CD19 B Cell Isolation ຈາກ PBMC ໃນການຄົ້ນຄວ້າທາງດ້ານພູມຄຸ້ມກັນຂອງມະນຸດ

ຄໍາສໍາຄັນ: ຈຸລັງ CD19 B, CD19 ຂອງມະນຸດ, ການແຍກຈຸລັງ B, ການຄັດເລືອກທາງບວກ, ການຄັດເລືອກທາງລົບ, ການຈັດຮຽງລູກປັດແມ່ເຫຼັກ, ການແຍກ MACS, ການເພີ່ມເຊນ B, ການແຍກ PBMC, ການແຍກຈຸລັງພູມຄຸ້ມກັນ, ຊຸດຈຸລັງແຊ່ແຂງ, ຊຸດ PBMC ແຊ່ແຂງ, ການຄັດເລືອກທາງບວກ CD19, ການຄັດເລືອກທາງລົບ CD19, ຊຸດຕ້ານ B lymphocytes ຂອງມະນຸດ, ຊຸດ B lymphocytes, ການຄັດແຍກຈຸລັງຮ່າງກາຍ ການໂດດດ່ຽວ, ການແຍກພູມຕ້ານທານ

ຜະລິດຕະພັນ IPHASE

ຈຸລັງ CD19 B ເປັນຊຸດຍ່ອຍ lymphocyte ທີ່ສໍາຄັນໃນລະບົບພູມຕ້ານທານຂອງມະນຸດແລະຖືກນໍາໃຊ້ຢ່າງກວ້າງຂວາງໃນການຄົ້ນຄວ້າພື້ນຖານແລະການສຶກສາການແປພາສາ. ໃນຂະບວນການທົດລອງສ່ວນໃຫຍ່, ເຊນ CD19 B ແມ່ນໄດ້ມາຈາກ PBMC, ເຮັດໃຫ້ PBMC ເປັນອຸປະກອນການເລີ່ມຕົ້ນຫຼັກສໍາລັບການເສີມສ້າງເຊລ B. ຈຸລັງ CD19 B ເປັນຕົວແທນຂອງສ່ວນນ້ອຍຂອງ PBMC, ແຕ່ພວກມັນມີຄວາມສໍາຄັນສູງສໍາລັບການຜະລິດພູມຕ້ານທານ, ລະບຽບການຂອງພູມຕ້ານທານ, ແລະການສ້າງແບບຈໍາລອງພະຍາດ. ດ້ວຍເຫດຜົນນີ້, ຈຸລັງ CD19 B ມັກຈະຖືກແຍກອອກໂດຍໃຊ້ເຕັກໂນໂລຢີພູມຕ້ານທານເພື່ອຮັບປະກັນຄວາມບໍລິສຸດສູງແລະຄວາມສົມບູນຂອງການເຮັດວຽກ.

PBMC ເປັນແຫຼ່ງຫຼັກຂອງ CD19 B Cells

PBMC ມີປະຊາກອນທີ່ຫຼາກຫຼາຍຊະນິດຂອງຈຸລັງພູມຕ້ານທານ mononuclear, ລວມທັງຈຸລັງ T, ຈຸລັງ NK, monocytes, ແລະຈຸລັງ CD19 B. ພາຍໃນປະສົມນີ້, ຈຸລັງ CD19 B ໂດຍທົ່ວໄປແມ່ນມີຢູ່ໃນຄວາມຖີ່ຕ່ໍາ, ເຊິ່ງເຮັດໃຫ້ການວິເຄາະໂດຍກົງມີຄວາມຫຍຸ້ງຍາກໂດຍບໍ່ມີການເສີມສ້າງກ່ອນ. ດັ່ງນັ້ນ, PBMC ເປັນວັດສະດຸແຫຼ່ງມາດຕະຖານສໍາລັບການແຍກເຊນ CD19 B. ໃນຂະບວນການເຮັດວຽກຂອງຫ້ອງທົດລອງສ່ວນໃຫຍ່, ຈຸລັງ CD19 B ໄດ້ຖືກເສີມສ້າງເປັນຄັ້ງທໍາອິດຈາກ PBMC ກ່ອນທີ່ຈະຖືກນໍາໃຊ້ໃນຄໍາຮ້ອງສະຫມັກທາງລຸ່ມເຊັ່ນ: flow cytometry, RNA sequencing, ຫຼື functional assays.

ຄວາມສໍາພັນລະຫວ່າງຈຸລັງ PBMC ແລະ CD19 B ແມ່ນພື້ນຖານໃນການຄົ້ນຄວ້າທາງດ້ານພູມຕ້ານທານ. PBMC ສະຫນອງສະພາບການຂອງເຊນ, ໃນຂະນະທີ່ເຊນ CD19 B ເປັນຕົວແທນຂອງປະຊາກອນເປົ້າຫມາຍທີ່ສະກັດຈາກລະບົບນີ້. ດັ່ງນັ້ນການແຍກຈຸລັງ CD19 B ທີ່ມີປະສິດທິພາບຈາກ PBMC ເປັນສິ່ງຈໍາເປັນສໍາລັບການຜະລິດຂໍ້ມູນການທົດລອງທີ່ເຊື່ອຖືໄດ້.

CD19 B Cell Magnetic Bead isolation Strategy

ການແຍກເຊນ CD19 B ແມ່ນຖືກປະຕິບັດໂດຍທົ່ວໄປໂດຍໃຊ້ລູກປັດແມ່ເຫຼັກ-ເທັກໂນໂລຍີການແຍກຕົວທີ່ອີງໃສ່. ລະ​ບົບ​ເຫຼົ່າ​ນີ້​ອີງ​ໃສ່ antibody-ລູກ​ປັດ conjugated ທີ່​ໂດຍ​ສະ​ເພາະ​ແມ່ນ​ຜູກ​ມັດ​ກັບ CD19 B cell ພາຍ​ໃນ PBMC. ເມື່ອຕິດສະຫຼາກ, ຈຸລັງ CD19 B ສາມາດຖືກແຍກອອກໂດຍໃຊ້ສະຫນາມແມ່ເຫຼັກ, ຊ່ວຍໃຫ້ການເສີມສ້າງຢ່າງໄວວາດ້ວຍຄວາມຕ້ອງການອຸປະກອນຫນ້ອຍ.

ໃນສະພາບການນີ້, ການແຍກຈຸລັງ CD19 B ສາມາດປະຕິບັດໄດ້ໂດຍຜ່ານການຄັດເລືອກທາງບວກຫຼືທາງລົບ. ການເລືອກທາງບວກຈະຈັບເຊວ CD19 B ໂດຍກົງຈາກ PBMC ໂດຍໃຊ້ CD19-ການກຳນົດລູກປັດແມ່ເຫຼັກ. ວິທີນີ້ສົ່ງຜົນໃຫ້ເຊວ CD19 B ອຸດົມສົມບຸນສູງ ເໝາະສຳລັບການນຳໃຊ້ລຸ່ມສຸດ. ໃນທາງກົງກັນຂ້າມ, ການຄັດເລືອກທາງລົບຈະເອົາເຊນທີ່ບໍ່ແມ່ນຈຸລັງ B ອອກຈາກ PBMC, ເຊິ່ງເຮັດໃຫ້ຈຸລັງ CD19 B ບໍ່ໄດ້ຮັບການແຕະຕ້ອງຢູ່ໃນສະພາບເດີມຂອງພວກມັນ. ທັງສອງຍຸດທະສາດຖືກນໍາໃຊ້ຢ່າງກວ້າງຂວາງ, ຂຶ້ນກັບວ່າການທົດລອງລົງລຸ່ມຕ້ອງການຄວາມສົມບູນຂອງ receptor ຫຼືຄວາມບໍລິສຸດສູງສຸດ.

ການເລືອກທາງບວກ ແລະການຄັດເລືອກທາງລົບຂອງ CD19 B Cells

ການຄັດເລືອກທາງບວກຂອງເຊນ CD19 ແມ່ນມີປະສິດຕິພາບສູງໃນການໄດ້ຮັບປະຊາກອນ B ບໍລິສຸດ. ໃນວິທີການນີ້, ຈຸລັງ CD19 B ຖືກຕິດສະຫຼາກໂດຍກົງແລະເກັບຮັກສາໄວ້ໃນສະຫນາມແມ່ເຫຼັກ, ເຮັດໃຫ້ການເສີມສ້າງຢ່າງໄວວາຈາກ PBMC. ວິທີການນີ້ແມ່ນເປັນປະໂຫຍດໂດຍສະເພາະໃນເວລາທີ່ຕ້ອງການຄວາມບໍລິສຸດສູງ, ເຊັ່ນໃນ CD19 B cell functional assays ຫຼື transcriptomic profiling.

ໃນທາງກົງກັນຂ້າມ, ການເລືອກທາງລົບຂອງເຊນ CD19 B ຖືກອອກແບບເພື່ອຮັກສາເຊັລ CD19 B ໂດຍບໍ່ມີການຜູກມັດ antibody ໂດຍກົງ. ໃນວິທີການນີ້, ປະເພດຈຸລັງພູມຕ້ານທານອື່ນໆແມ່ນ depleted ຈາກ PBMC, ລວມທັງຈຸລັງ T, ຈຸລັງ NK, ແລະ monocytes, ໃນຂະນະທີ່ຈຸລັງ CD19 B ຍັງຄົງບໍ່ປ່ຽນແປງ. ວິທີການນີ້ແມ່ນເປັນທີ່ນິຍົມໃນເວລາທີ່ສຶກສາການກະຕຸ້ນເຊນ CD19 B, ເສັ້ນທາງສັນຍານ, ຫຼືການຕອບສະຫນອງຂອງ antigen, ຍ້ອນວ່າມັນຫຼຸດຜ່ອນການມີສ່ວນຮ່ວມຂອງ receptor ປອມ.

ການຄັດເລືອກທາງບວກຂອງເຊນ CD19 B ແລະ ການຄັດເລືອກທາງລົບຂອງເຊນ CD19 B ໄດ້ຖືກຮັບຮອງເອົາຢ່າງກວ້າງຂວາງໃນການຄົ້ນຄວ້າທາງດ້ານພູມຄຸ້ມກັນຂອງມະນຸດ, ແລະທັງສອງວິທີການເລີ່ມຕົ້ນດ້ວຍ PBMC ເປັນວັດສະດຸເລີ່ມຕົ້ນ.

Immunomagnetic ແຍກຕ່າງຫາກແລະຄໍາຮ້ອງສະຫມັກທົດລອງ

ການແຍກພູມຕ້ານທານແມ່ນເຕັກໂນໂລຊີຫຼັກທີ່ຢູ່ເບື້ອງຫຼັງການແຍກເຊນ CD19 B. ມັນສະຫນອງວິທີການທີ່ໄວແລະສາມາດຂະຫຍາຍໄດ້ສໍາລັບການເສີມສ້າງເຊນ CD19 B ຈາກ PBMC ໃນຂະນະທີ່ຮັກສາຄວາມເປັນໄປໄດ້ສູງ. ການນໍາໃຊ້ແອນຕິບໍດີ-ລູກປັດແມ່ເຫຼັກເຄືອບເຮັດໃຫ້ສາມາດເລືອກການຜູກມັດໄດ້, ຕິດຕາມມາດ້ວຍການແຍກປະສິດທິພາບໂດຍໃຊ້ຖັນແມ່ເຫຼັກ ຫຼື racks.

ຫຼັງຈາກການໂດດດ່ຽວ, ຈຸລັງ CD19 B ສາມາດຖືກນໍາໃຊ້ໃນຫຼາຍໆຄໍາຮ້ອງສະຫມັກລຸ່ມ, ລວມທັງພູມຕ້ານທານ phenotyping, ການວິເຄາະຄວາມລັບຂອງ cytokine, ການສຶກສາ B cell receptor, ແລະການຄົ້ນພົບພູມຕ້ານທານ. ຄຸນນະພາບຂອງ CD19 B cell isolation ມີຜົນກະທົບໂດຍກົງຕໍ່ການສືບພັນຂອງການທົດລອງ, ເຮັດໃຫ້ການເພີ່ມປະສິດທິພາບຂອງການຈັດການ PBMC ແລະໂປໂຕຄອນການແຍກແມ່ນສໍາຄັນຕໍ່ຄວາມສໍາເລັດຂອງການຄົ້ນຄວ້າ.

ການເພີ່ມປະສິດທິພາບການເຮັດວຽກຈາກ PBMC ເຖິງ CD19 B Cells

ໃນຂະບວນການເຮັດວຽກຂອງຫ້ອງທົດລອງມາດຕະຖານ, PBMC ທໍາອິດຖືກແຍກອອກຈາກຕົວຢ່າງເລືອດຂອງມະນຸດແລະຫຼັງຈາກນັ້ນນໍາໃຊ້ເປັນວັດສະດຸປ້ອນສໍາລັບການເສີມສ້າງເຊນ CD19 B. ປະສິດທິພາບຂອງ CD19 B cell isolation ແມ່ນຂຶ້ນກັບປັດໃຈເຊັ່ນ: ຄຸນນະພາບ PBMC, ປະສິດທິພາບການຜູກມັດຂອງລູກປັດ, ແລະຍຸດທະສາດການຄັດເລືອກ (ການຄັດເລືອກທາງບວກ ຫຼື ທາງລົບ). ການກະກຽມ PBMC ຄຸນນະພາບສູງນໍາໄປສູ່ການປັບປຸງຜົນຜະລິດຂອງເຊນ CD19 B ແລະຄວາມບໍລິສຸດ.

ໂດຍລວມແລ້ວ, CD19 B cell isolation from PBMC is a cornerstone technique in human immunology. ບໍ່ວ່າຈະເປັນການໃຊ້ CD19 B cell positive Select ຫຼື CD19 B cell negative Select, ນັກຄົ້ນຄວ້າໄດ້ອີງໃສ່ PBMC ເປັນຈຸດເລີ່ມຕົ້ນທີ່ສໍາຄັນສໍາລັບການສ້າງປະຊາກອນ CD19 B cell ທີ່ມີປະສິດຕິພາບທີ່ເຫມາະສົມສໍາລັບຄໍາຮ້ອງສະຫມັກທົດລອງທີ່ຫຼາກຫຼາຍ.

Q1: ການພົວພັນລະຫວ່າງຈຸລັງ CD19 B ແລະ PBMC ແມ່ນຫຍັງ?

ຈຸລັງ CD19 B ແມ່ນປະຊາກອນຍ່ອຍຂອງ PBMC. PBMC ປະກອບມີຈຸລັງພູມຕ້ານທານຫຼາຍຊະນິດ, ລວມທັງຈຸລັງ T, ຈຸລັງ NK, monocytes, ແລະຈຸລັງ CD19 B. ຈຸລັງ CD19 B ເປັນຕົວແທນຂອງສ່ວນນ້ອຍຂອງ PBMC ແລະໂດຍທົ່ວໄປແລ້ວແມ່ນອຸດົມສົມບູນຈາກ PBMC ສໍາລັບການທົດລອງທາງລຸ່ມ.

Q2: ການແຍກເຊນ CD19 B ໃຊ້ເພື່ອຫຍັງ?

CD19 B cell isolation ຖືກນໍາໃຊ້ເພື່ອໃຫ້ໄດ້ຈຸລັງ B ທີ່ມີຄວາມບໍລິສຸດສູງສໍາລັບການຄົ້ນຄວ້າທາງດ້ານພູມຕ້ານທານ. ຈຸລັງ CD19 B ແມ່ນຖືກແຍກອອກທົ່ວໄປຈາກ PBMC ສໍາລັບຄໍາຮ້ອງສະຫມັກເຊັ່ນ: flow cytometry, ລໍາດັບ RNA, ການຄົ້ນພົບພູມຕ້ານທານ, ແລະການວິເຄາະພູມຕ້ານທານທີ່ເປັນປະໂຫຍດ.

Q3: ຄວາມແຕກຕ່າງລະຫວ່າງການເລືອກທາງບວກແລະທາງລົບສໍາລັບຈຸລັງ CD19 B ແມ່ນຫຍັງ?

CD19 B cell ການຄັດເລືອກໃນທາງບວກຈະຈັບເຊນ CD19 B ໂດຍກົງໂດຍໃຊ້ antibody-ລູກປັດແມ່ເຫຼັກທີ່ເຄືອບ, ເຮັດໃຫ້ມີຄວາມບໍລິສຸດສູງ. CD19 B cell ການຄັດເລືອກລົບເອົາເຊນທີ່ບໍ່ແມ່ນ-B ອອກຈາກ PBMC, ເຮັດໃຫ້ເຊລ CD19 B ບໍ່ໄດ້ຮັບການແຕະຕ້ອງຢູ່ໃນສະພາບເດີມກວ່າ. ວິທີການທັງສອງແມ່ນຖືກນໍາໃຊ້ຢ່າງກວ້າງຂວາງໂດຍອີງຕາມຄວາມຕ້ອງການໃນການທົດລອງ.

Q4: ເປັນຫຍັງ PBMC ຈຶ່ງຖືກໃຊ້ທົ່ວໄປສໍາລັບການແຍກເຊນ CD19 B?

PBMC ແມ່ນອຸປະກອນການເລີ່ມຕົ້ນມາດຕະຖານເນື່ອງຈາກວ່າມັນໄດ້ຮັບໄດ້ຢ່າງງ່າຍດາຍຈາກເລືອດ peripheral ແລະປະກອບດ້ວຍຈຸລັງພູມຕ້ານທານ mononuclear ທີ່ສໍາຄັນທັງຫມົດ, ລວມທັງຈຸລັງ CD19 B. ການ​ນໍາ​ໃຊ້ PBMC ອະ​ນຸ​ຍາດ​ໃຫ້​ການ​ເສີມ​ປະ​ສິດ​ທິ​ພາບ​ຂອງ CD19 B ຈຸ​ລັງ​ໂດຍ​ຜ່ານ​ການ bead ສະ​ນະ​ແມ່​ເຫຼັກ - ລະ​ບົບ​ການ​ແຍກ​ໂດຍ​ອີງ​ໃສ່​.

Q5: ແອັບພລິເຄຊັນໃດທີ່ໃຊ້ເຊນ CD19 B ທີ່ໂດດດ່ຽວຈາກ PBMC?

ຈຸລັງ CD19 B ທີ່ໂດດດ່ຽວຈາກ PBMC ໄດ້ຖືກນໍາໃຊ້ຢ່າງກວ້າງຂວາງໃນການຄົ້ນຄວ້າທາງດ້ານພູມຕ້ານທານແລະຊີວະວິທະຍາ, ລວມທັງການວິເຄາະຕົວຮັບຂອງຈຸລັງ B, ການສຶກສາຄວາມລັບຂອງ cytokine, ການສ້າງພູມຕ້ານທານ, ແລະການພັດທະນາພູມຕ້ານທານການປິ່ນປົວ. ຄຸນນະພາບຂອງ CD19 B cell isolation ມີຜົນກະທົບໂດຍກົງຕໍ່ຄວາມໜ້າເຊື່ອຖືຂອງການທົດລອງລົງລຸ່ມ.