धूमकेतु परख का सिद्धांत
धूमकेतु परख, जिसे एकल-सेल जेल वैद्युतकणसंचलन के रूप में भी जाना जाता है, डीएनए स्ट्रैंड क्षति का पता लगाकर जीनोटॉक्सिसिटी निर्धारित करने की एक तकनीक है। यह कोशिकाओं में डीएनए सिंगल और डबल स्ट्रैंड निक क्षति की सीमा का प्रभावी ढंग से पता लगा सकता है और मात्रात्मक विश्लेषण कर सकता है। जब विभिन्न अंतर्जात और बहिर्जात डीएनए क्षति कारक सेलुलर डीएनए स्ट्रैंड के टूटने को प्रेरित करते हैं, तो इसकी सुपरहेलिकल संरचना क्षतिग्रस्त हो जाती है, और सेल लाइसेट की कार्रवाई के तहत, कोशिका झिल्ली, परमाणु झिल्ली और अन्य झिल्ली संरचनाएं क्षतिग्रस्त हो जाती हैं, और इंट्रासेल्युलर प्रोटीन, आरएनए और अन्य घटक सेल लाइसेट में फैल जाते हैं, जबकि परमाणु डीएनए केवल अपने बहुत बड़े सापेक्ष आणविक द्रव्यमान के कारण ही बरकरार रखा जा सकता है।तटस्थ परिस्थितियों में, डीएनए के टुकड़े जेल में प्रवेश कर सकते हैं और पलायन कर सकते हैं, जबकि क्षारीय इलेक्ट्रोलाइट्स की कार्रवाई के तहत, डीएनए डी-हेलिकलाइज्ड हो जाता है और क्षतिग्रस्त डीएनए टूटे हुए स्ट्रैंड और टुकड़े निकल जाते हैं। इन डीएनए के छोटे सापेक्ष आणविक द्रव्यमान और एकल स्ट्रैंड में क्षारीय विकृतीकरण के कारण, नकारात्मक रूप से चार्ज किए गए डीएनए वैद्युतकणसंचलन के दौरान परमाणु डीएनए को सकारात्मक ध्रुव की ओर स्थानांतरित करने के लिए छोड़ देते हैं, जिसके परिणामस्वरूप एक धूमकेतु जैसी छवि बनती है, जबकि अप्रकाशित डीएनए भाग गोलाकार रहते हैं। इसलिए, इसे वैद्युतकणसंचलन बफर के विभिन्न पीएच मानों के अनुसार तटस्थ धूमकेतु परीक्षण (पीएच=8.4) और क्षारीय धूमकेतु परीक्षण (पीएच>13) में वर्गीकृत किया जा सकता है। पूर्व का उपयोग मुख्य रूप से डीएनए डबल-स्ट्रैंड टूटने की क्षति का पता लगाने के लिए किया जाता है, जबकि बाद वाले में उच्च संवेदनशीलता होती है और इसका उपयोग सिंगल-स्ट्रैंड और डबल-स्ट्रैंड टूटना क्षति की छोटी मात्रा का पता लगाने के लिए किया जा सकता है।
आमतौर पर, डीएनए की क्षति जितनी अधिक गंभीर होती है, वह उतने ही अधिक स्ट्रैंड और टुकड़ों को तोड़ती है, उसकी लंबाई उतनी ही कम होती है, समान इलेक्ट्रोफोरेटिक स्थितियों के तहत वह उतना ही अधिक डीएनए माइग्रेट करता है, और उसकी माइग्रेशन दूरी उतनी ही लंबी होती है। इसलिए, व्यक्तिगत कोशिकाओं में डीएनए क्षति की डिग्री ऑप्टिकल घनत्व या डीएनए के विस्थापित हिस्से की लंबाई को मापकर निर्धारित की जा सकती है, इस प्रकार विषय की अभिनय खुराक और डीएनए क्षति प्रभाव के बीच संबंध निर्धारित किया जा सकता है।
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पोस्ट समय: 2024-07-26 15:29:08