Стандартны тэст Ames
Тэст AMES - гэта шырока выкарыстаны аналіз для выяўлення мутагеннага патэнцыялу ў хімічных злучэннях, у тым ліку N - нітразамінаў. Нягледзячы на яго значнасць у таксікалагічным скрынінгу, стандартны тэст AMES мае некалькі абмежаванняў, асабліва пры ацэнцы злучэнняў, якія патрабуюць складанай метабалічнай актывацыі.
Абмежаванні стандартнага тэсту Ames
У той час як тэст Ames застаецца краевугольным каменем у тэставанні мутагеннасці, ён мае пэўныя абмежаванні:
- Абмежаваная метабалічная актывацыя:
Стандартны тэст AMES звычайна выкарыстоўвае печань SAT S9, у якога няма пэўных чалавечых - адпаведных ферментаў цытахрому P450 (CYP). Гэта можа прывесці да недаактывацыі прокарциногенов (напрыклад, некаторых n - нітразамінаў) або празмернаактывацыі нестандартных небяспек чалавека. Прыклад: Пацук S9 дрэнна метабалізуе n - нітрасадыэтыламін (NDEA) у параўнанні з ферментамі чалавека, рызыкуючы ілжывымі негатывамі.
- Выяўленне абмежаванага мутацыі спектру:
Стандартныя штамы (напрыклад, TA98, TA100) выяўляюць толькі спецыфічныя тыпы мутацыі (фрамешыфры, падставы - Пары замены), адсутнічаюць кластогены або эпігенетычныя канцерогены.
- Над - залежанне ад бактэрыяльных сістэм:
Паколькі тэст выкарыстоўвае тыфімурый сальманелы, ён не ўлічвае механізмаў аднаўлення ДНК, якія прысутнічаюць у клетках млекакормячых, магчыма, адсутнічае нейкія мутагенныя эфекты.
- Ілжывыя пазітывы і негатывы:
Некаторыя не - мутагенныя злучэнні могуць даць станоўчыя вынікі з -за рэакцыі на бактэрыяльныя стрэсы, у той час як некаторыя мутагены, якія патрабуюць складанай метабалічнай актывацыі, могуць застацца незаўважанымі.
Палепшаны тэст Эйма
Апошні выпуск Q & у якасці кіраўніцтва EMA абвяшчае, што з -за нізкай адчувальнасці некаторых n - нітразамінаў (напрыклад, NDMA) ва ўмовах стандартнага тэсту AMES рэкамендуюцца ўмовы ўзмоцненага тэсту AMES, які прадастаўляецца Нацыянальным цэнтрам FDA па таксікалагічных даследаваннях (NCTR). FDA прыйшоў да высновы, што стандартныя метады, якія выкарыстоўваюцца для тэсту AMES, могуць быць недастатковымі для характарыстыкі мутагеннага патэнцыялу n - нітразамінаў, а ў некаторых выпадках могуць прынесці негатыўныя вынікі для вядомых мутагенных нітразамінаў. У адказ Нацыянальны цэнтр таксікалагічных даследаванняў FDA правярае розныя ўмовы для распрацоўкі пашыранага тэсту AMES, які прызначаны для забеспячэння больш надзейнай ацэнкі мутагеннага патэнцыялу n - прымешкі нітразаміна.
Наступныя ўдасканаленыя ўмовы тэсту Ames (EAT) забяспечваюцца FDA
|
Тэставыя штамы |
Уключае сальманелу Typhimurium Ta98, Ta100. TA1535, TA1537 і Escherichia coli WP2 UVRA (PKM101) тэставы штам |
|
Метад тэсту і папярэдні час ізаляцыі |
Папярэдне - Варта выкарыстоўваць ізаляцыю і не - метады плоскасці, з рэкамендаваным папярэдне - Час ізаляцыі 30 хвілін. |
|
Тып S9 і канцэнтрацыя |
Палепшаны тэст AMES павінен праводзіцца пры ўтрыманні 30% печані пацукоў S9 і 30%Хамяк печань S9. Супернатанты пацукоў і хамяка (S9S) павінны быць падрыхтаваны з печані грызуноў, якія атрымліваюць зФермент цытахрому Р450- выклікаючы рэчывы (напрыклад, спалучэнне фенабарбіталу і β - нафтофлавона). |
|
Адмоўны (растваральнік/напаўняльнік) кантроль |
Выкарыстаныя растваральнікі павінны быць сумяшчальнымі з тэстам Ames у адпаведнасці зOECD 471рэкамендацыі. Даступныя растваральнікі ўключаюць, але не абмяжоўваюцца імі: (1) вада; (2) Арганічныя растваральнікі, такія як ацетонітрыл, метанол і диметилсульфоксид (DMSO). Калі выкарыстоўваюцца арганічныя растваральнікі, варта выкарыстоўваць самы нізкі аб'ём у папярэдняй сумесі, і варта прадэманстраваць, што колькасць выкарыстоўванага арганічнага растваральніка не перашкаджае актывацыі метабалізму n - нітразамінаў. |
|
Станоўчы кантроль |
Згодна з кіруючымі прынцыпамі OECD 471, дэфармацыя - Спецыфічны станоўчы кантроль павінен ажыццяўляцца адначасова. У прысутнасці S9 два n - нітразаміны, якія, як вядома, мутагенныя, таксама павінны выкарыстоўвацца ў якасці станоўчага кантролю. Даступны n - Нітразамін станоўчы кантроль ўключае: NDMA, 1 - цыклопентыл - 4 - нітрасапіперазін ndsris。。 |
|
Усе іншыя рэкамендацыі па вызначэнні AMES павінны прытрымлівацца рэкамендацый АЭСР 471 |
|
Унікальная перавага хамяка печані S9
Фракцыя печані хамяка S9 асабліва каштоўная ў тэставанні Ames з -за яго цудоўнай здольнасці актываваць пэўныя n - нітразаміны ў параўнанні з печанню пацукоў S9. Ён падзяляе больш цесны метабалічны профіль для ферментаў печані чалавека, што робіць яго больш актуальным для ацэнкі рызыкі чалавека. Акрамя таго, печань хамяка S9 змяшчае больш высокі ўзровень спецыфічных ферментаў цытахрому Р450, якія маюць вырашальнае значэнне для біяактывацыі мутагенаў. Гэта прыводзіць да паляпшэння адчувальнасці і зніжэння ілжывых - негатыўных частак, што дазваляе лепш выяўленне мутагенаў, якія ў адваротным выпадку могуць застацца незаўважанымі толькі з печанню пацукоў S9.
Выснова
У той час як стандартны тэст Ames застаецца асноўным інструментам для ацэнкі мутагеннасці, яго абмежаванні патрабуюць паляпшэння для лепшай дакладнасці. Палепшаны тэст AMES, асабліва з уключэннем фракцыі хамякоў S9, значна ўзмацняе выяўленне складаных мутагенаў, такіх як n - нітразаміны, пераадольваючы разрыў паміж метабалізмам бактэрый і млекакормячых. Гэты прасоўванне забяспечвае больш надзейны метад ацэнкі патэнцыйных канцерогенаў чалавека і падтрымлівае лепшае нарматыўнае рашэнне - прыняцце.
Ключавыя словы: N - Нітразаміны, NDSRIS, OECD 471, Удасканалены тэст Эйма, хамяк печань S9, ферменты цытахрому Р450, мутацыйны тэст
Час паведамлення: 2025 - 03 - 12 09:22:09