Test Ames standar
Tes Ames minangka tes sing akeh digunakake kanggo ndeteksi potensial mutagen ing senyawa kimia, kalebu N-Nitrosamin. Senadyan pinunjul ing screening toksikologis, tes Ames standar duwe sawetara watesan, utamane nalika ngevaluasi senyawa sing mbutuhake aktivasi metabolisme kompleks.
Watesan Test Ames Standar
Nalika tes Ames tetep dadi landasan ing tes mutagenisitas, ana watesan tartamtu:
- Aktivasi Metabolik Terbatas:
Tes Ames standar biasane nggunakake ati tikus S9, sing ora duwe enzim sitokrom P450 (CYP) manungsa tartamtu. Iki bisa nyebabake kurang aktif prokarsinogen (contone, sawetara N-nitrosamines) utawa overactivation saka bebaya non-manungsa. Conto: Tikus S9 kurang metabolizes N-nitrosodiethylamine (NDEA) dibandhingake karo enzim manungsa, resiko negatif palsu.
- Deteksi Spektrum Mutasi Terbatas:
galur standar (contone, TA98, TA100) ndeteksi mung jinis mutasi tartamtu (frameshifts, basa-substitusi pasangan), ilang clastogens utawa karsinogen epigenetik.
- Over-Katergantungan ing Sistem Bakteri:
Wiwit tes kasebut nggunakake Salmonella typhimurium, ora ana mekanisme ndandani DNA sing ana ing sel mamalia, sing bisa uga ora ana efek mutagen.
- Positif lan Negatif Palsu:
Sawetara senyawa non mutagenik bisa ngasilake asil positif amarga respon stres bakteri, dene sawetara mutagen sing mbutuhake aktivasi metabolisme kompleks bisa uga ora dideteksi.
Tes Ames Enhanced
Pandhuan Q&As rilis paling anyar saka EMA nyatakake yen amarga sensitivitas sawetara N-nitrosamines (contone, NDMA) sing kurang, miturut kondisi tes Ames standar, kondisi Tes Ames Enhanced sing diwenehake dening Pusat Riset Toksikologi Nasional (NCTR) FDA dianjurake. FDA wis nyimpulake yen cara standar sing digunakake kanggo Tes Ames bisa uga ora cukup kanggo nemtokake potensial mutagen saka N-nitrosamines, lan ing sawetara kasus bisa ngasilake asil negatif kanggo nitrosamin mutagen sing dikenal. Nanggepi, Pusat Riset Toksikologi Nasional FDA wis nyoba macem-macem kahanan kanggo ngembangake Tes Ames Enhanced, sing dimaksudake kanggo menehi penilaian sing luwih dipercaya babagan potensial mutagen saka kotoran N-nitrosamine.
Kondisi Enhanced Ames Test (EAT) ing ngisor iki diwenehake dening FDA
|
Test galur |
Kalebu Salmonella typhimurium TA98, TA100. TA1535, TA1537 lan Escherichia coli WP2 uvrA (pKM101) galur test |
|
Cara tes lan wektu pra-insulasi |
Cara pra-insulasi lan non-flatbedding kudu digunakake, kanthi wektu pra-insulasi sing disaranake 30 menit. |
|
S9 Jinis lan Konsentrasi |
Tes Enhanced Ames kudu ditindakake kanthi ngemot 30% ati tikus S9 lan 30%Ati Hamster S9. Supernatan desmosomal tikus lan hamster (S9s) kudu disiapake saka ati tikus sing diobati karoenzim sitokrom P450- zat-zat inducing (contone, kombinasi fenobarbital lan β-naphthoflavon). |
|
Kontrol negatif (pelarut / eksipien). |
Pelarut sing digunakake kudu cocog karo tes Ames miturutOECD 471pedoman. Pelarut sing kasedhiya kalebu, nanging ora diwatesi: (1) Banyu; (2) Pelarut organik kayata asetonitril, metanol, lan dimetil sulfoksida (DMSO). Nalika pelarut organik digunakake, volume paling sithik ing campuran pra-holding kudu digunakake lan kudu dituduhake yen jumlah pelarut organik sing digunakake ora ngganggu aktivasi metabolisme N-nitrosamines. |
|
Kontrol Positif |
Miturut pedoman OECD 471, strain-kontrol positif spesifik kudu ditindakake bebarengan. Ing ngarsane S9, loro N-nitrosamine sing dikenal minangka mutagen uga kudu digunakake minangka kontrol positif. Kontrol positif N-nitrosamine sing kasedhiya kalebu: NDMA, 1-cyclopentyl-4-nitrosopiperazine NDSRIs. |
|
Kabeh rekomendasi liyane babagan tekad Ames kudu ngetutake pedoman OECD 471 |
|
Kauntungan unik saka Fraksi S9 Hati Hamster
Fraksi S9 ati hamster larang banget ing tes Ames amarga kemampuan sing unggul kanggo ngaktifake N-Nitrosamin tartamtu dibandhingake karo ati tikus S9. Iki nuduhake profil metabolisme sing luwih cedhak karo enzim ati manungsa, dadi luwih relevan kanggo penilaian risiko manungsa. Kajaba iku, ati hamster S9 ngemot enzim sitokrom P450 spesifik sing luwih dhuwur, sing penting kanggo bioaktivasi mutagen. Iki nyebabake sensitivitas sing luwih apik lan nyuda tingkat palsu-negatif, ngidini deteksi mutagen sing luwih apik sing bisa uga ora dideteksi mung karo ati tikus S9.
Kesimpulan
Nalika tes Ames standar tetep dadi alat dhasar kanggo netepake mutagenisitas, watesan kasebut mbutuhake perbaikan kanggo akurasi sing luwih apik. Tes Ames sing ditingkatake, utamane kanthi kalebu fraksi S9 ati hamster, kanthi signifikan ningkatake deteksi mutagen kompleks kaya N-Nitrosamines, nyepetake jurang antarane metabolisme bakteri lan mamalia. Kemajuan iki nyedhiyakake cara sing luwih dipercaya kanggo ngevaluasi potensi karsinogen manungsa lan ndhukung pengambilan keputusan regulasi sing luwih apik.
Kata Kunci: N-Nitrosamin, NDSRIs, OECD 471, Enhanced Ames test, Hamster liver S9, enzim Cytochrome P450, Tes Mutasi
Wektu kirim: 2025-03-12 09:22:09