Ενισχυμένη δοκιμή Ames

Τυπική δοκιμή Ames

Η δοκιμή Ames είναι μια ευρέως χρησιμοποιούμενη δοκιμασία για την ανίχνευση μεταλλαξιογόνου δυναμικού σε χημικές ενώσεις, συμπεριλαμβανομένων των Ν - νιτροζαμινών. Παρά τη σημασία της στον τοξικολογικό έλεγχο, η τυπική δοκιμή AMES έχει αρκετούς περιορισμούς, ιδιαίτερα όταν αξιολογεί τις ενώσεις που απαιτούν σύνθετη μεταβολική ενεργοποίηση.

Περιορισμοί του τυπικού τεστ AMES

Ενώ η δοκιμή AMES παραμένει ακρογωνιαίος λίθος σε δοκιμές μεταλλαξιογένεσης, έχει ορισμένους περιορισμούς:

• Περιορισμένη μεταβολική ενεργοποίηση:

Η τυποποιημένη δοκιμή AMES χρησιμοποιεί τυπικά το ήπαρ του αρουραίου S9, το οποίο στερείται ορισμένου ανθρώπινου - Σχετικά ενζύμων κυτοχρώματος P450 (CYP). Αυτό μπορεί να οδηγήσει σε υποβιβασμό των προκακινογόνων (π.χ. μερικές νιτροζαμίνες) ή υπερβολική ενεργοποίηση μη ανθρώπινων κινδύνων. Παράδειγμα: Ο αρουραίος S9 μεταβολίζει ανεπαρκώς τη νιτροζοδιαιθυλμίνη (NDEA) σε σύγκριση με τα ανθρώπινα ένζυμα, διακινδυνεύοντας ψευδώς αρνητικά.

• Περιορισμένη ανίχνευση φάσματος μετάλλαξης:

Τα πρότυπα στελέχη (π.χ., TA98, TA100) ανιχνεύουν μόνο ειδικούς τύπους μετάλλαξης (μετατοπίσεις πλαισίων, βάσης - υποκαταστάσεις ζεύγους), λείπουν κλαστογόνα ή επιγενετικά καρκινογόνα.

• Πάνω - Εξάρτηση από βακτηριακά συστήματα:

Δεδομένου ότι η δοκιμή χρησιμοποιεί Salmonella typhimurium, δεν αντιπροσωπεύει τους μηχανισμούς επισκευής DNA που υπάρχουν σε κύτταρα θηλαστικών, ενδεχομένως λείπουν μερικές μεταλλαξιογόνες επιδράσεις.

• Ψεύτικα θετικά και αρνητικά:

Ορισμένες μη μεταλλαξιογόνες ενώσεις μπορεί να αποδώσουν θετικά αποτελέσματα λόγω των αποκρίσεων βακτηριακού στρες, ενώ ορισμένα μεταλλαξιογόνα που απαιτούν σύνθετη μεταβολική ενεργοποίηση μπορεί να μην ανιχνευθούν.

Η ενισχυμένη δοκιμή Ames

Η τελευταία έκδοση του EMA -q & As καθοδήγησης αναφέρει ότι λόγω της χαμηλής ευαισθησίας ορισμένων νιτροζαμινών (π.χ. NDMA) υπό τις συνθήκες της τυπικής δοκιμής AMES, συνιστώνται οι συνθήκες της δοκιμής ενισχυμένων AMES που παρέχεται από το Εθνικό Κέντρο τοξικολογικής Έρευνας του FDA (NCTR). Το FDA κατέληξε στο συμπέρασμα ότι οι τυποποιημένες μέθοδοι που χρησιμοποιούνται για τη δοκιμή AMES ενδέχεται να μην επαρκούν για να χαρακτηρίσουν το μεταλλαξιογόνο δυναμικό των νιτροζαμινών και σε ορισμένες περιπτώσεις μπορεί να παράγουν αρνητικά αποτελέσματα για γνωστές μεταλλαξιογόνες νιτροζαμίνες. Σε απάντηση, το Εθνικό Κέντρο για την τοξικολογική έρευνα της FDA δοκιμάζει διαφορετικές συνθήκες για την ανάπτυξη της δοκιμής ενισχυμένης AMES, η οποία αποσκοπεί στην παροχή μιας πιο αξιόπιστης αξιολόγησης του μεταλλαξιογόνου δυναμικού των προσμείξεων της νιτροζαμίνης.

Οι ακόλουθες ενισχυμένες συνθήκες δοκιμής AMES (EAT) παρέχονται από το FDA

Μοναδικό πλεονέκτημα του κλάσματος του ήπατος χάμστερ S9

Το κλάσμα του ήπατος Hamster S9 είναι ιδιαίτερα πολύτιμο σε δοκιμές AMES λόγω της ανώτερης ικανότητάς του να ενεργοποιεί ορισμένες νιτροζαμίνες σε σύγκριση με το ήπαρ του αρουραίου S9. Μοιράζεται ένα στενότερο μεταβολικό προφίλ στα ανθρώπινα ηπατικά ένζυμα, καθιστώντας το πιο σημαντικό για την αξιολόγηση του ανθρώπινου κινδύνου. Επιπλέον, το ήπαρ Hamster S9 περιέχει υψηλότερα επίπεδα ειδικών ενζύμων κυτοχρώματος Ρ450, τα οποία είναι κρίσιμα για τη βιοενεργοποίηση των μεταλλαξιογόνων. Αυτό έχει ως αποτέλεσμα βελτιωμένη ευαισθησία και μειωμένη ψευδή τιμή, επιτρέποντας την καλύτερη ανίχνευση μεταλλαξιογόνων που διαφορετικά μπορεί να μην ανιχνευθούν μόνο με το ήπαρ του αρουραίου.

Σύναψη

Ενώ η τυποποιημένη δοκιμή AMES παραμένει ένα θεμελιώδες εργαλείο για την αξιολόγηση της μεταλλαξιογένεσης, οι περιορισμοί της απαιτούν βελτιώσεις για καλύτερη ακρίβεια. Η ενισχυμένη δοκιμή AMES, ιδιαίτερα με τη συμπερίληψη του κλάσματος του ήπατος Hamster S9, ενισχύει σημαντικά την ανίχνευση σύνθετων μεταλλαξιογόνων όπως οι νιτροζαμίνες, γεφυρώνοντας το χάσμα μεταξύ του βακτηριακού και του μεταβολισμού των θηλαστικών. Αυτή η πρόοδος παρέχει μια πιο αξιόπιστη μέθοδο για την αξιολόγηση πιθανών ανθρώπινων καρκινογόνων και υποστηρίζει καλύτερη ρυθμιστική απόφαση -

Λέξεις -κλειδιά: N - νιτροαμίνες, NDSRIS, OECD 471, Ενισχυμένη δοκιμή AMES, ήπατος χάμστερ S9, ένζυμα κυτοχρώματος Ρ450, δοκιμή μετάλλαξης