Стандарттык Эймс тести
Ames тести химиялык кошулмаларда, анын ичинде N-Nitrosamines менен мутагендик потенциалды аныктоо үчүн кеңири колдонулган анализ. Токсикологиялык скринингдеги маанисине карабастан, стандарттуу Эймс тести бир нече чектөөлөргө ээ, өзгөчө татаал зат алмашууну талап кылган кошулмаларды баалоодо.
Стандарттык Эймс тестинин чектөөлөрү
Эймс тести мутагендик тестирлөөнүн негизи болуп кала берсе да, анын кээ бир чектөөлөрү бар:
- Чектелген метаболикалык активдештирүү:
Стандарттык Ames Test адатта R450 цитохромунун (CYP) белгилүү ферменттери жок келемиш боорун колдонот. Бул прокарциногендердин (мисалы, кээ бир N-нитрозаминдер) аз активдештирилишине же адамдык эмес коркунучтардын ашыкча активдешине алып келиши мүмкүн. Мисал: Rat S9 N-nitrosodiethylamine (NDEA) адамдын ферменттерине салыштырмалуу начар метаболизмге учурап, жалган негатив коркунучун жаратат.
- Чектелген Мутация спектрин аныктоо:
Стандарттык штаммдар (мисалы, TA98, TA100) спецификалык мутациянын түрлөрүн (кадрлардын жылыштары, базалык - жуп алмаштыруулары), жетишпеген кластогендер же эпигенетикалык канцерогендерди гана аныктайт.
- Ашыкча-Бактериялык системаларга таянуу:
Сыноодо Salmonella typhimurium колдонулгандыктан, ал сүт эмүүчүлөрдүн клеткаларында болгон ДНКны оңдоо механизмдерин эсепке албайт, кээ бир мутагендик эффекттерди жоготушу мүмкүн.
- Жалган оң жана терс жактары:
Кээ бир-мутагендик эмес кошулмалар бактериялык стресстик реакциялардан улам оң натыйжаларды бериши мүмкүн, ал эми татаал метаболизмди активдештирүүнү талап кылган кээ бир мутагендер байкалбай калышы мүмкүн.
Өркүндөтүлгөн Ames тести
EMAнын акыркы чыгарылышында Q&As Guidance стандарттык Ames тестинин шарттарында кээ бир N-nitrosamines (мисалы, NDMA) төмөн сезгичтигине байланыштуу, FDAнын Улуттук токсикологиялык изилдөө борбору (NCTR) тарабынан берилген Өркүндөтүлгөн Ames тестинин шарттары сунушталат деп айтылат. FDA Ames Test үчүн колдонулган стандарттык ыкмалар N-nitrosamines мутагендик потенциалын мүнөздөөгө жетишсиз болушу мүмкүн, жана кээ бир учурларда белгилүү мутагендик нитрозаминдер үчүн терс натыйжаларды алып келиши мүмкүн деген жыйынтыкка келген. Буга жооп кылып, FDAнын Улуттук токсикологиялык изилдөө борбору N-nitrosamine аралашмаларынын мутагендик потенциалын ишенимдүүраак баалоону камсыз кылуу үчүн арналган Өркүндөтүлгөн Ames тестин иштеп чыгуу үчүн ар кандай шарттарды сынап жатат.
төмөнкү Өркүндөтүлгөн Ames Test (EAT) шарттары FDA тарабынан камсыз кылынат
|
Сыноо штаммдары |
Салмонелла typhimurium TA98, TA100 кирет. TA1535, TA1537 жана Escherichia coli WP2 uvrA (pKM101) сыноо штаммы |
|
Сыноо ыкмасы жана изоляцияга чейинки убакыт |
Сунушталган алдын ала жылуулоо убактысы 30 мүнөт менен алдын ала жылуулоо жана жалпак төшөнчү эмес ыкмалар колдонулушу керек. |
|
S9 түрү жана концентрациясы |
Өркүндөтүлгөн Ames тести 30% келемиш боорунун S9 жана 30% камтыган менен жүргүзүлүшү керек.Hamster Liver S9. Чычкан жана хомяк десмосомдук супернатанттары (S9s) кемирүүчүлөрдүн боорлорунан даярдалышы керек.цитохром P450 ферменти-индукциялоочу заттар (мисалы, фенобарбитал менен β-нафтофлавондун кошулмасы). |
|
Терс (эритүүчү/кошумча) контролдоо |
Колдонулган эриткичтер Ames тестине ылайык келиши керекOECD 471көрсөтмөлөр. Жеткиликтүү эриткичтерге төмөнкүлөр кирет, бирок алар менен чектелбестен: (1) Суу; (2) Ацетонитрил, метанол жана диметил сульфоксид (DMSO) сыяктуу органикалык эриткичтер. Органикалык эриткичтер колдонулганда, алдын ала кармоочу аралашмадагы мүмкүн болгон эң аз көлөм колдонулушу керек жана колдонулган органикалык эриткичтин саны N-нитрозаминдердин метаболизмдик активдештирилишине тоскоол болбогондугун көрсөтүү керек. |
|
Позитивдүү башкаруу |
OECD 471 көрсөтмөлөрүнө ылайык, штамм-спецификалык оң көзөмөл бир эле учурда аткарылышы керек. S9 болгон учурда, мутагендик деп белгилүү болгон эки N-nitrosamines да оң башкаруу катары колдонулушу керек. Жеткиликтүү N-nitrosamine позитивдүү башкарууга төмөнкүлөр кирет: NDMA, 1-циклопентил-4-нитросопиперазин NDSRIs. |
|
Эймсти аныктоо боюнча бардык башка сунуштар OECD 471 көрсөтмөлөрүнө ылайык келиши керек |
|
Hamster Liver S9 фракциясынын уникалдуу артыкчылыгы
Hamster боор S9 фракциясы келемиш боор S9 салыштырмалуу кээ бир N-Nitrosamines активдештирүү үчүн жогорку жөндөмдүүлүгү менен Ames сыноодо өзгөчө баалуу болуп саналат. Ал адамдын боор ферменттерине жакыныраак метаболизм профилин бөлүшөт, бул адамдын тобокелдигин баалоо үчүн актуалдуураак кылат. Кошумчалай кетсек, хомяк боор S9 мутагендердин биоактивдешүүсү үчүн өтө маанилүү болгон өзгөчө цитохром P450 ферменттеринин жогорку деңгээлин камтыйт. Бул жакшыртылган сезгичтикке жана жалган-терс көрсөткүчтөрдүн төмөндөшүнө алып келет, бул бир гана келемиш боору S9 менен аныкталбай калышы мүмкүн болгон мутагендерди жакшыраак аныктоого мүмкүндүк берет.
Корутунду
Стандарттык Эймс тести мутагендикти баалоо үчүн негизги курал болуп кала бергени менен, анын чектөөлөрү жакшыраак тактык үчүн жакшыртууну талап кылат. Өркүндөтүлгөн Ames тести, айрыкча хомяк боорунун S9 фракциясын камтуу менен, N-Nitrosamines сыяктуу татаал мутагендерди аныктоону олуттуу түрдө күчөтүп, бактериялар менен сүт эмүүчүлөрдүн метаболизминин ортосундагы ажырымды кыскартат. Бул прогресс адамдын потенциалдуу канцерогендерин баалоо үчүн ишенимдүү ыкманы камсыз кылат жана жакшыраак регулятивдик чечимдерди кабыл алууну колдойт.
Ачкыч сөздөр: N-Nitrosamines, NDSRIs, OECD 471, Өркүндөтүлгөн Амес тести, Hamster боор S9, Cytochrome P450 ферменттери, Мутация тести
Билдирүү убактысы: 2025-03-12 09:22:09