ການທົດສອບມາດຕະຖານ Ames
ການທົດສອບ Ames ແມ່ນການທົດສອບທີ່ຖືກນໍາໃຊ້ຢ່າງກວ້າງຂວາງໃນການກວດສອບຄວາມເປັນໄປໄດ້ຂອງ mutagenic ໃນທາດປະສົມເຄມີ, ລວມທັງ N-Nitrosamines. ເຖິງວ່າຈະມີຄວາມສໍາຄັນຂອງມັນໃນການກວດສານພິດ, ການທົດສອບ Ames ມາດຕະຖານມີຂໍ້ຈໍາກັດຫຼາຍ, ໂດຍສະເພາະໃນເວລາທີ່ການປະເມີນທາດປະສົມທີ່ຮຽກຮ້ອງໃຫ້ມີການກະຕຸ້ນການເຜົາຜະຫລານທີ່ສະລັບສັບຊ້ອນ.
ຂໍ້ຈໍາກັດຂອງການທົດສອບ Ames ມາດຕະຖານ
ໃນຂະນະທີ່ການທົດສອບ Ames ຍັງຄົງເປັນພື້ນຖານໃນການທົດສອບການກາຍພັນ, ມັນມີຂໍ້ຈໍາກັດບາງຢ່າງ:
- ການກະຕຸ້ນການເຜົາຜະຫລານອາຫານທີ່ຈໍາກັດ:
ການທົດສອບມາດຕະຖານ Ames ໂດຍທົ່ວໄປແລ້ວຈະໃຊ້ຕັບຫນູ S9, ເຊິ່ງຂາດເອນໄຊ cytochrome P450 (CYP). ນີ້ສາມາດນໍາໄປສູ່ການກະຕຸ້ນຂອງ procarcinogens ຫນ້ອຍ (ເຊັ່ນ: ບາງ N-nitrosamines) ຫຼື overactivation ຂອງທີ່ບໍ່ແມ່ນອັນຕະລາຍຂອງມະນຸດ. ຕົວຢ່າງ: Rat S9 metabolizes N-nitrosodiethylamine (NDEA) ບໍ່ດີເມື່ອປຽບທຽບກັບ enzymes ຂອງມະນຸດ, ມີຄວາມສ່ຽງຕໍ່ຜົນລົບທີ່ບໍ່ຖືກຕ້ອງ.
- ການກວດຫາສະເປກຕາການກາຍພັນທີ່ຈຳກັດ:
ສາຍພັນມາດຕະຖານ (ເຊັ່ນ: TA98, TA100) ກວດພົບສະເພາະການກາຍພັນສະເພາະ (frameshifts, base-pair substitutions), clastogens ທີ່ຂາດຫາຍໄປ ຫຼືສານກໍ່ມະເຮັງ epigenetic.
- ເກີນ-ການເພິ່ງພາອາໄສລະບົບແບັກທີເລຍ:
ນັບຕັ້ງແຕ່ການທົດສອບໃຊ້ Salmonella typhimurium, ມັນບໍ່ໄດ້ບັນຊີສໍາລັບກົນໄກການສ້ອມແປງ DNA ທີ່ມີຢູ່ໃນຈຸລັງ mammalian, ອາດຈະຂາດບາງຜົນກະທົບ mutagenic.
- ບວກ ແລະ ທາງລົບທີ່ບໍ່ຖືກຕ້ອງ:
ບາງສານປະກອບທີ່ບໍ່ແມ່ນການ mutagenic ອາດຈະໃຫ້ຜົນໄດ້ຮັບໃນທາງບວກເນື່ອງຈາກການຕອບສະຫນອງຄວາມກົດດັນຂອງເຊື້ອແບັກທີເຣັຍ, ໃນຂະນະທີ່ mutagens ບາງອັນທີ່ຕ້ອງການການກະຕຸ້ນການເຜົາຜະຫລານທີ່ສະລັບສັບຊ້ອນອາດຈະບໍ່ສາມາດກວດພົບໄດ້.
ການທົດສອບການປັບປຸງ Ames
ການປ່ອຍຫລ້າສຸດຂອງ EMA Q&As Guidance ລະບຸວ່າເນື່ອງຈາກຄວາມອ່ອນໄຫວຕ່ໍາຂອງບາງ N-nitrosamines (ເຊັ່ນ: NDMA) ພາຍໃຕ້ເງື່ອນໄຂຂອງການທົດສອບ Ames ມາດຕະຖານ, ເງື່ອນໄຂຂອງການທົດສອບ Ames ທີ່ປັບປຸງໃຫ້ໂດຍ FDA's National Center for Toxicological Research (NCTR) ແມ່ນແນະນໍາ. FDA ໄດ້ສະຫຼຸບວ່າວິທີການມາດຕະຖານທີ່ໃຊ້ສໍາລັບການທົດສອບ Ames ອາດຈະບໍ່ພຽງພໍເພື່ອກໍານົດທ່າແຮງ mutagenic ຂອງ N-nitrosamines, ແລະໃນບາງກໍລະນີອາດຈະສ້າງຜົນໄດ້ຮັບທາງລົບສໍາລັບ nitrosamines mutagenic ທີ່ຮູ້ຈັກ. ໃນການຕອບໂຕ້, ສູນການຄົ້ນຄວ້າສານພິດແຫ່ງຊາດຂອງ FDA ໄດ້ທົດສອບເງື່ອນໄຂທີ່ແຕກຕ່າງກັນເພື່ອພັດທະນາການທົດສອບ Ames ທີ່ມີການປັບປຸງ, ເຊິ່ງມີຈຸດປະສົງເພື່ອໃຫ້ການປະເມີນທີ່ເຊື່ອຖືໄດ້ຫຼາຍຂຶ້ນກ່ຽວກັບທ່າແຮງ mutagenic ຂອງ N-nitrosamine impurities.
ເງື່ອນໄຂການທົດສອບການປັບປຸງ Ames (EAT) ຕໍ່ໄປນີ້ແມ່ນສະຫນອງໃຫ້ໂດຍ FDA
|
ທົດສອບສາຍພັນ |
ລວມມີ Salmonella typhimurium TA98, TA100. TA1535,TA1537 ແລະ Escherichia coli WP2 uvrA (pKM101) ເມື່ອຍທົດສອບ |
|
ວິທີການທົດສອບແລະກ່ອນ-ທີ່ໃຊ້ເວລາ insulation |
ຄວນໃຊ້ວິທີການສວມໃສ່ກ່ອນ - ແລະບໍ່ແມ່ນ - ຜ້າປູພື້ນ, ໂດຍມີເວລາແນະນຳກ່ອນ - insulation 30 ນາທີ. |
|
S9 ປະເພດແລະຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນ |
ການທົດສອບການປັບປຸງ Ames ຄວນໄດ້ຮັບການປະຕິບັດໃນການບັນຈຸ 30% ຕັບຫນູ S9 ແລະ 30%ຕັບ Hamster S9. ຫນູ ແລະ hamster desmosomal supernatants (S9s) ຄວນໄດ້ຮັບການກະກຽມຈາກຕັບຫນູທີ່ໄດ້ຮັບການປິ່ນປົວ.cytochrome P450 enzyme-ສານກະຕຸ້ນ (ເຊັ່ນ: ການປະສົມປະສານຂອງ phenobarbital ແລະ β-naphthoflavone). |
|
ການຄວບຄຸມທາງລົບ (ຕົວລະລາຍ/ສ່ວນເສີມ). |
ສານລະລາຍທີ່ໃຊ້ຄວນເຂົ້າກັນໄດ້ກັບການທົດສອບ Ames ອີງຕາມOECD 471ຂໍ້ແນະນຳ. ສານລະລາຍທີ່ມີຢູ່ປະກອບມີ, ແຕ່ບໍ່ຈໍາກັດພຽງແຕ່: (1) ນ້ໍາ; (2) ສານລະລາຍອິນຊີເຊັ່ນ acetonitrile, methanol, ແລະ dimethyl sulfoxide (DMSO). ເມື່ອໃຊ້ສານລະລາຍອິນຊີ, ປະລິມານຕໍ່າສຸດທີ່ເປັນໄປໄດ້ໃນສ່ວນປະສົມກ່ອນການຖືຄວນຖືກໃຊ້ ແລະມັນຄວນຈະສະແດງໃຫ້ເຫັນວ່າປະລິມານຂອງສານລະລາຍອິນຊີທີ່ໃຊ້ບໍ່ໄດ້ລົບກວນການກະຕຸ້ນການເຜົາຜານຂອງ N-nitrosamines. |
|
ການຄວບຄຸມທາງບວກ |
ອີງຕາມຄໍາແນະນໍາຂອງ OECD 471, ຄວາມເຄັ່ງຕຶງ-ການຄວບຄຸມທາງບວກສະເພາະຄວນຈະຖືກປະຕິບັດໃນເວລາດຽວກັນ. ໃນທີ່ປະທັບຂອງ S9, N-nitrosamines ສອງອັນທີ່ຮູ້ກັນວ່າເປັນ mutagenic ຄວນຖືກນໍາໃຊ້ເປັນການຄວບຄຸມໃນທາງບວກ. ການຄວບຄຸມທາງບວກ N-nitrosamine ທີ່ມີຢູ່ລວມມີ: NDMA, 1-cyclopentyl-4-nitrosopiperazine NDSRIs. |
|
ຄໍາແນະນໍາອື່ນໆທັງຫມົດກ່ຽວກັບການກໍານົດ Ames ຄວນປະຕິບັດຕາມຄໍາແນະນໍາ OECD 471 |
|
ຂໍ້ໄດ້ປຽບທີ່ເປັນເອກະລັກຂອງ Hamster Liver S9 Fraction
ສ່ວນຫນຶ່ງຂອງຕັບ Hamster S9 ແມ່ນມີຄຸນຄ່າໂດຍສະເພາະໃນການທົດສອບ Ames ເນື່ອງຈາກຄວາມສາມາດທີ່ດີກວ່າທີ່ຈະກະຕຸ້ນ N-Nitrosamines ບາງຢ່າງເມື່ອທຽບກັບຕັບຫນູ S9. ມັນແບ່ງປັນໂປຣໄຟລ໌ການເຜົາຜະຫລານທີ່ໃກ້ຊິດກັບເອນໄຊຕັບຂອງມະນຸດ, ເຮັດໃຫ້ມັນມີຄວາມກ່ຽວຂ້ອງຫຼາຍຂຶ້ນສໍາລັບການປະເມີນຄວາມສ່ຽງຂອງມະນຸດ. ນອກຈາກນັ້ນ, hamster ຕັບ S9 ມີລະດັບສູງຂອງ enzymes cytochrome P450, ເຊິ່ງເປັນສິ່ງສໍາຄັນສໍາລັບການກະຕຸ້ນ bioactivation ຂອງ mutagens. ອັນນີ້ເຮັດໃຫ້ຄວາມອ່ອນໄຫວທີ່ດີຂຶ້ນ ແລະຫຼຸດລົງອັດຕາການຜິດ-ທາງລົບ, ຊ່ວຍໃຫ້ການກວດຫາ mutagens ທີ່ດີກວ່າທີ່ອາດຈະບໍ່ສາມາດກວດພົບໄດ້ດ້ວຍຕັບໜູ S9 ຢ່າງດຽວ.
ສະຫຼຸບ
ໃນຂະນະທີ່ການທົດສອບມາດຕະຖານ Ames ຍັງຄົງເປັນເຄື່ອງມືພື້ນຖານສໍາລັບການປະເມີນການກາຍພັນ, ຂໍ້ຈໍາກັດຂອງມັນຈໍາເປັນຕ້ອງມີການປັບປຸງສໍາລັບຄວາມຖືກຕ້ອງທີ່ດີກວ່າ. ການທົດສອບ Ames ທີ່ມີການປັບປຸງ, ໂດຍສະເພາະກັບການລວມເອົາສ່ວນຫນຶ່ງຂອງຕັບ hamster S9, ຢ່າງຫຼວງຫຼາຍເສີມຂະຫຍາຍການກວດພົບຂອງ mutagens ສະລັບສັບຊ້ອນເຊັ່ນ N-Nitrosamines, ຮັດແຄບຊ່ອງຫວ່າງລະຫວ່າງ metabolism ຂອງເຊື້ອແບັກທີເລຍແລະ mammalian. ຄວາມກ້າວຫນ້ານີ້ສະຫນອງວິທີການທີ່ເຊື່ອຖືໄດ້ຫຼາຍສໍາລັບການປະເມີນສານກໍ່ມະເຮັງຂອງມະນຸດແລະສະຫນັບສະຫນູນການຕັດສິນໃຈລະບຽບການທີ່ດີກວ່າ.
ຄໍາສໍາຄັນ: N-Nitrosamines, NDSRIs, OECD 471, Enhanced Ames test, Hamster liver S9, Cytochrome P450 enzymes, ການທົດສອບການກາຍພັນ
ເວລາປະກາດ: 2025-03-12 09:22:09