V: Kako naj za študije presnovne stabilnosti izberem mikrosome in hepatocite? Ali lahko izberem samo enega od njih, da izpolnim zahtevo?
O: V študiji presnovne stabilnosti je izbira jetrnih mikrosomov ali hepatocitov predvsem odvisna od presnovnih lastnosti spojin, kjer je izbrana tista z visoko presnovno hitrostjo. Na splošno so prednostni jetrni mikrosomi, še posebej, če so molekule spojine bolj vode - topne in ena - fazni presnova je glavna presnovna pot (zlasti prek CYP). Hepatociti se lahko uporabljajo za eksperimente, kadar obstajata dva - fazna presnova kot glavna pot, hidroliza kot glavna presnovna pot, visoka nespecifična vezava beljakovin v jetrnih mikrosomih in presnova v jetrnih mikrosomih ni očitna. Običajno se lahko izbere en presnovni sistem za zadovoljevanje potreb; Če pogoji v vseh pogledih omogočajo, je vsekakor najbolje, da hkrati izberete oba sistema.
V: Zakaj je treba uporabiti primarne hepatocite za test indukcije encimov?
O: Encim CYP - Inducirani test mora iti od "transkripcije", "prevoda" v "post - translacijsko modifikacijo beljakovin", da dobimo aktivni encimski protein CYP. Zato bi morale biti preskusni sistem jetrne celice, ne jetrne mikrosome ali jetrne S9.
V: Zakaj moram izbrati tri darovalce človeške primarne hepatocite za test indukcije encima?
O: Glede na uvod v smernice za interakcije z zdravili je treba uporabiti vsaj tri darovalce, indukcijski rezultat vsakega darovalca pa je treba oceniti ločeno. Poleg ustvarjanja statistično pomembnih rezultatov je izbira treh darovalcev za poskus pomembnejša tudi za oceno med - posamezne variacije. Če rezultat vsaj enega darovalca presega vnaprej določen prag, je kandidat za zdravila lahko inducibilen in slediti -
V: Zakaj se osredotočiti samo na indukcijo encimov CYP in ne na indukcijo encimov UGT?
O: Razlog za osredotočanje na indukcijo CyPase je, da je bil mehanizem indukcije CyPase jasneje preučen. Z drugimi besedami, razlog, da ne zahteva preučevanja indukcije UGTASE, je, da mehanizem še vedno ni jasen; Vendar to ne pomeni, da UGTASE ne bo sprožena. Smernice tudi navajajo, da ni standardiziranega klasifikacijskega sistema za induktorje ali zaviralce prevoznikov in encime presnove faze II.
V: Kako dolgo lahko adherentni primarni hepatociti preživijo po oživljanju in kako dolgo se lahko vzdržujejo hepatocite brez adherentne kulture po oživljanju?
O: Pasterizirani primarni hepatociti se običajno uporabljajo za indukcijske teste encimov. Po okrevanju celic celice suspendirajo v mediju za širjenje plošč, prilagojene ustrezni koncentraciji in gojijo v ploščah, prevlečenih s kolagenom; potem lahko celice pasteriziramo v 4 do 6 urah. Ko so celice pritrjene na steno, se vzdrževalni medij nadomesti in vzdržuje 18 ur, da se zagotovi največja obnova stanja celic. Nato se lahko izvede encimski indukcijski test za odkrivanje presnovne aktivnosti in stopnje indukcije mRNA. Z vidika celotnega cikla je mogoče hepatocite vzdrževati 6 do 7 dni po privrženosti stene. Sčasoma se stanje privrženosti celične stene poslabša in celice se bodo odlepile in suspendirale.
Če adherentnih hepatocitov ne gojimo, smo preverili, ali jih je mogoče v dobrem stanju vzdrževati v 4 do 6 urah. Preverjanje še nismo izvajali daljše.
V: Hepatociti se lahko uporabljajo kot suspenzijske in adheritne celice, odvisno od različnih uporabljenih kulturnih medijev?
O: Večina celic iz trdnih tkiv in organov je obzidana, vendar niso vse celice obzidane, ko gojijo v - vitro. Ali so celice stenske - adherentne ali ne, je odvisno od stanja samih celic; Hkrati stene - adheritne celice potrebujejo specifični kulturni medij in nekatere posebne pro - celične adhezijske snovi (npr. Rhamnogelinogen, laminin, fibronektin, faktor ekspanzije v serumu), ki lahko sodelujejo v procesu pritrditve celice. Za zaključek se lahko adheritne celice uporabljajo kot suspenzijske celice, vendar suspenzijske celice niso nujno na voljo za adherentno uporabo.
V: Kakšne so prednosti/slabosti uporabe hepatocitov adherent Wall Verses? Kakšna so merila odločitve?
O: Po izoliranih hepatocitih jih lahko gojimo v suspenziji ali v pridstavki. Aktivnost encima citokroma P450 iz suspenzije, gojenih primarnih hepatocitov, je najbolj skladna z aktivnostjo v - vivo za prvih 4 ~ 6h, nato pa se hitro zmanjša s podaljšanjem časa. Zato se suspenzijski hepatociti običajno uporabljajo za študijo metabolične stabilnosti ali študijo profiliranja presnovka. Primarni hepatociti, gojeni v adherentni steni, imajo dovolj časa, da si opomorejo od škode, da ohranijo biološke značilnosti in presnovno aktivnost normalnih hepatocitov. Zato se običajno uporabljajo za študije indukcije encimov, študije citotoksičnosti zdravil, presnovno stabilnost počasnih presnovnih zdravil ali študije sklepanja o produktu.
Trenutno ne ponujamo spletne storitve spletne storitve. Izdelki, dodani v nakupovalno košarico po registraciji in prijavi, so namenjeni samo referenci. Če morate kupiti naše izdelke, pustite svoje kontaktne podatke prek kanala Contact Us in pravočasno vas bomo kontaktirali, da dokončamo naše storitve.
Q: Kako ne - specifična vezava beljakovin vpliva na rezultate preskusov?
A: Če se kandidat za zdravilo ne veže, posebej na mikrosomalne beljakovine, to povzroči spremenjene kinetične parametre. Ko se koncentracija beljakovin povečuje, se vrednost KM poveča, kar ima za posledico nizki domnevni notranji očistek. Tudi vezava kandidata za zdravilo na beljakovine v mikrosomih lahko povzroči velike razlike v rezultatih različnih laboratorijev in različnih sistemov.
Q: Priporočena koncentracija jetrnega mikrosomalnega proteina v priročniku za navodila faze I ali faze II presnovna stabilnost je 0,1 mg/ml - 1 mg/ml, ali to pomeni, da je pri uporabi jetrnih mikrosomov še vedno treba dobro razredčiti, preden jih dodate v sistem?
A: Najprej ni treba razredčiti jetrnih mikrosomov; Koncentracija jetrnih mikrosomov v kompletu je 20 mg/ml, končna koncentracija jetrnih mikrosomov v preskusnem sistemu pa 0,1 - 1 mg/ml, ki jih je mogoče dodati sorazmerno.
V: Kakšna je priporočena gostota celic za testiranje presnovne stabilnosti primarnih hepatocitov? Ali je izračun čiščenja enak kot pri jetrnih mikrosomih?
A: Priporočena gostota celic za primarni test presnovne stabilnosti hepatocitov je 0,5 do 2 × 106 Celice/ml in izračuni očistka in obdelava rezultatov testa jetrne mikrosomalne presnovne stabilnosti sta konsistentna.
V: Katere so glavne sestavine v vašem PBS medpomnilnikom? Ali vsebuje KCL in NACL?
A: Glavne sestavne dele našega PBS BEFER so K2HPO4 in kh2PO4, in ne vsebujejo KCL in NACL.
V: Kakšen je namen fosfatnih puferjev? Zakaj potrebujete fosfat?
A: Fosfatni puferji so izbrani za posnemanje fiziološkega okolja, fosfat pa je eden najpomembnejših puferskih parov za vzdrževanje telesnega tekočega okolja.
Q: Kakšna je običajna nastavitev za encim - inducirano koncentracijo receptorjev? Ali obstaja kakšna rešitev, če je topnost sistema, ki ga je treba preizkusiti, slaba?
A: Encimski indukcijski test je treba postaviti s 3 različnimi koncentracijami, raven koncentracije mora pokriti pričakovano učinkovito koncentracijo zdravil v krvi pri ljudeh, izbran je za najvišjo koncentracijo, da bo vsaj en vrstni red večje od povprečne učinkovite koncentracije krvnih zdravil pri ljudeh. Če je topnost v vodni fazi slaba, se lahko za topilo izbere organsko topilo, npr. DMSO, vendar je treba nadzorovati količino organskega topila, dodanega sistemu.
Q: Ali je v študijah presnovne stabilnosti potrebno za testiranje uporabiti dva preskusna sistema, jetrne mikrosome in primarne hepatocite?
A: Jetrni mikrosomi so skoraj sferični membranski vezikul - podobne strukture, ki jih tvori samo - fuzija razdrobljenega endoplazemskega retikuluma, pridobljenega med homogenizacijo in diferencialnim centrifugiranjem jetrnih tkiv, in vsebujejo encime CYP450 in nekaj bifaznih encimov, npr. Primarni hepatociti (PHC) so hepatociti, gojeni takoj po neposredni izolaciji od živalskih jeter, ki v bistvu vzdržujejo presnovne funkcije jeter, še posebej bolje ohranjanje ravni encimov, ki so skladne s tistimi in vivo. V študiji presnovne stabilnosti stroškov ni treba upoštevati in za preskus lahko izberete dva preskusna sistema; ali ustrezen preskusni sistem lahko izberete glede na presnovne lastnosti spojine, načelo pa je tisto, kar ima sistem visoko hitrost presnove. Na splošno so jetrni mikrosomi najboljša izbira, kadar so molekule spojine bolj vode - topne in ena - fazni presnova je glavna presnovna pot (zlasti prek CYP); Kadar je dva - fazna presnova glavna pot, je hidroliza glavna presnovna pot, ne - specifična vezava beljakovin v jetrnih mikrosomih je zelo visoka, metabolizem pa v jetrnih mikrosomih ni očiten, test lahko izvedemo s pomočjo primarnih hepatocitov.
Q: Ali je koncentracija mikrosomov pregledana v testu presnovne stabilnosti? Kakšen je učinek previsokega ali prenizkega?
A: V preskusu presnovne stabilnosti bo koncentracija beljakovin vplivala tudi na hitrost presnove, običajno izberejo mikrosomalno koncentracijo beljakovin 0,1 mg/ml ~ 1 mg/ml, specifično izbiro, koliko koncentracije beljakovin je treba izbrati v skladu z lastnimi presnovnimi lastnostmi spojine. Previsoka koncentracija mikrosomalnega proteina bo privedla do ne - specifične vezave zdravila na mikrosomalni protein; Medtem ko lahko prenizka koncentracija mikrosomalnega proteina povzroči nepomembno presnovo zdravila.