metabole stabiliteitsstudies? Kan ik slechts één van hen kiezen om aan de vereiste te voldoen?

A: In de metabole stabiliteitsstudie hangt de keuze van levermicrosomen of hepatocyten voornamelijk af van de metabole eigenschappen van de verbindingen, waarbij die met een hoge metabole snelheid wordt gekozen. Over het algemeen hebben levermicrosomen de voorkeur, vooral wanneer de samengestelde moleculen meer water - oplosbaar zijn en één - fasemetabolisme de belangrijkste metabole route is (vooral via CYP). Hepatocyten kunnen worden gebruikt voor experimenten wanneer er aanwijzingen zijn voor twee - fasemetabolisme als de belangrijkste route, hydrolyse als de belangrijkste metabole route, hoge niet -specifieke eiwitbinding in levermicrosomen en metabolisme in levermicrosomen is niet duidelijk. Gewoonlijk kan één metabolisch systeem worden gekozen om aan de behoeften te voldoen; Als de voorwaarden in alle aspecten toestaan, is het absoluut het beste om beide systemen tegelijkertijd te kiezen.

Vraag: Waarom is het nodig om primaire hepatocyten te gebruiken voor enzyminductietest?

A: CYP -enzym - Geïnduceerde test moet gaan van "transcriptie", "vertaling" naar "post - translationele modificatie van eiwit" om een ​​actief CYP -enzymeiwit te verkrijgen. Daarom moet het testsysteem levercellen zijn, geen levermicrosomen of lever S9.

Vraag: Waarom moet ik drie donor menselijke primaire hepatocyten kiezen voor de enzyminductietest?

A: Volgens de introductie van de richtlijnen voor interacties tussen geneesmiddelen moeten ten minste drie donoren worden gebruikt en moet het inductieresultaat van elke donor afzonderlijk worden geëvalueerd. Naast het produceren van statistisch significante resultaten, is de keuze van drie donoren voor het experiment ook belangrijker voor het beoordelen van inter - individuele variatie. Als het resultaat van ten minste één donor een vooraf bepaalde drempel overschrijdt, kan de kandidaat voor geneesmiddelen induceerbaar zijn en is het volgen van de evaluatie vereist.

Vraag: Waarom alleen focussen op CYP -enzyminductie en niet op UGT -enzyminductie?

A: De reden om zich te concentreren op cypase -inductie is dat het mechanisme van cypase -inductie duidelijker is bestudeerd. Met andere woorden, de reden om de studie van UGTase -inductie niet te vereisen, is dat het mechanisme nog onduidelijk is; Dit betekent echter niet dat Ugtase niet zal worden geïnduceerd. De richtlijnen stellen ook dat er geen gestandaardiseerde classificatiesysteem is voor inductoren of remmers van transporters en fase II -metabolisme -enzymen.

Vraag: Hoe lang kunnen aanhangende primaire hepatocyten overleven na reanimatie, en hoe lang kunnen hepatocyten worden gehandhaafd zonder hechtende cultuur na reanimatie?

A: Pasteuriseerde primaire hepatocyten worden over het algemeen gebruikt voor enzyminductietesten. Na celherstel worden cellen gesuspendeerd in het spreidingsmedium van het plaatverspreiding, aangepast aan de juiste concentratie en gekweekt in collageen - gecoate platen; Vervolgens kunnen cellen binnen 4 ~ 6 uur worden gepasteuriseerd. Nadat de cellen aan de wand zijn bevestigd, wordt het onderhoudsmedium vervangen en 18 uur onderhouden om te zorgen voor maximale herstel van de celtoestand. Vervolgens kan enzyminductietest worden uitgevoerd om metabole activiteit en mRNA -inductieniveau te detecteren. Vanuit het perspectief van de hele cyclus kunnen hepatocyten worden gehandhaafd gedurende 6 ~ 7 dagen na de therapietrouw. Naarmate de tijd verstrijkt, verslechtert de celwand therapietoestand en zullen de cellen zich losmaken en ophangen.

Als de aanhangende hepatocyten niet worden gekweekt, hebben we geverifieerd dat ze binnen 4 ~ 6 uur in een goede staat kunnen worden gehandhaafd. We hebben nog geen verificatie uitgevoerd voor een langere periode.

Vraag: Hepatocyten kunnen worden gebruikt als zowel suspensie als hechtende cellen, afhankelijk van de verschillende gebruikte kweekmedia?

A: De meeste cellen van vaste weefsels en organen zijn ommuurd, maar niet alle cellen zijn ommuurd wanneer ze in - vitro worden gekweekt. Of de cellen muur zijn - hecht aan of niet hangt af van de toestand van cellen zelf; Tegelijkertijd hebben hangende cellen van de wand - hechte cellen specifiek kweekmedium nodig en enkele speciale pro - celadhesiestoffen (bijv. Rhamnogelinogeen, laminine, fibronectine, serum -expansiefactor) die kunnen deelnemen aan het proces van celhechting. Concluderend kunnen hechtende cellen worden gebruikt als suspensiecellen, maar suspensiecellen zijn niet noodzakelijkerwijs beschikbaar voor hechte gebruik.

Vraag: Wat zijn de voor-/nadelen van het gebruik van aanhangende wandverzen ophanging hepatocyten? Wat zijn de beslissingscriteria?

A: Nadat hepatocyten zijn geïsoleerd, kunnen ze worden gekweekt in suspensie of in een hechtende muur. De activiteit van cytochroom p450 -enzym uit suspensie gekweekte primaire hepatocyten is het meest consistent met die van in - vivo gedurende de eerste 4 ~ 6H en neemt vervolgens snel af met de verlenging van de tijd. Daarom worden suspensie -hepatocyten in het algemeen gebruikt voor metabole stabiliteitsstudie of metabolietprofileringstudie. Primaire hepatocyten gekweekt in hechtende wand hebben voldoende tijd om te herstellen van schade om de biologische kenmerken en metabole activiteit van normale hepatocyten te behouden. Daarom worden ze over het algemeen gebruikt voor enzyminductiestudies, cytotoxiciteitsstudies voor geneesmiddelen, metabole stabiliteit van langzame metaboliserende geneesmiddelen of productinferentiestudies.

Momenteel bieden we geen webpagina online inkoopservice. De producten die na registratie en inloggen aan de winkelwagent zijn toegevoegd, zijn alleen ter referentie. Als u onze producten moet kopen, laat dan uw contactgegevens achter via het Contact -kanaal en we nemen op tijd contact met u op om onze services te voltooien.

Q ： Hoe beïnvloedt niet -- specifieke eiwitbinding de testresultaten?

A ： Als de kandidaat voor geneesmiddelen niet - specifiek aan microsomale eiwitten bindt, resulteert dit in gewijzigde kinetische parameters. Naarmate de eiwitconcentratie toeneemt, neemt de KM -waarde toe, wat resulteert in een lage veronderstelde intrinsieke klaring. Ook kan de binding van de medicijnkandidaat aan eiwitten in microsomen leiden tot grote variaties in resultaten van verschillende laboratoria en verschillende systemen.

Q ： De aanbevolen concentratie van levermicrosomaal eiwit in de instructiehandleiding van fase I of fase II metabole stabiliteitskit is 0,1 mg/ml - 1 mg/ml, betekent dit dat het bij het gebruik van levermicrosomen nog steeds nodig is om ze te verdunnen ruim voordat ze aan het systeem toevoegen?

A: Het is niet nodig om de levermicrosomen eerst te verdunnen; De concentratie van levermicrosomen in de kit is 20 mg/ml en de uiteindelijke concentratie van levermicrosomen in het testsysteem is 0,1 - 1 mg/ml, die evenredig kunnen worden toegevoegd.

Q ： Wat is de aanbevolen celdichtheid voor metabole stabiliteitstests van primaire hepatocyten? Is de opruimingsberekening hetzelfde als voor levermicrosomen?

A ： De aanbevolen celdichtheid voor de primaire hepatocytenmetabole stabiliteitstest is 0,5 tot 2 x 10⁶ Cellen/ml, en de klaringberekeningen en de verwerking van de resultaten van de hepatische microsomale metabole stabiliteitstest zijn consistent.

V ： Wat zijn de belangrijkste ingrediënten in uw PBS -buffer? Bevat het KCL en NaCl?

A ： De belangrijkste componenten van onze PBS -buffer zijn k₂HPO₄ en KH₂PO₄, en zijn vrij van KCL en NaCl.

V ： Wat is het doel van fosfaatbuffers? Waarom heb je fosfaat nodig?

Een ： Fosfaatbuffers worden gekozen voor hun doel om de fysiologische omgeving na te bootsen, en fosfaat is een van de belangrijkste bufferparen voor het handhaven van de vloeistofomgeving van het lichaam.

Q ： Wat is de gebruikelijke instelling voor enzym - geïnduceerde receptorconcentratie? Is er een oplossing als de oplosbaarheid van het te testen systeem slecht is?

Een ： De enzyminductietest moet worden opgezet met 3 verschillende concentraties, het concentratieniveau moet de verwachte effectieve bloedgeneesmiddelconcentratie bij mensen bedekken en de hoogste concentratie wordt gekozen als ten minste één orde van grootte hoger dan de gemiddelde effectieve bloedgeneesmiddelconcentratie bij mensen. Als de oplosbaarheid in de waterige fase slecht is, kan een organisch oplosmiddel worden gekozen als oplosmiddel, b.v. DMSO, maar de hoeveelheid organisch oplosmiddel dat aan het systeem is toegevoegd, moet worden gecontroleerd.

Q ： Is het in metabole stabiliteitsstudies nodig om twee testsystemen, levermicrosomen en primaire hepatocyten te gebruiken voor testen?

Een ： Hepatische microsomen zijn bijna bolvormig membraanblaasje - zoals structuren gevormd door het zelf - fusie van gefragmenteerd endoplasmatisch reticulum verkregen tijdens homogenisatie en differentiële centrifugatie van leverweefsels en bevatten CYP450 -enzymen en sommige bifasische enzymen, bijv., UG., Ugs. Primaire hepatocyten (PHC's) worden hepatocyten gecultiveerd onmiddellijk na directe isolatie van dierenlevers, die in principe de metabole functies van de lever handhaven, met name beter het behoud van de enzymniveaus die consistent zijn met die in vivo. In de metabole stabiliteitsstudie is het niet nodig om de kosten te overwegen en kunnen twee testsystemen tegelijkertijd worden geselecteerd voor de test; of het juiste testsysteem kan worden geselecteerd op basis van de metabole eigenschappen van de verbinding, en het principe is dat welk systeem een ​​hoge metabolische snelheid heeft, is geselecteerd. Over het algemeen zijn levermicrosomen de beste keuze wanneer de samengestelde moleculen meer water - oplosbaar zijn en één - fasemetabolisme de belangrijkste metabole route is (vooral via CYP); Wanneer twee - fasemetabolisme de hoofdroute is, is hydrolyse de belangrijkste metabole route, niet - specifieke eiwitbinding in de levermicrosomen is zeer hoog en het metabolisme is niet duidelijk in de levermicrosomen, de test kan worden uitgevoerd met behulp van primaire hepatocyten.

Q ： Is de concentratie van microsomen onderzocht in de metabole stabiliteitstest? Wat is het effect van te hoog of te laag?

A ： In de metabole stabiliteitstest zal de eiwitconcentratie ook de metabole snelheid beïnvloeden, meestal kiezen voor de microsomale eiwitconcentratie van 0,1 mg/ml ~ 1 mg/ml, de specifieke keuze voor hoeveel eiwitconcentratie moet worden geselecteerd volgens de eigen metabole eigenschappen van de verbondenheid. Een te hoge concentratie microsomaal eiwit zal leiden tot niet -- specifieke binding van het medicijn aan het microsomale eiwit; Hoewel een te lage concentratie microsomaal eiwit kan leiden tot onbeduidend metabolisme van het medicijn.