Dado que las actividades de las enzimas metabolizadoras de fármacos disminuyen gradualmente con la prolongación del tiempo de incubación in vitro, los modelos tradicionales de metabolismo in vitro tienen limitaciones tales como un tiempo de incubación corto, una conversión metabólica baja y un límite inferior de detección alto (el límite inferior cuantitativo del ensayo CLint es 2,5 μL/(min · 106 células)), que no pueden predecir con precisión el CLint de fármacos metabolizados lentamente.[1]. Mientras tanto,hepatocitoLos s tienen más enzimas necesarias para las reacciones de oxidación, reducción, hidrólisis y dimerización en comparación conmicrosomas hepáticos, y en sistemas in vitro, muchos modelos novedosos tienden a optimizarse en función de lahepatocito sistema e imitar aún más el entorno in vivo para prolongar la retención de la actividad enzimática enhepatocitos, y la prolongación del tiempo de incubación proporciona la posibilidad de controlar una transformación metabólica suficiente de los fármacos de metabolización lenta.[1,2].
En vista de esto, IPHASE, como líder en reactivos biológicos para la investigación in vitro, ha sido pionero en el sistema HepatoMax™ y el sistema de medios HepatoCon™ basados en el estudio de hepatocitos primarios adherentes y células estromales de varios géneros, incluidos humanos, monos, caninos, ratas y ratones, etc. El sistema HepatoMax™ y el sistema de medios HepatoCon™ se desarrollaron utilizando el sistema de medios humanos primarios adherentes.hepatocitos como ejemplo, y ambos sistemas se configuraron para la determinación de la actividad y la estabilidad metabólica de tipos de enzimas específicos y el aumento en el valor de respuesta de los metabolitos del fármaco tolbutamida a los 10 días y 7 días para verificar los sistemas. Para validar los sistemas se determinó el valor de respuesta de aumento de metabolitos a los 10 días y la actividad y la estabilidad metabólica de tipos de enzimas específicos a los 7 días.
- (1) Los dos procesos sistemáticos de cultivo de validación de fármacos son los siguientes:
FASES-HepatoMax™es un sistema de cocultivo de hepatocitos humanos primarios con paredes congeladas y células estromales. Los hepatocitos humanos primarios se reanimaron y se incubaron con células estromales en medio HepatoP™ durante 3 días para iniciar el ensayo de administración del fármaco, y el metabolismo del fármaco se llevó a cabo en medio HepatoDo™ libre de suero, que se reponía únicamente con el fármaco sin cambiar el medio. Un total de 4, 72, 168 y 240 horas después de la administración del fármaco, se determinó para su análisis el valor agregado de los metabolitos del fármaco.
FASES-HepatoCon™, por otro lado, es un sistema para cultivar hepatocitos humanos primarios adherentes congelados en medio HepatoCon™. Después de resucitar al ser humano primariohepatocitos, el ensayo de administración del fármaco se realizó después de 3 días de cultivo en medio HepatoCon™ solo, y el tiempo de administración posterior, el sistema de cultivo y la metodología de ensayo fueron los mismos que los del sistema HepatoMax™.
Mientras tanto, para garantizar la precisión y el rigor de los resultados, IPHASE realizó un control medio (libre de células) y un control de células estromales al mismo tiempo, con tres replicaciones, y los resultados mostraron que elFASES-HepatoMax™ yFASES-HepatoCon™ Los sistemas produjeron una fuerte respuesta máxima de metabolitos desde el día 3 en adelante, y ambos mostraron una fuerte tasa de recambio metabólico.
- (2) El metabolismo de los fármacos depende principalmente de los hepatocitos.CYP450sistema enzimático, y su actividad se puede medir para examinar mejor.
elFASES-HepatoMax™ yFASES-HepatoCon™ Los sistemas tienen buena aplicabilidad.
IPHASE configuró cuatro categorías de control medio (sin células), HepatoMax™, HepatoCon™ y células estromales. Usando pared-humano primario adherentehepatocitoComo ejemplo, el metabolito aumenta los valores deCYP1A2, CYP2B6yCYP3A4se verificaron los días 0, 3 y 7 despuéshepatocitorecuperación durante 3 días utilizando finasterida, bupropión y midazolam como sustratos, respectivamente. Los valores de aumento de metabolitos mostraron que tantoFASES-HepatoMax™ yFASES-HepatoCon™ Los sistemas mostraron actividad enzimática activa el día 7, promoviendo constantemente el metabolismo normal de los fármacos.
- (3) Además de la validación de la actividad enzimática, una buena estabilidad metabólica también es un paso importante e indispensable para validar la utilidad de los modelos in vitro.
IPHASE configuró tres categorías de HepatoMax™, HepatoCon™ y células estromales para determinar la estabilidad metabólica de tolbutimida durante un período de 80 horas utilizando como ejemplo hepatocitos humanos primarios adherentes, que se administraron 3 días después de la reanimación de los primarios.hepatocitos, y los resultados mostraron que tanto elFASES-HepatoMax™ yFASES-HepatoCon™ Ambos sistemas mostraron una sólida actividad de eliminación metabólica dentro del valor más largo del tiempo de ensayo.
En resumen, IPHASE, como líder en bio-reactivos in vitro, ha desarrolladoIPHASE HepatoMax™ yIPHASE HepatoCon™ Modelos in vitro basados en humanos, monos, caninos, ratas y ratones primarios aplicados a la pared.hepatocitos y células estromales de varios géneros, con excelente rotación metabólica, actividades enzimáticas activas y potentes actividades de eliminación metabólica, que ofrecen nuevas opciones para que nuestros clientes desarrollen medicamentos de baja autorización y son un socio indispensable para realizar el descubrimiento de fármacos. elIPHASE HepatoMax™ yIPHASE HepatoCon™ Los modelos in vitro ofrecen excelentes tasas de renovación metabólica, actividades enzimáticas activas y fuertes actividades de eliminación metabólica, lo que brinda nuevas opciones para que los clientes desarrollen medicamentos de baja autorización y son un socio importante en el descubrimiento de fármacos.
Referencia:
[1]阮婷婷,鞠武建,熊海伟,等.低清除率药物的代谢稳定性预测模型研究进展[J].中国药科大学学报, 2019(2):152-160.
[2] Di L, Trapa P, Obach R S, et al. Un nuevo método de retransmisión para determinar valores de holgura bajos [J]. Metabolismo y disposición de fármacos, 2012, 40(9): 1860-1865.
Hora de publicación: 2024-07-19 17:20:41