സ്റ്റാൻഡേർഡ് എയിംസ് ടെസ്റ്റ്
N-Nitrosamines ഉൾപ്പെടെയുള്ള രാസ സംയുക്തങ്ങളിലെ മ്യൂട്ടജെനിക് സാധ്യതകൾ കണ്ടെത്തുന്നതിന് വ്യാപകമായി ഉപയോഗിക്കുന്ന ഒരു പരിശോധനയാണ് അമേസ് ടെസ്റ്റ്. ടോക്സിക്കോളജിക്കൽ സ്ക്രീനിംഗിൽ അതിൻ്റെ പ്രാധാന്യം ഉണ്ടായിരുന്നിട്ടും, സ്റ്റാൻഡേർഡ് എയിംസ് ടെസ്റ്റിന് നിരവധി പരിമിതികളുണ്ട്, പ്രത്യേകിച്ച് സങ്കീർണ്ണമായ മെറ്റബോളിക് ആക്റ്റിവേഷൻ ആവശ്യമായ സംയുക്തങ്ങൾ വിലയിരുത്തുമ്പോൾ.
സ്റ്റാൻഡേർഡ് എയിംസ് ടെസ്റ്റിൻ്റെ പരിമിതികൾ
മ്യൂട്ടജെനിസിറ്റി ടെസ്റ്റിംഗിൽ എയിംസ് ടെസ്റ്റ് ഒരു മൂലക്കല്ലായി തുടരുമ്പോൾ, അതിന് ചില പരിമിതികളുണ്ട്:
- പരിമിതമായ മെറ്റബോളിക് ആക്റ്റിവേഷൻ:
സ്റ്റാൻഡേർഡ് എയിംസ് ടെസ്റ്റ് സാധാരണയായി എലി കരൾ S9 ഉപയോഗിക്കുന്നു, അതിൽ ചില മനുഷ്യ-പ്രസക്തമായ സൈറ്റോക്രോം P450 (CYP) എൻസൈമുകൾ ഇല്ല. ഇത് പ്രോകാർസിനോജനുകളുടെ (ഉദാ. ചില എൻ-നൈട്രോസാമൈനുകൾ) പ്രവർത്തനരഹിതമാക്കുന്നതിനോ മനുഷ്യേതര അപകടങ്ങളെ അമിതമായി സജീവമാക്കുന്നതിനോ ഇടയാക്കും. ഉദാഹരണം: മനുഷ്യ എൻസൈമുകളുമായി താരതമ്യപ്പെടുത്തുമ്പോൾ റാറ്റ് എസ് 9 N-നൈട്രോസോഡിതൈലാമൈൻ (NDEA) മോശമായി മെറ്റബോളിസ് ചെയ്യുന്നു, തെറ്റായ നെഗറ്റീവ് അപകടസാധ്യതയുണ്ട്.
- പരിമിതമായ മ്യൂട്ടേഷൻ സ്പെക്ട്രം കണ്ടെത്തൽ:
സ്റ്റാൻഡേർഡ് സ്ട്രെയിനുകൾ (ഉദാ., TA98, TA100) നിർദ്ദിഷ്ട മ്യൂട്ടേഷൻ തരങ്ങൾ (ഫ്രെയിംഷിഫ്റ്റുകൾ, ബേസ്-ജോഡി പകരക്കാർ), നഷ്ടമായ ക്ലാസ്റ്റോജനുകൾ അല്ലെങ്കിൽ എപ്പിജെനെറ്റിക് കാർസിനോജനുകൾ എന്നിവ മാത്രമേ കണ്ടെത്തൂ.
- ഓവർ-ബാക്ടീരിയൽ സിസ്റ്റങ്ങളെ ആശ്രയിക്കുന്നു:
പരിശോധനയിൽ സാൽമൊണല്ല ടൈഫിമുറിയം ഉപയോഗിക്കുന്നതിനാൽ, സസ്തനികളിലെ കോശങ്ങളിലെ ഡിഎൻഎ റിപ്പയർ മെക്കാനിസങ്ങളെ ഇത് കണക്കിലെടുക്കുന്നില്ല, ചില മ്യൂട്ടജെനിക് ഇഫക്റ്റുകൾ നഷ്ടപ്പെടാൻ സാധ്യതയുണ്ട്.
- തെറ്റായ പോസിറ്റീവുകളും നെഗറ്റീവുകളും:
ചില-മ്യൂട്ടജെനിക് അല്ലാത്ത സംയുക്തങ്ങൾ ബാക്ടീരിയ സമ്മർദ്ദ പ്രതികരണങ്ങൾ കാരണം നല്ല ഫലങ്ങൾ നൽകിയേക്കാം, അതേസമയം സങ്കീർണ്ണമായ ഉപാപചയ സജീവമാക്കൽ ആവശ്യമായ ചില മ്യൂട്ടജൻസ് കണ്ടെത്താനാകാതെ പോയേക്കാം.
മെച്ചപ്പെടുത്തിയ എയിംസ് ടെസ്റ്റ്
EMA-യുടെ ഏറ്റവും പുതിയ റിലീസായ Q&As ഗൈഡൻസ് പറയുന്നത്, ചില N-nitrosamines-ൻ്റെ (ഉദാ. NDMA) സെൻസിറ്റിവിറ്റി കുറവായതിനാൽ, FDA-യുടെ നാഷണൽ സെൻ്റർ ഫോർ ടോക്സിക്കോളജിക്കൽ റിസർച്ച് (NCTR) നൽകുന്ന എൻഹാൻസ്ഡ് എയിംസ് ടെസ്റ്റിൻ്റെ വ്യവസ്ഥകൾ ശുപാർശ ചെയ്യപ്പെടുന്നു. എയിംസ് ടെസ്റ്റിന് ഉപയോഗിക്കുന്ന സ്റ്റാൻഡേർഡ് രീതികൾ N- നൈട്രോസാമൈനുകളുടെ മ്യൂട്ടജെനിക് സാധ്യതയെ ചിത്രീകരിക്കാൻ പര്യാപ്തമല്ലെന്നും ചില സന്ദർഭങ്ങളിൽ അറിയപ്പെടുന്ന മ്യൂട്ടജെനിക് നൈട്രോസാമൈനുകൾക്ക് നെഗറ്റീവ് ഫലങ്ങൾ നൽകാമെന്നും FDA നിഗമനം ചെയ്തു. പ്രതികരണമായി, എൻ-നൈട്രോസാമൈൻ മാലിന്യങ്ങളുടെ മ്യൂട്ടജെനിക് സാധ്യതയെക്കുറിച്ച് കൂടുതൽ വിശ്വസനീയമായ വിലയിരുത്തൽ നൽകാൻ ഉദ്ദേശിച്ചുള്ള എൻഹാൻസ്ഡ് എയിംസ് ടെസ്റ്റ് വികസിപ്പിക്കുന്നതിന് എഫ്ഡിഎയുടെ നാഷണൽ സെൻ്റർ ഫോർ ടോക്സിക്കോളജിക്കൽ റിസർച്ച് വ്യത്യസ്ത സാഹചര്യങ്ങൾ പരീക്ഷിച്ചുകൊണ്ടിരിക്കുകയാണ്.
ഇനിപ്പറയുന്ന എൻഹാൻസ്ഡ് എയിംസ് ടെസ്റ്റ് (EAT) വ്യവസ്ഥകൾ FDA നൽകുന്നു
|
ടെസ്റ്റ് സ്ട്രെയിനുകൾ |
സാൽമൊണല്ല ടൈഫിമുറിയം TA98, TA100 എന്നിവ ഉൾപ്പെടുന്നു. TA1535,TA1537, Escherichia coli WP2 uvrA (pKM101) ടെസ്റ്റ് സ്ട്രെയിൻ |
|
ടെസ്റ്റ് രീതിയും പ്രീ-ഇൻസുലേഷൻ സമയവും |
മുൻ-ഇൻസുലേഷനും അല്ലാത്ത-ഫ്ലാറ്റ്ബെഡ്ഡിംഗ് രീതികളും ഉപയോഗിക്കണം, ശുപാർശ ചെയ്യുന്ന പ്രീ-ഇൻസുലേഷൻ സമയം 30 മിനിറ്റ്. |
|
S9 തരവും ഏകാഗ്രതയും |
എൻഹാൻസ്ഡ് എയിംസ് ടെസ്റ്റ് 30% എലി കരൾ S9 ഉം 30% ഉം അടങ്ങിയിരിക്കണം.ഹാംസ്റ്റർ ലിവർ S9. എലി, ഹാംസ്റ്റർ ഡെസ്മോസോമൽ സൂപ്പർനാറ്റൻ്റുകൾ (S9s) എലി കരളിൽ നിന്ന് തയ്യാറാക്കണം.സൈറ്റോക്രോം പി 450 എൻസൈം-പ്രചോദിപ്പിക്കുന്ന പദാർത്ഥങ്ങൾ (ഉദാ. ഫിനോബാർബിറ്റലിൻ്റെയും β-നാഫ്തോഫ്ലാവോണിൻ്റെയും സംയോജനം). |
|
നെഗറ്റീവ് (സോൾവെൻ്റ്/എക്സിപിയൻ്റ്) നിയന്ത്രണം |
ഉപയോഗിക്കുന്ന ലായകങ്ങൾ അനുസരിച്ച് എയിംസ് ടെസ്റ്റുമായി പൊരുത്തപ്പെടണംOECD 471മാർഗ്ഗനിർദ്ദേശങ്ങൾ. ലഭ്യമായ ലായകങ്ങളിൽ ഉൾപ്പെടുന്നു, എന്നാൽ ഇവയിൽ മാത്രം പരിമിതപ്പെടുന്നില്ല: (1) വെള്ളം; (2) അസെറ്റോണിട്രൈൽ, മെഥനോൾ, ഡൈമെതൈൽ സൾഫോക്സൈഡ് (DMSO) തുടങ്ങിയ ജൈവ ലായകങ്ങൾ. ഓർഗാനിക് ലായകങ്ങൾ ഉപയോഗിക്കുമ്പോൾ, പ്രീ-ഹോൾഡിംഗ് മിശ്രിതത്തിൽ സാധ്യമായ ഏറ്റവും കുറഞ്ഞ അളവ് ഉപയോഗിക്കണം, കൂടാതെ ഉപയോഗിക്കുന്ന ജൈവ ലായകത്തിൻ്റെ അളവ് എൻ-നൈട്രോസാമൈനുകളുടെ ഉപാപചയ പ്രവർത്തനത്തെ തടസ്സപ്പെടുത്തുന്നില്ലെന്ന് തെളിയിക്കുകയും വേണം. |
|
പോസിറ്റീവ് നിയന്ത്രണം |
OECD 471 മാർഗ്ഗനിർദ്ദേശങ്ങൾ അനുസരിച്ച്, സ്ട്രെയിൻ-നിർദ്ദിഷ്ട പോസിറ്റീവ് നിയന്ത്രണങ്ങൾ ഒരേ സമയം നടത്തണം. S9 ൻ്റെ സാന്നിധ്യത്തിൽ, മ്യൂട്ടജെനിക് എന്ന് അറിയപ്പെടുന്ന രണ്ട് N- നൈട്രോസാമൈനുകളും പോസിറ്റീവ് കൺട്രോളുകളായി ഉപയോഗിക്കണം. ലഭ്യമായ N-nitrosamine പോസിറ്റീവ് നിയന്ത്രണങ്ങളിൽ ഇവ ഉൾപ്പെടുന്നു: NDMA, 1-cyclopentyl-4-nitrosopiperazine NDSRIs. |
|
എയിംസ് നിർണയത്തെക്കുറിച്ചുള്ള മറ്റെല്ലാ ശുപാർശകളും OECD 471 മാർഗ്ഗനിർദ്ദേശങ്ങൾ പാലിക്കേണ്ടതാണ് |
|
ഹാംസ്റ്റർ ലിവർ S9 ഫ്രാക്ഷൻ്റെ തനതായ പ്രയോജനം
എലി കരൾ S9 നെ അപേക്ഷിച്ച് ചില N-Nitrosamines സജീവമാക്കാനുള്ള ഉയർന്ന കഴിവ് കാരണം ഹാംസ്റ്റർ ലിവർ S9 അംശം അമേസ് പരിശോധനയിൽ വളരെ വിലപ്പെട്ടതാണ്. ഇത് മനുഷ്യൻ്റെ കരൾ എൻസൈമുകളുമായി കൂടുതൽ മെറ്റബോളിക് പ്രൊഫൈൽ പങ്കിടുന്നു, ഇത് മനുഷ്യൻ്റെ അപകടസാധ്യത വിലയിരുത്തുന്നതിന് കൂടുതൽ പ്രസക്തമാക്കുന്നു. കൂടാതെ, ഹാംസ്റ്റർ ലിവർ S9-ൽ ഉയർന്ന അളവിലുള്ള പ്രത്യേക സൈറ്റോക്രോം P450 എൻസൈമുകൾ അടങ്ങിയിരിക്കുന്നു, അവ മ്യൂട്ടജനുകളുടെ ബയോ ആക്റ്റിവേഷന് നിർണായകമാണ്. ഇത് മെച്ചപ്പെട്ട സെൻസിറ്റിവിറ്റിക്ക് കാരണമാവുകയും തെറ്റായ-നെഗറ്റീവ് നിരക്കുകൾ കുറയ്ക്കുകയും ചെയ്യുന്നു, ഇത് എലി കരൾ S9 കൊണ്ട് മാത്രം കണ്ടെത്താനാകാത്ത മ്യൂട്ടജനുകളെ നന്നായി കണ്ടെത്താൻ അനുവദിക്കുന്നു.
ഉപസംഹാരം
സ്റ്റാൻഡേർഡ് അമേസ് ടെസ്റ്റ് മ്യൂട്ടജെനിസിറ്റി വിലയിരുത്തുന്നതിനുള്ള ഒരു അടിസ്ഥാന ഉപകരണമായി തുടരുമ്പോൾ, അതിൻ്റെ പരിമിതികൾ മെച്ചപ്പെട്ട കൃത്യതയ്ക്കായി മെച്ചപ്പെടുത്തലുകൾ ആവശ്യമാണ്. മെച്ചപ്പെടുത്തിയ അമേസ് ടെസ്റ്റ്, പ്രത്യേകിച്ച് ഹാംസ്റ്റർ ലിവർ S9 ഫ്രാക്ഷൻ ഉൾപ്പെടുത്തിക്കൊണ്ട്, N-Nitrosamines പോലുള്ള സങ്കീർണ്ണമായ മ്യൂട്ടജൻ കണ്ടെത്തുന്നത് ഗണ്യമായി വർദ്ധിപ്പിക്കുന്നു, ഇത് ബാക്ടീരിയകളുടെയും സസ്തനികളുടെയും മെറ്റബോളിസം തമ്മിലുള്ള വിടവ് നികത്തുന്നു. ഈ മുന്നേറ്റം മനുഷ്യൻ്റെ കാൻസറിന് സാധ്യതയുള്ളവയെ വിലയിരുത്തുന്നതിന് കൂടുതൽ വിശ്വസനീയമായ രീതി പ്രദാനം ചെയ്യുകയും മികച്ച നിയന്ത്രണ തീരുമാനങ്ങൾ എടുക്കുകയും ചെയ്യുന്നു.
കീവേഡുകൾ: N-Nitrosamines, NDSRIs, OECD 471, എൻഹാൻസ്ഡ് അമേസ് ടെസ്റ്റ്, ഹാംസ്റ്റർ ലിവർ S9, സൈറ്റോക്രോം P450 എൻസൈമുകൾ, മ്യൂട്ടേഷൻ ടെസ്റ്റ്
പോസ്റ്റ് സമയം: 2025-03-12 09:22:09