CD19 B ሕዋስ ከ PBMC በሰው ልጅ ኢሚውኖሎጂ ጥናት ውስጥ ማግለል

ቁልፍ ቃላት: CD19 B ሕዋሳት፣ የሰው CD19፣ የቢ ሴል ማግለል፣ አወንታዊ ምርጫ፣ አሉታዊ ምርጫ፣ ማግኔቲክ ዶቃ መደርደር፣ MACS ማግለል፣ የቢ ሴል ማበልጸግ፣ PBMC ማግለል፣ የበሽታ ተከላካይ ሕዋሳት መለያየት፣ የቀዘቀዙ ሴሎች ስብስብ፣ የቀዘቀዘ PBMC ኪት፣ ሲዲ19 አዎንታዊ ምርጫ፣ ሲዲ19 አሉታዊ ምርጫ፣ የሰው ቢ ሊምፎይተስ፣ ቢ ሴል መደርደር ኪት፣ ፀረ-ሰው ሴል ሴፓሳይት ኢሶፓላሽን ኪት

IPHASE ምርቶች

CD19 B ሕዋሳት በሰው ልጆች በሽታ የመከላከል ስርዓት ውስጥ ዋና የሊምፎሳይት ንዑስ ክፍል ሲሆኑ በሁለቱም በመሠረታዊ ምርምር እና በትርጉም ጥናቶች ውስጥ በሰፊው ጥቅም ላይ ይውላሉ። በአብዛኛዎቹ የሙከራ የስራ ፍሰቶች፣ ሲዲ19 ቢ ህዋሶች ከፒቢኤምሲ የተገኙ ናቸው፣ ይህም PBMC ለB ሴል ማበልፀጊያ ዋና መነሻ ቁሳቁስ ያደርገዋል። ሲዲ19 ቢ ሴሎች በአንጻራዊ ሁኔታ ሲታይ አነስተኛ የፒቢኤምሲ ክፍልፋይን ይወክላሉ ነገርግን ለፀረ እንግዳ አካላት ምርት፣ የበሽታ መከላከል ቁጥጥር እና በሽታ አምሳያ በጣም አስፈላጊ ናቸው። በዚህ ምክንያት የሲዲ19 ቢ ሴሎች ከፍተኛ ንፅህናን እና ተግባራዊ ታማኝነትን ለማረጋገጥ የበሽታ መከላከያ ቴክኖሎጂዎችን በመጠቀም ይገለላሉ ።

PBMC እንደ የሲዲ19 ቢ ሴሎች ዋና ምንጭ

ፒቢኤምሲ ቲ ሴሎችን፣ ኤንኬ ሴሎችን፣ ሞኖይተስን እና ሲዲ19 ቢ ህዋሶችን ጨምሮ የተለያዩ የሞኖኑክሌር ተከላካይ ህዋሶች አሉት። በዚህ ድብልቅ ውስጥ፣ ሲዲ19 ቢ ህዋሶች በዝቅተኛ ድግግሞሽ ይገኛሉ፣ ይህም ያለ ቅድመ ማበልጸግ ቀጥተኛ ትንተና አስቸጋሪ ያደርገዋል። ስለዚህ ፒቢኤምሲ ለሲዲ19 ቢ ሴል ማግለል እንደ መደበኛ ምንጭ ቁሳቁስ ሆኖ ያገለግላል። በአብዛኛዎቹ የላቦራቶሪ የስራ ፍሰቶች፣ ሲዲ19 ቢ ህዋሶች በመጀመሪያ ከPBMC የበለፀጉ እንደ ፍሰት ሳይቶሜትሪ፣ አር ኤን ኤ ቅደም ተከተል ወይም የተግባር መገምገሚያዎች ባሉ የታችኛው ተፋሰስ አፕሊኬሽኖች ውስጥ ከመጠቀማቸው በፊት ነው።

በፒቢኤምሲ እና በሲዲ19 ቢ ሴሎች መካከል ያለው ግንኙነት በ Immunology ጥናት ውስጥ መሠረታዊ ነው። ፒቢኤምሲ ሴሉላር አውድ ያቀርባል፣ ሲዲ19 ቢ ህዋሶች ግን ከዚህ ስርዓት የሚወጣውን የታለመ ህዝብ ይወክላሉ። ስለዚህ አስተማማኝ የሙከራ መረጃዎችን ለማምረት የሲዲ19 ቢ ህዋሶችን ከፒቢኤምሲ በትክክል መለየት አስፈላጊ ነው።

CD19 B ሕዋስ ማግኔቲክ ዶቃ ማግለል ስትራቴጂ

ሲዲ19 ቢ ሴል ማግለል በተለምዶ መግነጢሳዊ bead-የተመሰረተ መለያ ቴክኖሎጂዎችን በመጠቀም ይከናወናል። እነዚህ ስርዓቶች በPBMC ውስጥ ከሲዲ19 ቢ ሴሎች ጋር በተያያዙ ፀረ እንግዳ አካላት-የተጣመሩ ዶቃዎች ላይ ይመረኮዛሉ። አንዴ ከተሰየመ በኋላ፣ ሲዲ19 ቢ ህዋሶች መግነጢሳዊ መስክን በመጠቀም ሊለያዩ ይችላሉ፣ ይህም በትንሹ የመሳሪያ መስፈርቶች በፍጥነት ማበልጸግ ያስችላል።

በዚህ አውድ የሲዲ19 ቢ ሴል ማግለል በአዎንታዊ ምርጫ ወይም በአሉታዊ ምርጫ ሊከናወን ይችላል። አዎንታዊ ምርጫ CD19-መግነጢሳዊ ዶቃዎችን በማነጣጠር CD19 B ሕዋሳትን ከPBMC በቀጥታ ይይዛል። ይህ ዘዴ ለአብዛኛዎቹ የታችኛው ተፋሰስ አፕሊኬሽኖች ተስማሚ የሆኑ የሲዲ19 ቢ ሴሎችን ያመጣል። በአንጻሩ፣ አሉታዊ ምርጫ - B ያልሆኑ ሴሎችን ከPBMC ያስወግዳል፣ ይህም ያልተነኩ ሲዲ19 ቢ ሴሎችን በትውልድ አገራቸው ያስቀምጣል። ሁለቱም ስልቶች በሰፊው ጥቅም ላይ ይውላሉ, የታችኛው ተፋሰስ ሙከራዎች ተቀባይ ታማኝነት ወይም ከፍተኛ ንፅህና እንደሚያስፈልጋቸው ይወሰናል.

የሲዲ19 ቢ ሴሎች አወንታዊ ምርጫ እና አሉታዊ ምርጫ

የሲዲ19 ቢ ሴል አወንታዊ ምርጫ ንፁህ የቢ ሴል ህዝቦችን ለማግኘት በጣም ቀልጣፋ ነው። በዚህ አቀራረብ፣ ሲዲ19 ቢ ህዋሶች በቀጥታ ተሰይመዋል እና በመግነጢሳዊ መስክ ውስጥ ይቀመጣሉ፣ ይህም ከPBMC ፈጣን ማበልጸግ ያስችላል። ይህ ዘዴ በተለይ ከፍተኛ ንፅህና በሚያስፈልግበት ጊዜ ለምሳሌ በሲዲ19 ቢ ሴል ተግባራዊ ሙከራዎች ወይም በጽሁፍ ግልባጭ መገለጫ ነው።

በሌላ በኩል የሲዲ19 ቢ ሴል አሉታዊ ምርጫ የሲዲ19 ቢ ህዋሶችን ያለቀጥታ ፀረ-ሰው ማሰር ለማቆየት የተነደፈ ነው። በዚህ ዘዴ ሌሎች የበሽታ ተከላካይ ሕዋሳት ከፒቢኤምሲ ተሟጥጠዋል, ቲ ሴሎችን, ኤንኬ ሴሎችን እና ሞኖይተስን ጨምሮ, የሲዲ19 ቢ ሴሎች ግን ሳይቀየሩ ይቀራሉ. ይህ አካሄድ የሲዲ19 ቢ ሴል አግብርትን፣ የምልክት መንገዶችን ወይም አንቲጂን ምላሽን ሲያጠና ሰው ሰራሽ ተቀባይ ተቀባይ ተሳትፎን ስለሚቀንስ ይመረጣል።

ሁለቱም የሲዲ19 ቢ ሴል አወንታዊ ምርጫ እና የሲዲ19 ቢ ሴል አሉታዊ ምርጫ በሰዎች ኢሚውኖሎጂ ጥናት ውስጥ በሰፊው ተቀባይነት አላቸው፣ እና ሁለቱም አቀራረቦች በፒቢኤምሲ እንደ መነሻ ቁሳቁስ ይጀምራሉ።

Immunomagnetic መለያየት እና የሙከራ መተግበሪያዎች

Immunomagnetic separation ከሲዲ19 ቢ ሴል ማግለል ጀርባ ያለው ዋና ቴክኖሎጂ ነው። ከፍተኛ አዋጭነትን ጠብቆ ሲዲ19 ቢ ሴሎችን ከPBMC ለማበልጸግ ፈጣን እና ሊሰፋ የሚችል ዘዴን ይሰጣል። አንቲቦዲ-የተሸፈኑ መግነጢሳዊ ዶቃዎችን መጠቀም መራጭ ማሰርን ያስችላል፣ በመቀጠልም መግነጢሳዊ አምዶችን ወይም መደርደሪያን በመጠቀም ቀልጣፋ መለያየትን ያስከትላል።

ከተገለሉ በኋላ የሲዲ19 ቢ ህዋሶች በተለያዩ የታችኛው ተፋሰስ አፕሊኬሽኖች ውስጥ ጥቅም ላይ ሊውሉ ይችላሉ እነዚህም የበሽታ መከላከያ ፍኖቲፒንግ፣ የሳይቶኪን ሚስጥራዊ ትንተና፣ የቢ ሴል ተቀባይ ጥናቶች እና ፀረ እንግዳ አካላት ግኝትን ጨምሮ። የሲዲ19 ቢ ሴል ማግለል ጥራት በቀጥታ በሙከራ መራባት ላይ ተጽዕኖ ያሳድራል፣ ይህም የPBMC አያያዝ እና መለያየት ፕሮቶኮሎችን ለምርምር ስኬት ወሳኝ ያደርገዋል።

የስራ ፍሰት ማመቻቸት ከPBMC ወደ ሲዲ19 ቢ ሴሎች

በመደበኛ የላቦራቶሪ የስራ ፍሰቶች፣ ፒቢኤምሲ በመጀመሪያ ከሰው ደም ናሙናዎች ተነጥሎ ለሲዲ19 ቢ ሴል ማበልፀጊያ ግብአት ሆኖ ያገለግላል። የሲዲ19 ቢ ሴል ማግለል ቅልጥፍና የሚወሰነው እንደ PBMC ጥራት፣ ዶቃ ማሰር ቅልጥፍና እና የመምረጫ ስልት (አዎንታዊ ወይም አሉታዊ ምርጫ) ላይ ነው። ከፍተኛ ጥራት ያለው የፒቢኤምሲ ዝግጅት ወደ የተሻሻለ የሲዲ19 ቢ ሴል ምርት እና ንፅህና ይመራል።

በአጠቃላይ ሲዲ19 ቢ ሴል ከፒቢኤምሲ ማግለል በሰው ልጅ የበሽታ መከላከያ ዘዴ የማዕዘን ድንጋይ ነው። የሲዲ19 ቢ ሴል አወንታዊ ምርጫን ወይም የሲዲ19 ቢ ሴል አሉታዊ ምርጫን በመጠቀም፣ ተመራማሪዎች ለብዙ የሙከራ አፕሊኬሽኖች ተስማሚ የሆኑ ተግባራዊ የሲዲ19 ቢ ህዋሶችን ለመፍጠር በPBMC ላይ ይተማመናሉ።

Q1፡ በCD19 B ሕዋሳት እና በPBMC መካከል ያለው ግንኙነት ምንድን ነው?

ሲዲ19 ቢ ሴሎች የPBMC ንዑስ ህዝብ ናቸው። ፒቢኤምሲ ቲ ሴሎችን፣ ኤንኬ ሴሎችን፣ ሞኖይተስን፣ እና ሲዲ19 ቢ ሴሎችን ጨምሮ በርካታ የበሽታ ተከላካይ ሕዋሳትን ይዟል። ሲዲ19 ቢ ሴሎች በአንጻራዊ ሁኔታ አነስተኛ የPBMC ክፍልፋይን የሚወክሉ እና በተለምዶ ከPBMC ለታች ሙከራዎች የበለፀጉ ናቸው።

Q2: CD19 B ሕዋስ ማግለል ለምን ጥቅም ላይ ይውላል?

CD19 B ሴል ማግለል ለኢሚውኖሎጂ ምርምር በጣም የተጣራ ቢ ሴሎችን ለማግኘት ይጠቅማል። እንደ ፍሰት ሳይቶሜትሪ፣ አር ኤን ኤ ቅደም ተከተል፣ ፀረ እንግዳ አካል ግኝት እና ተግባራዊ የበሽታ መከላከያ ምርመራዎች ለመሳሰሉት የCD19 B ሴሎች ከPBMC ተለይተው ይታወቃሉ።

ጥ 3፡ በሲዲ19 ቢ ሴሎች አወንታዊ እና አሉታዊ ምርጫ መካከል ያለው ልዩነት ምንድን ነው?

የሲዲ19 ቢ ሴል አወንታዊ ምርጫ በቀጥታ ሲዲ19 ቢ ሴሎችን አንቲbody-የተሸፈኑ መግነጢሳዊ ዶቃዎችን በመጠቀም ይይዛል፣ይህም ከፍተኛ ንፅህናን ያስከትላል። የሲዲ19 ቢ ሴል አሉታዊ ምርጫ - B ያልሆኑ ሴሎችን ከPBMC ያስወግዳል፣ ይህም ያልተነኩ CD19 B ሴሎችን የበለጠ ቤተኛ ውስጥ ያስቀምጣል። ሁለቱም ዘዴዎች በሙከራ መስፈርቶች ላይ ተመስርተው በሰፊው ጥቅም ላይ ይውላሉ.

ጥ 4፡ ለምንድነው PBMC በተለምዶ ለCD19 B ሕዋስ ማግለል ጥቅም ላይ የሚውለው?

ፒቢኤምሲ መደበኛ የመነሻ ቁሳቁስ ነው ምክንያቱም በቀላሉ ከደም አካባቢ የሚገኝ እና ሁሉንም ዋና ዋና ሞኖኑክሌር ተከላካይ ሕዋሳት ሲዲ19 ቢ ሴሎችን ያካትታል። PBMC መጠቀም የሲዲ19 ቢ ህዋሶችን በማግኔት ዶቃ-የተመሰረቱ የመለያያ ዘዴዎች በብቃት ማበልፀግ ያስችላል።

Q5፡ ከPBMC የተነጠሉ ሲዲ19 ቢ ህዋሶችን ምን አይነት አፕሊኬሽኖች ይጠቀማሉ?

ከፒቢኤምሲ የተነጠሉ የሲዲ19 ቢ ህዋሶች በክትባት እና ባዮሜዲካል ጥናት ውስጥ በሰፊው ጥቅም ላይ ይውላሉ፡ የቢ ሴል ተቀባይ ትንተና፣ የሳይቶኪን ሚስጥራዊ ጥናቶች፣ የበሽታ መከላከያ መገለጫ እና ቴራፒዩቲካል ፀረ እንግዳ አካላት እድገትን ጨምሮ። የሲዲ19 ቢ ሴል መነጠል ጥራት በቀጥታ የታችኛውን ተፋሰስ የሙከራ አስተማማኝነት ይጎዳል።