Mokhoa oa ho lokisa li-slide bakeng sa ho fumana li-assays
TheComett AssaHape, hape e tsejoang e le e le 'ngoe - Cell Gel Electrophoresis, ke mokhoa o ikhethileng le o ikhethileng oa ho eketsa tšenyo ea DNA ka lisele. Ho Lokisetsa PER - BolengComet Assay StriS ke mohato o nyatsang o khethollang ho tšepahala le ho hlahisa tlhahiso ea matla a ho tšepahalla. Sengoliloeng sena se ikemiselitse ho fana ka tataiso e felletseng ea ho itokisetsa li-slide bakeng sa ho fumana li-bust tsa Copt bakeng sa litsebi lebaleng. Re tla akaretsa mohato o mong le o mong oa ho khetha seleng ho phatloha ho data, ho netefatsa hore o tla fihlela sephetho se setle ka ho fetisisa.Kenyelletso ea ho fumana assay le bohlokoa ba eona
● Kakaretso ea Comet Assation
Assance Assation, e ntlafalitse bofelong ba 1980, ke sesebelisoa se matla sa ho bona DNA Crand e robeha liseleng tsa motho ka mong. E sebelisoa haholo masimong a kang tlhahlobo ea Genotexicity, lefu la liseleculal le bofokoli ba tikoloho le tikoloho. Molao-motheo oa temoso ea comety o hloka hore ba tlose lisele ka lisetlelong tsa Agearose, li li tlose likomo le li-stopro. Setšoantšo se hlahisoang, se tšoanang le cot, e lumella ho khethoa ha senya.● Likopo ho DNA DA DNA DONE
Likarolo tsa Come li bohlokoa haholo ho tseba tšenyo ea DNA e bakiloeng ke chefo ea tikoloho, radiation le meriana. Ba boetse ba bapala karolo ea bohlokoa ho hlahloba katleho ea lits'ebetso tsa DNA Mekhaose ka mefuta e fapaneng ea selefouno. Bafuputsi ba sebelisa lisaepo ho ithuta kankere, botsofali le maloetse a mang a amanang le tšenyo ea DNA.● Na bohlokoa ba tlhahlobo ea genophyity
Bohlokoa le ho etsa lipatlisiso tsa lintlha tsa Come li ke ke tsa hatelloa. Ba sebetsa e le sesebelisoa sa tlhahlobo ea mantlha ea ho khetholla ho khetholla metsoako e fapaneng ea tsoekere. Liphetho tse tsoang lipuisanong tsena li ka susumetsa ho susumetsa qeto - ho etsa mekhoa ea nts'etsopele ea lithethefatsi le tikoloho ea tikoloho.Khetho ea lisele tse loketseng bakeng sa Assas
● Mefuta ea lisele e sebelisitsoeng
Khetho ea lisele e ka ama litholoana tsa tlhahiso ea commeay haholo. Hangata lisele li sebelisa lisele li kenyelletsa lymphocytes, lisele tse betsang li kenyelletsa lymphocytes, lisele tse betsang li na le lisele tse benyang le lisele tsa sele. Bafuputsi hangata ba khetha mefuta ea sele ka sepheo sa thuto le boiketlo ba ho fumana mehlala.● Ho nahanisisa ka khetho ea sele
Ha u khetha lisele, nahana ka lintho tse kang ho hloka male, ho na le maikutlo a ho lemala ho DNA, 'me ke tokollo ea lipatlisiso. Ka mohlala, lymphocytes li fumaneha habonolo ho tsoa maling 'me li tsotella li-agenteng tsa genotox, li li etsa khetho e ntle bakeng sa lithuto tse ngata.● tšusumetso ho liphetho tse khahlisang
Tšimoloho le boemo ba lisele li ka ama boemo ba motheo ba senya tsa DNA le karabelo ea sele. Ka hona, ho khetholla ka ho khetheha ho khetha setopo le ho sebetsana le li-protocol ke ea bohlokoa ho fumana sephetho se tšepahalang le se khothatsang ho CoTet Assays.Ho hlophisoa ha gels ea Agarose
● Mefuta ea Agarose ea ho e sebelisa
Ho khetha sehatsetsi se nepahetseng ho bohlokoa bakeng sa botšepehi ba bolaoli ba Mohloaare. Ngaka e tlase ea li qhibiliha e khethoa hobane e tiisa ka potlako le ho fokotsa tšenyo ea DNA nakong ea ts'ebetso. Phahameng - Agarose ea boleng bo tsoang ho barekisi ba rekang e tsoang ho bahlahisi ba tlisitse kapa ba etsoang ka setopo sa Slide, ho khothalletsoa.● Mehato ea khale ea Agarose le litokisetso tsa boitokiso
Ka tloaelo, karolo ea 1% e qhibiliha ntlha ea Agarose ea Agarose e sebelisoa. Qhalana le Agarose Buffer e loketseng, e futhumetse ho fihlela e qhibiliha ka botlalo, ebe e pholile ho mocheso o sireletsehileng bakeng sa sele. Etsa bonnete ba hore Agarose e lokolohile ho li-bubble le maloanlahla ho qoba baetso botlang.● Ho netefatsa boleng bo nepahetseng ba gel
Boleng ba gel ea Agarose bo ka susumetsa kutloisiso ea Assay le tlhahiso ea tlhahiso. Mekhoa e metle ea ho tšoara le ho itokisa e bohlokoa ho hlahisa gel ea homojene e nang le thepa e sa fetoheng ho li-slide tse fapaneng. Sena se tiisa hore sebopeho sa litlaleho le pono ha se jela.Ho emisoa ka seleng le lisele tse keneng ho Agarose
● Boloka sele ea sele,
Qala ka ho fumana motho a le mong - Bakeng sa lisele tsa mokolone, sena se kenyelletsa tiiso ea tikoloho, e lateloang ke ho se jele le ho hlatsoa. Bakeng sa lisele tsa mantlha tse kang lymphocytes, centiful le mokhoa o loketseng buffer e loketseng. Sebelisa hemocytometetara ho netefatsa hore li-cell tsa sele e le 1 x 10 ^ lisele tse 5 / ml.● Ho iphumanela lisele ho qubu e tlase ea qubuse
Kopanya selepeishene ea sele ka pele - a futhumetse ntlha e qhibilihileng e tiisa kabo ea lisele tse tšoanang. Phokotso e potlakileng ka potlako ho pele - li-slide tsa coung lia leboha, e ka rekoa ho tsoa fektheri ea nako ea nako ea nako le nako. Sebelisa sekoaelo sa ho hasana hampe le ho thibela li-bubble tsa moea.● Ho jala lisele ho li-slide
Hang ha Agarose a hasana, lumella li-slide ho pholile li behe sebakeng se batang kapa se hahang. Bohato bona bo tlameha ho etsoa ka nepo ho thibela phetoho ho tsoa ho ho beha ka ntle, e ka amang ponahalo ea li-tlala nakong ea ho hlahlojoa.Lysis ea lisele ho li-slide
● Mefuta e khathatsang
Tharollo ea Lysis Ka tloaelo e na le letsoai le phahameng la letsoai le litšitiso, e kang Nacl x - Tlosa lisele le liprotheine ha li tloha DNA e tsitsitse.● Litaelo le maemo
Kenya li-slide ka tharollo ea maiketsetso le incubte ho 4 ° C bonyane hora e le 'ngoe, leha ho le joalo ka tšohanyetso e ratoa. Etsa bonnete ba hore tanka ea li-lysis e koahetsoe ho qoba mouoane le tšilafalo. Maemo a mohato oa lysis a bohlokoa bakeng sa ho tlosa libaka tsa cellular ntle le ho nyenyefatsa DNA.● Bohlokoa ba sele e felletseng
Kamano e sa phethahalang Lysis e ka fella ka mofuta o fosahetseng o sa tšepahaleng le data e sa tšepahaleng. Ka hona, ho bohlokoa ho latela protocol protocol ka hloko ka mokhoa o hlakileng, o netefatsa tharollo e kenella likarolong tsohle tsa slide le linakong tseo tsa ho ipeha ka botlalo.Alkaline ea sexrong le ea electrophoresis
● Ho lokisa tharollo ea alkaline
Tharollo ea Alkaline, hangata ho kopana le Nahah le Edta, e sebelisoa ho khutsisa DNA. Ho hlophisoa ha eona ho lokela ho etsoa ka koetliso, ho netefatsa pH le moustoring e nepahetseng. Lokisetsa tharollo e sa tsoa hantle hore e lule e le katleho.● Alkaline u se ke ua ba le bohlokoa le nako
Ho fafatsa li-slide Tharollong ea alkaline, hangata bakeng sa 20 - 40 metsotso e 40, ho lumella DNA ka likhoka tsa DNA tsa ho phomola. Mohato ona ke oa bohlokoa bakeng sa ho hopola se le seng pina le Alkali - Siblis. Qeto e khotsofatsa nako e thehiloeng ho latela protocol ea hau ea protocol le mofuta oa sele.● Karolo ea Sethala ea Electrophoresis le liparamente
Theha tanka ea electrophoresis e nang le alkaline e batang ea Alkaline ea Electrophoresis. Beha li-slide ka tankeng, li netefatsa hore li kene ka botlalo. Etsa kopo ea voltage e sa fetoheng (hangata ho pota 25 v) bakeng sa 20 - metsotso e 30. Maemo a elektrophoresis, ho kenyelletsa voltarege le nako, e tlameha ho ntlafatsoa ho fihlela qeto e ntle ea ho falla haholo ha theko.Ho se nke lehlakore
● Litokisetso tsa Buataralization tse sa naheng
Kamora Elecstopolos, e khesa li-slide ho emisa karabelo mme li tsikitlanya DNA. Bufferization e tloaelehileng e sa thabiseng e na le lisosa tsa tris ho ph ea 7.5. Hlatsoa li-slide ho bufffer ena makhetlo a mangata ho tlosa tharollo eohle ea tharollo ea alkaline.● Ho hlaba mekhoa
Leqhoa le sa nepahalang la parade le DNA ea Fluorescent - dae e tlamang e lekanang, tse joalo ka bromide broside e tala kapa e tala. Bromide ea Ethideum, ha a le khale, e hloka hore mekhoa ea eona e hlokolosi e ea sebetsa. Syl Green o fana ka boits'oaro bo bong bo sireletsehileng bo nang le kutloelo-bohloko e phahameng. Toropo ea li-slide ho tharollo ea bolelele ba nako e loketseng (hangata 15 - metsotso e 30) lefifing.● Tlhahlobo ea DNA DNA DOTS
Kamora ho hlaba, hlatsoa liqha ka bonolo ho tlosa letheba le feteletseng. Hlahloba li-slide tlasa microscope ea FluorescEnce. Boleng ba ho hlafuna le tharollo ea microscope ke tsa bohlokoa bakeng sa ho fumana litšoantšo tse hlakileng tsa theoka.Setsebi sa MicrosSopty le setšoantšo sa setšoantšo
● Ho khetha microscope e nepahetseng
Microscope ea Fluorescence e na le thepa e nepahetseng ea filthara e nepahetseng ea hlokahala bakeng sa ho bona hore na litsie tse halikiloeng. Khetha microscope ka qeto e phahameng le sistimi ea khamera e khona ho nka litšoantšo tse qaqileng tsa li tlatsana.● Ho hapa PULA - Litšoantšo tsa boleng ba boleng
Tšoara litšoantšo tsa bonyane li-cets tse 50 ho netefatsa ho netefatsa bohlokoa ba lipalo. Etsa bonnete ba hore esita le khanya le ho tsepamisa maikutlo ho qoba mafu a bonoang. Ho leka-lekana hantle ha litlhophiso tsa microscope le k'hamera ho ka ntlafatsa boleng ba setšoantšo.● Software ea tlhahlobo ea nako
Mananeo a mangata a sokolose a fumaneha bakeng sa tlhahlobo ea mophuti, joalo ka qheleltscore le Casp. Mananeo ana a lekanya liparamente joaloka bolelele ba tai, mohatla o matla, o matla, o bohlokoa bakeng sa tšenyo ea DNA.Ho rarolla mathata a tloaelehileng
● Mathata a Tloaelehileng
Litaba tse tloaelehileng tsa Comet Aspics tse kenyeletsang bofokoli bo phahameng, sebopeho se tlase le ho se lumellane pakeng tsa li-slide. Mathata ana a ka bakoa mehloli e fapaneng, ho kopanyelletsa le sele e fosahetseng, e lokiselitsoeng ke lefu la ruripimal gel, le maemo a fosahetseng a elektronis kapa maemo a fosahetseng.● Litharollo le mehato ea thibelo
Ho fokotsa botsitso bo phahameng, netefatsa hore linkhoe tsohle le gels li lokolohile ho li-sinminant. Bakeng sa sebopeho se tlase sa Comtut, netefatsa hore lisele li ntse li phahama, le li-lysis li nepahetse. Ho tiisoa hangata ea diliti le ho tiisetsa ho tiisetsa ke mekhoa ea thibelo ea bohlokoa.● Ho fana ka tlhahiso le ho boloka
Ho fihlella tlhahiso ho Comet Lisebelisoa tsa morao-rao, sebelisa Phahameng - Lintlafatso tsa boleng, 'me u lule u le lintlha tse qaqileng tsa maemo ohle a liteko ho netefatsa hore o nepahetse.Tlhahisoleseling ea data le liphetho tsa ho tlaleha
● Sekaseka li-parameters tsa cottri
Litšila tsa bohlokoa tsa ho eketsa DNA TLOSA li kenyelletsa bolelele ba mohatla, o bonts'a boholo ba ho falla ha DNA, le matla a maholo, a bolelang palo ea DNA ka mohatleng. Motsotso oa mohloaare oa mohloaare, tekanyo e kopaneng, e boetse e sebelisoa hangata.● Lipolelo tsa lipalo tsa tlhahlobo ea data
Tlhahlobo e nepahetseng ea lipalo e bohlokoa bakeng sa tlhaloso ea data. Sebelisa liteko tse loketseng tsa lipalo tsa lipalo lipakeng tsa lihlopha tsa sampole tse fapaneng. Etsa bonnete ba hore data e tsoang ho li-slide tse ngata le litekong tse ngata li na le thuso bakeng sa ho fapana.● Ho fana ka lipatlisiso le ho toloka
Fana ka sephetho sa hau ka tsela e hlakileng le e khutsitseng, sebelisa li-gusi le litafole ho etsa mohlala oa se fumanoeng ke senotlolo. Buisanang ka se boleloang ke liphetoho tsa DNA tsa DNA tse bonoang le tšusumetso e ka bang teng ho tsamaiso ea likokoana-hloko e ntse e ithutoa.Pheko: ho fihlela ho Phahameng - Slide ea boleng bo holimo
Ho lokisa PUP - Mahlale a Phetisetso ea Fulsance, maemo a itokisetsang a Agaros, maemo, a elektrophonis, le ho hlahlobisisa. Mohato o mong le o mong o tlameha ho ntlafalitsoe ka nepo 'me o emeloa ho netefatsa sephetho se tšepahalang le se hlahisoang. Ho sebelisana le barekisi ba episo ho fihla barekisi le bahlahisi ba ka ntlafatsa boleng ba polelo ea hau ka ho fana ka le phahameng - Lisebelisoa tsa sehlopha.● AboutIphaseBiosciens
Kantle ho pota-poteroho ea North Wales, Pennsylvania, Bioscienvanies ke "e ikhethang" e ncha - Tsebo e batsi le takatso ea ho etsa lipatlisiso tsa saense, sehlopha sa rona sa mahlale sa bo-ramahlale ba fetang lefatše ba nang le mahlale ba tla thusa ho fihlela sepheo sa bona sa liphallelo. Ho phehella R & D Hantle ho Bakoahlauli ba Mekete, ho etsa lipatlisiso Bokamoso ", Iphase e thehiloe linaheng tse ngata - e koahela lisekoere tse fetang 12,000.Nako ea poso: 2024 - 08 - 28 14:05:21