Standard -Ames -Test
Der AMES -Test ist ein weit verbreiteter Assay zum Nachweis des mutagenen Potentials in chemischen Verbindungen, einschließlich N - Nitrosaminen. Trotz seiner Bedeutung im toxikologischen Screening weist der Standard -AMES -Test mehrere Einschränkungen auf, insbesondere bei der Bewertung von Verbindungen, die eine komplexe metabolische Aktivierung erfordern.
Einschränkungen des Standardames -Tests
Während der Ames -Test ein Eckpfeiler bei den Mutagenitätstests bleibt, hat er bestimmte Einschränkungen:
- Begrenzte metabolische Aktivierung:
Der Standard -AMES -Test verwendet typischerweise Rattenleber S9, wodurch bestimmte menschliche - relevante Cytochrom -P450 (CYP) -Enzyme fehlen. Dies kann zur Unterdrückung von Prokarcinogenen (z. B. einige n - Nitrosamine) oder eine Überaktivierung von nicht - menschlichen Gefahren führen. Beispiel: Ratte S9 metabolisiert Nr.
- Begrenzte Mutationsspektrumerkennung:
Standardstämme (z. B. Ta98, TA100) erkennen nur spezifische Mutationstypen (Frameshifts, Base - Paarsubstitutionen), fehlende Klastogen oder epigenetische Karzinogene.
- Über - Vertrauen in Bakteriensysteme:
Da der Test Salmonella typhimurium verwendet, berücksichtigt es keine DNA -Reparaturmechanismen, die in Säugetierzellen vorhanden sind, was möglicherweise einige mutagene Effekte fehlt.
- Fehlalarme und Negative:
Einige nicht - mutagene Verbindungen können aufgrund von Bakterienspannungsreaktionen positive Ergebnisse liefern, während einige Mutagene, die eine komplexe metabolische Aktivierung benötigen, unentdeckt bleiben können.
Der erweiterte Ames -Test
Die jüngste Freisetzung von Q & AS AS -Leitlinien von EMA besagt, dass aufgrund der geringen Empfindlichkeit einiger Nitrosamine (z. B. NDMA) unter den Bedingungen des Standard -AMES -Tests die Bedingungen des vom Nationalen Zentrums des FDA für toxikologischen Forschung (NCTR) bereitgestellten erweiterten AMES -Tests (NCTR) empfohlen werden. Die FDA hat zu dem Schluss gekommen, dass die für den AMES -Test verwendeten Standardmethoden möglicherweise nicht ausreichen, um das mutagenische Potential von Nitrosaminen zu charakterisieren, und in einigen Fällen können negative Ergebnisse für bekannte mutagene Nitrosamine erzielt werden. Als Reaktion darauf testete das Nationale Zentrum für toxikologische Forschung der FDA unterschiedliche Bedingungen, um den erweiterten AMES -Test zu entwickeln, der eine zuverlässigere Bewertung des mutagenen Potenzials von Nitrosaminverunreinigungen vorsieht.
Die folgenden Bedingungen für erweiterte Ames (EAT) werden von der FDA bereitgestellt
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Teststämme |
Beinhaltet Salmonella Typhimurium TA98, TA100. TA1535, TA1537 und Escherichia coli WP2 UVRA (PKM101) Teststamm |
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Testmethode und Vorab -Isolationszeit |
Vor - Isolierung und Nicht -Flachbettierungsmethoden sollten mit einer empfohlenen Isolationszeit von 30 Minuten verwendet werden. |
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S9 -Typ und Konzentration |
Der erweiterte AMES -Test sollte durchgeführt werden, um 30% Rattenleber S9 und 30% zu enthaltenHamster Leber S9. Desmosomale Überstände der Ratten und Hamster (S9s) sollten aus Nagetierlebern hergestellt werden, die mit behandelt werdenCytochrom -P450 -Enzym- induzierende Substanzen (z. B. eine Kombination von Phenobarbital und β - Naphthoflavon). |
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Negative (Lösungsmittel/Hilfsmittel) Kontrolle |
Die verwendeten Lösungsmittel sollten mit dem AMES -Test gemäß nachOECD 471Richtlinien. Zu den verfügbaren Lösungsmitteln gehören, aber nicht beschränkt auf: (1) Wasser; (2) organische Lösungsmittel wie Acetonitril, Methanol und Dimethylsulfoxid (DMSO). Wenn organische Lösungsmittel verwendet werden, sollte das niedrigstmögliche Volumen in der Mischung vor - Halten verwendet werden, und es sollte gezeigt werden, dass die Menge an verwendeten organischen Lösungsmitteln die metabolische Aktivierung von Nitrosaminen nicht beeinträchtigt. |
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Positive Kontrolle |
Gemäß den Richtlinien der OECD 471 sollten gleichzeitig spezifische positive Kontrollen durchgeführt werden. In Gegenwart von S9 sollten auch die beiden n - Nitrosamine, von denen bekannt ist, dass sie mutagenisch sind, auch als positive Kontrollen verwendet werden. Verfügbare n - Nitrosamin -Positivkontrollen umfassen: NDMA, 1 - Cyclopentyl - 4 - Nitrosopiperazin ndsris。 |
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Alle anderen Empfehlungen zur AMES -Bestimmung sollten den OECD 471 -Richtlinien folgen |
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Einzigartiger Vorteil der Hamster Leber S9 Fraktion
Die Hamster -Leber -S9 -Fraktion ist besonders wertvoll bei den AMES -Tests aufgrund seiner überlegenen Fähigkeit, bestimmte Nitrosamine im Vergleich zu Rattenleber S9 zu aktivieren. Es hat ein engeres Stoffwechselprofil für menschliche Leberenzyme, was es für die Bewertung des menschlichen Risikos relevanter macht. Zusätzlich enthält die Hamsterleber S9 höhere Spiegel spezifischer Cytochrom -P450 -Enzyme, die für die Bioaktivierung von Mutagenen von entscheidender Bedeutung sind. Dies führt zu einer verbesserten Empfindlichkeit und einer verringerten falschen - negativen Raten, was eine bessere Nachweis von Mutagenen ermöglicht, die ansonsten allein mit Rattenleber S9 unentdeckt bleiben können.
Abschluss
Während der Standard -AMES -Test ein grundlegendes Instrument zur Beurteilung der Mutagenität bleibt, erfordern seine Einschränkungen Verbesserungen für eine bessere Genauigkeit. Der verstärkte AMES -Test, insbesondere bei der Einbeziehung der Hamster -Leber -S9 -Fraktion, verbessert den Nachweis komplexer Mutagene wie Nitrosamine signifikant, wodurch die Lücke zwischen Bakterien und Säugetierstoffwechsel überbrückt. Dieser Fortschritt bietet eine zuverlässigere Methode zur Bewertung potenzieller karzinogener menschlicher Karzinogene und unterstützt eine bessere regulatorische Entscheidung.
Schlüsselwörter: N - Nitrosamine, NDSRIS, OECD 471, Enhanced AMES -Test, Hamster Leber S9, Cytochrom P450 -Enzyme, Mutationstest
Postzeit: 2025 - 03 - 12 09:22:09