Standaard Ames -toets
Die AMES -toets is 'n wyd gebruikte toets vir die opsporing van mutageniese potensiaal in chemiese verbindings, insluitend n - nitrosamiene. Ondanks die belangrikheid daarvan in toksikologiese sifting, het die standaard AMES -toets verskeie beperkings, veral as die evaluering van verbindings wat ingewikkelde metaboliese aktivering benodig, evalueer.
Beperkings van die standaard Ames -toets
Terwyl die Ames -toets 'n hoeksteen bly in mutagenisiteitstoetsing, het dit sekere beperkings:
- Beperkte metaboliese aktivering:
Die standaard AMES -toets gebruik tipies rotlewer S9, wat nie 'n sekere menslike - relevante sitochroom P450 (CYP) ensieme het nie. Dit kan lei tot die onderaktivering van prokarcinogene (bv. Sommige n - nitrosamiene) of ooraktivering van nie -menslike gevare. Voorbeeld: Rat S9 metaboliseer n - nitrosodiethylamine (NDEA) in vergelyking met menslike ensieme, wat valse negatiewe waag.
- Beperkte mutasiespektrumopsporing:
Standaardstamme (bv. TA98, TA100) bespeur slegs spesifieke mutasietipes (ramehifts, basis - paarvervangings), ontbrekende klastogene of epigenetiese karsinogene.
- Oor - Vertroue op bakteriële stelsels:
Aangesien die toets Salmonella typhimurium gebruik, is dit nie verantwoordelik vir DNA -herstelmeganismes wat in soogdierselle teenwoordig is nie, wat moontlik mutageniese effekte ontbreek.
- Valse positiewe en negatiewe:
Sommige nie -mutageniese verbindings kan positiewe resultate lewer as gevolg van bakteriese stresrespons, terwyl sommige mutagene wat ingewikkelde metaboliese aktivering benodig, nie opgemerk kan word nie.
Die verbeterde Ames -toets
EMA se jongste vrystelling V&A as Guidance lui dat die voorwaardes van die verbeterde AMES -toets wat deur die FDA se nasionale sentrum vir toksikologiese navorsing (NCTR) aangebied word, weens die lae sensitiwiteit van sommige nitrosamiene (bv. NDMA) onder die voorwaardes van die standaard AMES -toets. Die FDA het tot die gevolgtrekking gekom dat die standaardmetodes wat vir die AMES -toets gebruik word, moontlik nie voldoende is om die mutageniese potensiaal van n - nitrosamiene te karakteriseer nie, en in sommige gevalle negatiewe resultate kan lewer vir bekende mutageniese nitrosamiene. In reaksie hierop het die Nasionale Sentrum vir Toksikologiese Navorsing van FDA verskillende voorwaardes getoets om die verbeterde Ames -toets te ontwikkel, wat bedoel is om 'n meer betroubare beoordeling van die mutageniese potensiaal van NiTrosamine -onsuiwerhede te gee.
Die FDA word deur die volgende verbeterde Ames -toets (EAT) -voorwaardes voorsien
|
Toetsstamme |
Sluit Salmonella Typhimurium TA98, TA100 in. TA1535, TA1537 en Escherichia coli WP2 UVRA (PKM101) toetsstam |
|
Toetsmetode en voor - isolasietyd |
Voor - isolasie en nie -- platbeddingsmetodes moet gebruik word, met 'n aanbevole voor -isolasietyd van 30 minute. |
|
S9 tipe en konsentrasie |
Die verbeterde AMES -toets moet uitgevoer word in die bevattende 30% rotte lewer S9 en 30%Hamster lewer S9. Rat- en hamster -desmosomale supernatante (S9's) moet berei word uit knaagdierlewers wat met behandel wordSitochroom P450 ensiem- induserende stowwe (bv. 'N kombinasie van fenobarbital en β - naftoflavon). |
|
Negatiewe (oplosmiddel/hulpstof) beheer |
Die oplosmiddels wat gebruik word, moet volgens die Ames -toets versoenbaar weesOECD 471riglyne. Beskikbare oplosmiddels sluit in, maar is nie beperk tot: (1) water; (2) Organiese oplosmiddels soos asetonitril, metanol en dimetielsulfoksied (DMSO). Wanneer organiese oplosmiddels gebruik word, moet die laagste moontlike volume in die vooraf - houmengsel gebruik word, en daar moet aangetoon word dat die hoeveelheid organiese oplosmiddel wat gebruik word nie die metaboliese aktivering van n - nitrosamiene belemmer nie. |
|
Positiewe beheer |
Volgens die OECD 471 -riglyne, moet stam - spesifieke positiewe kontroles terselfdertyd uitgevoer word. In die teenwoordigheid van S9 moet die twee N - nitrosamiene wat bekend is dat dit mutagenies is, ook as positiewe kontroles gebruik word. Beskikbaar n - nitrosamien -positiewe kontroles sluit in: NDMA, 1 - Cyclopentyl - 4 - Nitrosopiperazine ndsris。 |
|
Alle ander aanbevelings oor AMES -bepaling moet OECD 471 riglyne volg |
|
Unieke voordeel van hamster lewer S9 -fraksie
Hamster Liver S9 -fraksie is veral waardevol in AMES -toetsing vanweë die voortreflike vermoë om sekere nitrosamiene te aktiveer in vergelyking met rotte lewer S9. Dit deel 'n nouer metaboliese profiel aan menslike lewerensieme, wat dit meer relevant maak vir menslike risikobepaling. Boonop bevat hamster lewer S9 hoër vlakke van spesifieke sitochroom P450 -ensieme, wat van uiterste belang is vir die bioaktivering van mutagene. Dit lei tot 'n verbeterde sensitiwiteit en verminder vals - negatiewe tariewe, wat beter opsporing van mutagene moontlik maak wat andersins nie opgemerk kan word met rotte lewer S9 alleen nie.
Konklusie
Alhoewel die standaard AMES -toets 'n fundamentele instrument bly om mutagenisiteit te beoordeel, noodsaak die beperkings daarvan verbeterings vir beter akkuraatheid. Die verbeterde Ames -toets, veral met die insluiting van hamster lewer S9 -fraksie, verhoog die opsporing van komplekse mutagene soos N - nitrosamiene aansienlik, wat die gaping tussen bakteriële en soogdiermetabolisme oorbrug. Hierdie vooruitgang bied 'n meer betroubare metode om potensiële menslike karsinogene te evalueer en ondersteun beter regulatoriese besluit -
Sleutelwoorde: N - Nitrosamines, NDSRIS, OECD 471, Verbeterde Ames -toets, Hamster Liver S9, Cytochrome P450 Enzymes, Mutation Test
Postyd: 2025 - 03 - 12 09:22:09