Fampiharana ny fluid cerebrospinal artificial (ACSF) amin'ny Teknolojia Patch Clamp

Keyword:Fluid cerebrospinal artificial, ACSF, CSF artificial, fluid cerebrospinal synthetic, CSF synthetic, CSF, CSF simulated, Patch Clamp Technology

Ny vokatra IPHASE

Fampidirana

Ho an'ny mpikaroka amin'ny neurophysiology, Artificial Cerebrospinal Fluid (ACSF) dia iray amin'ireo reagents fototra sy matetika ampiasaina amin'ny fanandramana patch clamp. Lavitry ny maha-vahaolana tsy misy dikany, ny Artificial CSF dia mamaritra ny milieu extracellular manan-danja izay mamaritra ny fahamarinan-toerana, ny reproducibility ary ny maha-zava-dehibe ara-batana ny firaketana electrophysiologique.

Ny tanjon'ny fanandramana patch clamp dia ny mamerina, araka izay azo atao, ny toetry ny neurons in vivo ao anatin'ny fepetra ex vivo. Amin'io andrana io, ny CSF artifisialy no rafitra mpanohana fototra. Ny firafitry ny ionika, ny fahaiza-manaony, ny osmolarity, ary ny equilibrium entona dia misy fiantraikany mivantana amin'ny mety hisian'ny membrane neuronal resting membrane, ny tifitra mety hitranga, ny fifindran'ny synaptic, ary ny fitondran-tena amin'ny fantsona.

Ny fototry ny physiologique amin'ny fluid cerebrospinal native

Ny fitsipiky ny famolavolana sy ny fampiharana ny CSF artifisialy rehetra dia miorina amin'ny fahatakarana marina ny fiasan'ny physiologique amin'ny fluid cerebrospinal teratany.

Ny fluid cerebrospinal native dia ny fluid ara-batana mazava izay manodidina ny rafi-pitatitra foibe, manome tontolo iainana marin-toerana ilaina amin'ny hetsika neuronal mahazatra. Na izany aza, noho ny fiovaovan'ny famoronana sy ny fahafahana miditra voafetra, ny CSF teratany dia tsy azo ampiasaina amin'ny fomba azo antoka amin'ny toe-javatra andrana voafehy. Mba hamahana izany, ny fluid cerebrospinal Synthetic dia novolavolaina mba hamerenana ireo toetra ara-batana ara-batana manan-danja amin'ny CSF, ahafahan'ny mpikaroka mitazona fepetra mifanaraka amin'ny physiologique amin'ny fandalinana in vitro sy ex vivo.

ACSF ho toy ny Reagent tena ilaina amin'ny fanandramana Patch Clamp

Amin'ny andrana clamp patch, Artificial Cerebrospinal Fluid no vahaolana extracellular fototra. Ny neurons sy ny sela glial ao amin'ny rafi-pitatitra foibe dia miroboka hatrany amin'ny CSF teratany ao amin'ny vivo, ary ny tanjaky ny membrane miala sasatra, ny famokarana mety ho hetsika, ny kinetika fantsona ion, ary ny famotsorana vesicle synaptic dia miankina betsaka amin'ny fifantohana ion, pH, osmolarity, ary famatsiana angovo.

Ny tanjon'ny fandraketana fametahana patch dia ny mamerina ny toe-batana ara-batana amin'ny vivo araka izay azo atao amin'ny toe-javatra ex vivo. Amin'ny maha simulation artifisialy an'ny CSF teratany, ny Artificial CSF dia manome microenvironment marin-toerana ho an'ny sela sy sela neural mitoka-monina, ary amin'ny ankamaroan'ny workflows electrophysiology dia tsy azo soloina amin'ny medium kolontsaina tsotra na saline tsotra.

Fampiharana amin'ny Teknolojia Patch Clamp

Ny CSF artifisialy dia ampiasaina mandritra ny fizotran'ny asa feno amin'ny andrana clamp patch, manomboka amin'ny fanomanana ny tavy ka hatramin'ny firaketana sy ny fanodikodinam-panafody.

1. 1) Fanandramana Clamp Slice Brain Slice

Mandritra ny fanavahana ny ati-doha sy ny fitetika, dia tokony hafindra haingana any amin'ny ranomandry mangatsiaka, ACSF misy oksizenina (95% O₂ / 5% CO₂) ny sela. Ny hafanana ambany dia manampy amin'ny fampihenana ny metabolisma neuronal, raha ny equilibration entona mety kosa dia mitazona ny fahamarinan'ny pH ary mampihena ny fahasimbana hypoxic.

Aorian'ny fanosihosena, ny ampahany amin'ny ati-doha dia matetika ao anaty ACSF misy oksizenina amin'ny 32-34 ° C mandritra ny 1-1.5 ora mba hamelana ny fanarenana. Amin'ity dingana ity, ny firafitry ny ionika, ny osmolarity ary ny famatsiana angovo (ohatra, glucose) an'ny CSF artifisialy dia tena ilaina amin'ny fitazonana ny fahamendrehan'ny sela sy ny fahafahan'ny sela.

Mandritra ny firaketana electrophysiologique, ny fluid cerebrospinal artifisialy dia tokony hosorana tsy tapaka mba hitazonana ny tontolo iainana extracellular. Izany dia miantoka ny pH, ny fifandanjan'ny ion ary ny mari-pana, ary ny fanesorana ny fako metabolika, amin'ny farany dia manohana ny fahazoana angona azo itokisana sy azo averina.

2. 2) Fanandramana Clamp Neuron Isolated Matsilo

Ho an'ny fisarahana amin'ny neuronal mahery, ny tadin'ny atidoha dia matetika levonina miaraka amin'ny protease. Ny vahaolana enzymatic dia matetika voaomana amin'ny alàlan'ny fluid cerebrospinal artifisialy mba ho voatahiry mandritra ny fandevonan-kanina ny firafitry ny membrane sy ny fiasan'ny fantsona ion. Aorian'ny fandevonan-kanina sy ny trituration mekanika, ny neurônina mitoka-monina dia sasana imbetsaka miaraka amin'ny ACSF mba hanesorana ny enzyme sisa tavela ary avy eo averina ao amin'ny ACSF mba hialana sasatra na adhesion. Ny osmolarity sy ny pH dia tena ilaina mandritra ity dingana ity mba hisorohana ny fahasimban'ny sela sy ny apoptose.

3. 3) Sela kolontsaina sy tsipika sela

Ho an'ny firaketana an-tsoratra manontolo - sela sy fandraketana fantsona tokana, ny fluid cerebrospinal artifisialy tsy tapaka dia azo ampiasaina mivantana ho vahaolana extracellular mba hitehirizana ny mety hisian'ny membrane miala sasatra sy ny toetry ny fizika amin'ny fantsona ion.

Ho an'ny fitokanana voafantina amin'ny tondra-drano ionika manokana, ny rafitra CSF artifisialy dia ovaina matetika. Ohatra, rehefa mirakitra ny onjan'ny kalsioma, ny ampahany amin'ny NaCl dia azo soloina amin'ny TEA-Cl mba hanakanana ny fantsona potassium, na ny sodium dia azo esorina mba hanakanana ny onjan'ny sodium. Rehefa mirakitra ny NMDA receptor-mediated currents, extracellular Mg2+ dia azo esorina mba hanamaivanana ny fanakanana fantsona. Amin'ny toe-javatra rehetra, ny toetra fizikokimia fototra amin'ny vahaolana dia tsy maintsy miorina tsara.

4. 4) Fanamarinana Functional mitambatra

Ny fluid cerebrospinal artificial dia ampiasaina hanomanana vahaolana miasa ho an'ny modulators fantsona ion sy ny kapoaky ny neuroactive amin'ny fandalinana pharmacology, izay ampiharina amin'ny alàlan'ny rafitra perfusion. Ny fiviliana amin'ny pH na ny firafitry ny ionika dia mety hanova ny fangaro zava-mahadomelina, ny fahamarinan-toerana, na ny fampifanarahana ny proteinina kendrena, ka miteraka vokatra tsy marina.

Ao amin'ny fanandramana firaketana optogenetika, ny hetsika neuronal dia voahodina voalohany amin'ny fanentanana maivana ary avy eo dia arahin'ny patch clamp. Ny perfusion tsy tapaka miaraka amin'ny ACSF dia takiana amin'ny fitazonana ny toetry ny electrophysiologique baseline, ka ny fiovana hita dia azo lazaina amin'ny fitsabahana optogenetika fa tsy ny fiovaovan'ny tontolo iainana.

Hevitra ara-teknika sy paramètre andrana manan-danja

Amin'ny andrana clamp patch, ireto manaraka ireto dia tokony hofehezina mafy ireto singa mifandraika amin'ny artificial cerebrospinal manaraka ireto mba hiantohana ny fahamarinan'ny famantarana sy ny famerenana indray.

Ireo anton-javatra ireo dia samy mamaritra ny fahamarinan'ny firaketana, ny famerenana ny angon-drakitra ary ny fifandraisan'ny vokatra biolojika.

Fehiny
Ny fluid cerebrospinal artificial dia mihoatra lavitra noho ny vahaolana fototra. Ao amin'ny teknolojia patch clamp, izy io dia miasa ho toy ny tontolo iainana extracellular fototra izay manohana ny fahaveloman'ny sela, mitahiry ny fananana electrophysiologique, ary manome famakafakana azo antoka. Ny fanatsarana amim-pitandremana ny firafitry ny ACSF sy ny fepetra andrana dia ivon'ny workflow electrophysiology avo lenta.

Mba hanohanana ireo filàna ireo, ny IPHASE dia manome vokatra ACSF avo lenta vita amin'ny fenitra fanaraha-maso kalitao henjana, miaraka amin'ny firafitry ny ionika, ny osmolarity ary ny pH. Izany dia miantoka ny tsy fitovian'ny lot-to-lot ary ny fampandehanana azo antoka, manampy ny mpikaroka hahatratra vokatra andrana azo antoka sy azo averina.