Principio del ensayo de cometa
El ensayo de cometa, también conocido como electroforesis de gel de células individuales, es una técnica para determinar la genotoxicidad al detectar el daño por cadena de ADN. Puede detectar y analizar cuantitativamente la extensión del daño de nick de doble cadena de ADN en las células. Cuando varios factores de daño de ADN endógenos y exógenos inducen roturas de la cadena de ADN celular, su estructura superhélica está dañada, y bajo la acción del lisado celular, la membrana celular, la membrana nuclear y las estructuras de la membrana se dañan y se dañan las proteínas intracelulares, el ARN y otros componentes se difunden en el lisado celular, mientras que el ADN nuclear solo puede ser retenido en su lugar.En condiciones neutras, los fragmentos de ADN pueden ingresar al gel y migrar, mientras que bajo la acción de los electrolitos alcalinos, se liberan el ADN y se liberan hilos y fragmentos de ADN dañados y dañados. Debido a la pequeña masa molecular relativa de estos ADN y la desnaturalización alcalina en hebras individuales, los ADN cargados negativamente dejan que el ADN nuclear migre hacia el polo positivo durante la electroforesis, lo que resulta en una imagen cometa, mientras que las porciones de ADN no dañadas siguen siendo esféricas. Por lo tanto, se puede clasificar adicionalmente en la prueba de cometa neutral (pH = 8.4) y la prueba de cometa alcalino (pH> 13) de acuerdo con los diferentes valores de pH del tampón de electroforesis. El primero se usa principalmente para detectar el daño de rotura de la cadena doble de ADN, mientras que el segundo tiene una mayor sensibilidad y puede usarse para detectar una menor cantidad de daño de rotura de hebra única y doble.
Por lo general, cuanto más severo es el daño del ADN, más se rompe la cadena y el fragmento produce, más menor es su longitud, más ADN migra bajo las mismas condiciones electroforéticas y más larga es su distancia de migración. Por lo tanto, el grado de daño del ADN en células individuales se puede determinar midiendo la densidad óptica o la longitud de la porción migrada del ADN, determinando así la relación entre la dosis de actuación del sujeto y el efecto de daño del ADN.
Productos icase
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Tiempo de publicación: 2024 - 07 - 26 15:29:08