Princípio do ensaio do cometa
O ensaio do cometa, também conhecido como eletroforese em gel de célula único, é uma técnica para determinar a genotoxicidade, detectando danos na fita de DNA. Ele pode detectar e analisar quantitativamente a extensão do dano de nicada de fita única e dupla do DNA nas células. When various endogenous and exogenous DNA damage factors induce cellular DNA strand breaks, its superhelical structure is damaged, and under the action of cell lysate, the cell membrane, the nuclear membrane and other membrane structures are damaged, and intracellular proteins, RNA, and other components diffuse into the cell lysate, whereas the nuclear DNA can only be retained in place due to its too large relative molecular mass.Sob condições neutras, os fragmentos de DNA podem entrar no gel e migrar, enquanto, sob a ação dos eletrólitos alcalinos, o DNA é liberado e os fios e fragmentos quebrados de DNA danificados são liberados. Devido à pequena massa molecular relativa desses DNAs e à desnaturação alcalina em fios únicos, os DNAs carregados negativamente deixam o DNA nuclear para migrar em direção ao pólo positivo durante a eletroforese, resultando em uma imagem do Comet - Portanto, pode ser categorizado ainda mais no teste de cometa neutro (pH = 8,4) e teste de cometa alcalino (pH> 13) de acordo com os diferentes valores de pH do tampão de eletroforese. O primeiro é usado principalmente para detectar o dano de quebra de DNA duplo - fita, enquanto o último tem maior sensibilidade e pode ser usado para detectar uma quantidade menor de danos de quebra de fita única e dupla.
Geralmente, quanto mais grave o dano do DNA, mais fios e fragmentos quebram, menor, menor o seu comprimento, mais DNA migra sob as mesmas condições eletroforéticas e maior a distância da migração. Portanto, o grau de dano ao DNA em células individuais pode ser determinado medindo a densidade óptica ou o comprimento da porção migrada do DNA, determinando assim a relação entre a dose de atuação do sujeito e o efeito de dano ao DNA.
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Horário de postagem: 2024 - 07 - 26 15:29:08