Norma Ames -Testo
La testo Ames estas vaste uzata provo por detekti mutagenan potencialon en kemiaj komponaĵoj, inkluzive de N - nitrosaminoj. Malgraŭ ĝia signifo en toksikologia kribrado, la norma Ames -testo havas plurajn limojn, precipe kiam taksas komponaĵojn postulantajn kompleksan metabolan aktivadon.
Limigoj de la Norma Ames -Testo
Dum la testo de Ames restas angulo en testado de mutageneco, ĝi havas iujn limojn:
- Limigita metabola aktivado:
La norma Ames -testo tipe uzas rat -hepaton S9, al kiu mankas iuj homaj - koncernaj citokromaj P450 (CYP) enzimoj. Ĉi tio povas konduki al nederactivigo de procarcinogenoj (t.e., iuj n - nitrosaminoj) aŭ troaktivigo de ne - homaj danĝeroj. Ekzemplo: Rato S9 Malbone metaboligas N - nitrosodietilaminon (NDEA) kompare kun homaj enzimoj, riskante falsajn negativojn.
- Limigita mutacio -spektra detekto:
Normaj streĉoj (t.e., TA98, TA100) detektas nur specifajn mutaciajn tipojn (FrameShifts, Base - Paro -anstataŭaĵoj), mankas klastogenoj aŭ epigenetikaj karcinogenoj.
- Super - dependado de bakteriaj sistemoj:
Ĉar la testo uzas Salmonella typhimurium, ĝi ne enkalkulas mekanismojn de riparo de DNA ĉeestantaj en mamulaj ĉeloj, eble mankas iuj mutagenaj efikoj.
- Falsaj pozitivoj kaj negativoj:
Iuj ne - mutagenaj komponaĵoj povas doni pozitivajn rezultojn pro bakteriaj streĉaj respondoj, dum iuj mutagenoj postulantaj kompleksan metabolan aktivadon povas esti nedetektitaj.
La plibonigita Ames -testo
La plej nova eldono de EMA Q & AS deklaras, ke pro la malalta sentiveco de iuj N - nitrosaminoj (t.e., NDMA) sub la kondiĉoj de la norma Ames -testo, la kondiĉoj de la plibonigita AMES -testo provizita de la Nacia Centro por Toksikologia Esploro (NCTR) de FDA. La FDA konkludis, ke la normaj metodoj uzataj por la testo Ames eble ne sufiĉas por karakterizi la mutagenan potencialon de n - nitrosaminoj, kaj en iuj kazoj povas produkti negativajn rezultojn por konataj mutagenaj nitrosaminoj. Responde, la Nacia Centro por Toksikologia Esploro de FDA testis malsamajn kondiĉojn por disvolvi la plibonigitan Ames -teston, kiu celas doni pli fidindan taksadon de la mutagena potencialo de N - nitrosaminaj malpuraĵoj.
La sekvaj plibonigitaj Ames -testoj (manĝi) kondiĉoj estas provizitaj de la FDA
|
Testaj streĉoj |
Inkluzivas Salmonella Typhimurium TA98, TA100. TA1535, TA1537 kaj Escherichia coli WP2 UVRA (PKM101) Test -streĉo |
|
Testmetodo kaj antaŭ - izola tempo |
Antaŭ - izolaj kaj ne - flataj metodoj devas esti uzataj, kun rekomendinda antaŭ - izola tempo de 30 minutoj. |
|
S9 -tipo kaj koncentriĝo |
La plibonigita AMES -testo devas esti farita en enhavo de 30% rato hepato S9 kaj 30%Hamstro Hepato S9. Rato kaj hamstro desmosomaj supernatantoj (S9s) devas esti preparitaj de ronĝuloj kun hepatoj traktataj kuncitokroma P450 -enzimo- Induktaj substancoj (t.e., kombinaĵo de fenobarbital kaj β - naftoflavono). |
|
Negativa (solventa/ekscipia) kontrolo |
La solviloj uzataj devas esti kongruaj kun la testo de Ames laŭOECD 471gvidlinioj. Disponeblaj solviloj inkluzivas, sed ne estas limigitaj al: (1) akvo; (2) Organikaj solviloj kiel acetonitrilo, metanolo kaj dimetil -sulfoksido (DMSO). Kiam organikaj solviloj estas uzataj, la plej malalta ebla volumo en la antaŭ -tenanta miksaĵo devas esti uzata kaj oni devas pruvi, ke la kvanto de organika solvilo uzata ne intermetas la metabolan aktivadon de N - nitrosaminoj. |
|
Pozitiva kontrolo |
Laŭ OECD 471 gvidlinioj, streĉo - specifaj pozitivaj kontroloj devas esti faritaj samtempe. En ĉeesto de S9, la du N - nitrosaminoj konataj esti mutagenaj ankaŭ devas esti uzataj kiel pozitivaj kontroloj. Havebla n - nitrosaminaj pozitivaj kontroloj inkluzivas: ndma, 1 - ciklopentil - 4 - nitrosopiperazino ndsris。 |
|
Ĉiuj aliaj rekomendoj pri Ames -determino devas sekvi OECD 471 -gvidliniojn |
|
Unika avantaĝo de hamster hepato S9 -frakcio
Hamster Hepato S9 -frakcio estas precipe valora en testado de Ames pro ĝia supera kapablo aktivigi certajn N - nitrosaminojn kompare kun rato hepato S9. Ĝi dividas pli proksiman metabolan profilon al homaj hepataj enzimoj, igante ĝin pli grava por homa riska takso. Aldone, hamster hepato S9 enhavas pli altajn nivelojn de specifaj citokromaj P450 -enzimoj, kiuj estas kernaj por la bioaktivigo de mutagens. Ĉi tio rezultigas plibonigitan sentivecon kaj reduktitajn falsajn - negativajn tarifojn, permesante pli bonan detekton de mutagenoj, kiuj alie povus esti nedetektitaj kun rato hepato S9 sole.
Konkludo
Dum la norma Ames -testo restas fundamenta ilo por taksi mutagenecon, ĝiaj limigoj bezonas plibonigojn por pli bona precizeco. La plibonigita testo Ames, precipe kun la inkludo de hamster -hepata S9 -frakcio, plibonigas signife la detekton de kompleksaj mutagens kiel N - nitrosaminoj, pliigante la interspacon inter bakteria kaj mamula metabolo. Ĉi tiu progresado provizas pli fidindan metodon por taksi eblajn homajn karcinogenojn kaj subtenas pli bonan reguligan decidon - farado.
Ŝlosilvortoj: N - Nitrosaminoj, Ndsris, OECD 471, Enhanced Ames Test, Hamster Hepat S9, Citokroma P450 -Enzimoj, Mutacio -Testo
Afiŝotempo: 2025 - 03 - 12 09:22:09