Como as atividades das enzimas metabolizadoras de medicamentos diminuem gradualmente com o prolongamento do tempo de incubação in vitro, os modelos tradicionais de metabolismo in vitro têm limitações, como tempo de incubação curto, baixa conversão metabólica e limite inferior elevado de detecção (o limite inferior quantitativo do ensaio CLint é 2,5 μL /(min · 106 células)), o que não pode prever com precisão o CLint de medicamentos metabolizados lentamente[1]. Enquanto isso,hepatócitos têm mais enzimas necessárias para reações de oxidação, redução, hidrólise e dimerização em comparação commicrossomas hepáticos, e em sistemas in vitro, muitos novos modelos tendem a ser otimizados com base nohepatócito sistema e imitar ainda mais o ambiente in vivo para prolongar a retenção da atividade enzimática emhepatócitos, e o prolongamento do tempo de incubação proporciona a possibilidade de monitorar a transformação metabólica suficiente de medicamentos de metabolismo lento[1,2].
Em vista disso, a IPHASE, como líder em reagentes biológicos para pesquisa in vitro, foi pioneira no Sistema HepatoMax™ e no Sistema de Meio HepatoCon™ com base no estudo de hepatócitos primários aderentes e células estromais de vários gêneros, incluindo humanos, macacos, caninos, ratos e camundongos, etc.hepatócitos como exemplo, e ambos os sistemas foram configurados para a determinação da atividade e estabilidade metabólica de tipos específicos de enzimas e o aumento no valor de resposta dos metabólitos da droga tolbutamida em 10 dias e 7 dias para verificar os sistemas. O valor da resposta de aumento do metabólito aos 10 dias e a atividade e estabilidade metabólica de tipos específicos de enzimas aos 7 dias foram determinados para validar os sistemas.
- (1)Os dois processos sistemáticos de cultura de validação de medicamentos são os seguintes:
IPHASE-HepatoMax™é um sistema de co-cultura de hepatócitos humanos primários com paredes congeladas e células estromais. Os hepatócitos humanos primários foram ressuscitados e incubados com células estromais em meio HepatoP™ por 3 dias para iniciar o ensaio de administração do medicamento, e o metabolismo do medicamento foi realizado em meio HepatoDo™ livre de soro, que foi reabastecido apenas com o medicamento sem alteração do meio. Um total de 4, 72, 168 e 240 horas após a administração do medicamento, o valor agregado dos metabólitos do medicamento foi determinado para análise.
IPHASE-HepatoCon™, por outro lado, é um sistema para cultura de hepatócitos humanos primários aderentes congelados em meio HepatoCon™. Depois de ressuscitar o humano primáriohepatócitos, o ensaio de administração do medicamento foi realizado após 3 dias de cultura apenas em meio HepatoCon™, e o tempo subsequente de administração, o sistema de cultura e a metodologia do ensaio foram os mesmos do sistema HepatoMax™.
Entretanto, para garantir a precisão e o rigor dos resultados, o IPHASE realizou um controle de meio (cell-free) e um controle de células estromais ao mesmo tempo, com três repetições, e os resultados mostraram que oIPHASE-HepatoMax™ eIPHASE-HepatoCon™ produziram um forte pico de resposta metabólica a partir do dia 3 e que ambos mostraram uma forte taxa de renovação metabólica.
- (2) O metabolismo das drogas depende principalmente do hepatócitoCYP450sistema enzimático, e sua atividade pode ser medida para melhor examinar.
OIPHASE-HepatoMax™ eIPHASE-HepatoCon™ sistemas têm boa aplicabilidade.
IPHASE estabeleceu quatro categorias de controle médio (sem células), HepatoMax™, HepatoCon™ e células estromais. Usando humano primário wall-aderentehepatócitoPor exemplo, o metabólito aumenta os valores deCYP1A2, CYP2B6eCYP3A4foram verificados nos dias 0, 3 e 7 apóshepatócitorecuperação por 3 dias utilizando finasterida, bupropiona e midazolam como substratos, respectivamente. Os valores de aumento do metabólito mostraram que ambosIPHASE-HepatoMax™ eIPHASE-HepatoCon™ mostraram atividade enzimática ativa no dia 7, promovendo consistentemente o metabolismo normal do medicamento.
- (3)Além da validação da atividade enzimática, uma boa estabilidade metabólica é também um passo importante e indispensável na validação da utilidade dos modelos in vitro.
IPHASE estabeleceu três categorias de HepatoMax™, HepatoCon™ e células estromais para determinar a estabilidade metabólica da tolbutimida durante um período de 80 horas usando hepatócitos humanos primários aderentes como exemplo, que foram administrados 3 dias após a ressuscitação do primáriohepatócitos, e os resultados mostraram que tanto oIPHASE-HepatoMax™ eIPHASE-HepatoCon™ ambos os sistemas mostraram atividade de depuração metabólica robusta dentro do valor mais longo do tempo de ensaio.
Em resumo, a IPHASE, como líder em bio-reagentes in vitro, desenvolveuIPHASE HepatoMax® eIPHASE HepatoCon® modelos in vitro baseados em parede - primários aplicados em humanos, macacos, caninos, ratos e camundongoshepatócitose células estromais de vários gêneros, com excelente renovação metabólica, atividades enzimáticas ativas e poderosas atividades de depuração metabólica, que oferecem novas opções para nossos clientes desenvolverem medicamentos de baixa depuração e são um parceiro indispensável para realizar a descoberta de medicamentos! OIPHASE HepatoMax® eIPHASE HepatoCon® modelos in vitro oferecem excelentes taxas de renovação metabólica, atividades enzimáticas ativas e fortes atividades de depuração metabólica, proporcionando novas opções para os clientes desenvolverem medicamentos de baixa depuração e são um parceiro importante na descoberta de medicamentos!
Referência:
[1]阮婷婷,鞠武建,熊海伟,等.低清除率药物的代谢稳定性预测模型研究进展[J].中国药科大学学报, 2019(2):152-160.
[2] Di L, Trapa P, Obach RS, et al. Um novo método de relé para determinar valores de folga baixos[J]. Metabolismo e disposição de medicamentos, 2012, 40(9): 1860-1865.
Horário da postagem: 2024-07-19 17:20:41