मानक एम्स परीक्षण
AMES परीक्षण रासायनिक यौगिकों में उत्परिवर्तन की क्षमता का पता लगाने के लिए एक व्यापक रूप से उपयोग किया जाने वाला परख है, जिसमें N - Nitrosamines शामिल हैं। विषाक्त स्क्रीनिंग में इसके महत्व के बावजूद, मानक एम्स परीक्षण में कई सीमाएं हैं, खासकर जब जटिल चयापचय सक्रियण की आवश्यकता वाले यौगिकों का मूल्यांकन करते हैं।
मानक एम्स परीक्षण की सीमाएँ
जबकि एम्स परीक्षण उत्परिवर्तन परीक्षण में एक आधारशिला है, इसकी कुछ सीमाएँ हैं:
- सीमित चयापचय सक्रियण:
मानक AMES परीक्षण आमतौर पर चूहे के लिवर S9 का उपयोग करता है, जिसमें कुछ मानव की कमी होती है। प्रासंगिक साइटोक्रोम P450 (CYP) एंजाइम। यह procarcinogens (जैसे, कुछ n - नाइट्रोसैमाइन) या गैर -मानव खतरों के ओवरएक्टिवेशन को कम कर सकता है। उदाहरण: RAT S9 ने मानव एंजाइमों की तुलना में nitrosodiethylamine (NDEA) को खराब तरीके से चयापचय किया, झूठे नकारात्मक को खतरे में डालते हुए।
- सीमित उत्परिवर्तन स्पेक्ट्रम का पता लगाना:
मानक उपभेदों (जैसे, TA98, TA100) केवल विशिष्ट उत्परिवर्तन प्रकारों (Frameshifts, Base - जोड़ी प्रतिस्थापन), लापता क्लैस्टोजेन या एपिजेनेटिक कार्सिनोजेन्स का पता लगाते हैं।
- ओवर - बैक्टीरियल सिस्टम पर निर्भरता:
चूंकि परीक्षण साल्मोनेला टाइफिम्यूरियम का उपयोग करता है, यह स्तनधारी कोशिकाओं में मौजूद डीएनए मरम्मत तंत्र के लिए जिम्मेदार नहीं है, संभवतः कुछ उत्परिवर्तन प्रभावों को याद कर रहा है।
- झूठी सकारात्मक और नकारात्मक:
कुछ गैर - उत्परिवर्तन यौगिकों से बैक्टीरिया तनाव प्रतिक्रियाओं के कारण सकारात्मक परिणाम मिल सकते हैं, जबकि जटिल चयापचय सक्रियण की आवश्यकता वाले कुछ उत्परिवर्तन को अनिर्धारित किया जा सकता है।
बढ़ाया एम्स परीक्षण
EMA की नवीनतम रिलीज़ Q & AS गाइडेंस में कहा गया है कि कुछ n - नाइट्रोसामाइन (जैसे, NDMA) की कम संवेदनशीलता के कारण मानक AMES परीक्षण की शर्तों के तहत, FDA के नेशनल सेंटर फॉर टॉक्सिकोलॉजिकल रिसर्च (NCTR) द्वारा प्रदान किए गए संवर्धित एम्स परीक्षण की शर्तों की सिफारिश की जाती है। एफडीए ने निष्कर्ष निकाला है कि एएमईएस परीक्षण के लिए उपयोग किए जाने वाले मानक तरीके एन के उत्परिवर्ती क्षमता को चिह्नित करने के लिए पर्याप्त नहीं हो सकते हैं। जवाब में, एफडीए के नेशनल सेंटर फॉर टॉक्सिकोलॉजिकल रिसर्च ने एन्हांस्ड एम्स टेस्ट को विकसित करने के लिए विभिन्न परिस्थितियों का परीक्षण किया है, जिसका उद्देश्य एन के उत्परिवर्ती क्षमता का अधिक विश्वसनीय मूल्यांकन प्रदान करना है। नाइट्रोसामाइन अशुद्धियों।
निम्नलिखित बढ़ाया एम्स परीक्षण (ईएटी) की स्थिति एफडीए द्वारा प्रदान की जाती है
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परीक्षण उपभेदों |
शामिल हैं साल्मोनेला टाइफिमुरियम TA98, TA100। TA1535, TA1537 और एस्चेरिचिया कोलाई WP2 UVRA (PKM101) टेस्ट स्ट्रेन |
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परीक्षण विधि और पूर्व - इन्सुलेशन समय |
प्री - इन्सुलेशन और नॉन - फ्लैटबेडिंग विधियों का उपयोग किया जाना चाहिए, एक अनुशंसित पूर्व के साथ - 30 मिनट का इन्सुलेशन समय। |
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S9 प्रकार और एकाग्रता |
संवर्धित एम्स परीक्षण में 30% चूहे लिवर S9 और 30% युक्त किया जाना चाहिएहम्सटर लिवर S9। चूहे और हम्सटर डेस्मोसोमल सुपरनैटेंट्स (S9) को कृंतक लिवर से इलाज किया जाना चाहिएसाइटोक्रोम पी 450 एंजाइम- उत्प्रेरण पदार्थ (जैसे, फेनोबार्बिटल और of - naphthoflavone का संयोजन)। |
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नकारात्मक (विलायक/excipient) नियंत्रण |
उपयोग किए गए सॉल्वैंट्स के अनुसार एम्स परीक्षण के साथ संगत होना चाहिएOECD 471दिशानिर्देश। उपलब्ध सॉल्वैंट्स में शामिल हैं, लेकिन यह सीमित नहीं हैं: (१) पानी; (2) कार्बनिक सॉल्वैंट्स जैसे कि एसिटोनिट्राइल, मेथनॉल और डाइमिथाइल सल्फोक्साइड (डीएमएसओ)। जब कार्बनिक सॉल्वैंट्स का उपयोग किया जाता है, तो पूर्व में सबसे कम संभव मात्रा। होल्डिंग मिश्रण का उपयोग किया जाना चाहिए और यह प्रदर्शित किया जाना चाहिए कि उपयोग किए गए कार्बनिक विलायक की मात्रा n के चयापचय सक्रियण के साथ हस्तक्षेप नहीं करती है। नाइट्रोसामाइन। |
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सकारात्मक नियंत्रण |
OECD 471 दिशानिर्देशों के अनुसार, तनाव - एक ही समय में विशिष्ट सकारात्मक नियंत्रण किया जाना चाहिए। S9 की उपस्थिति में, दो n - नाइट्रोसामाइन को म्यूटाजेनिक के रूप में जाना जाना चाहिए, इसका उपयोग सकारात्मक नियंत्रण के रूप में भी किया जाना चाहिए। उपलब्ध n - नाइट्रोसामाइन पॉजिटिव कंट्रोल में शामिल हैं: NDMA, 1 - Cyclopentyl - 4 - नाइट्रोसोपिपेरेज़िन ndsris。 |
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AMES निर्धारण पर अन्य सभी सिफारिशें OECD 471 दिशानिर्देशों का पालन करनी चाहिए |
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हम्सटर लिवर S9 अंश का अनूठा लाभ
हम्सटर लिवर S9 अंश चूहे के लिवर S9 की तुलना में कुछ n - नाइट्रोसामाइन को सक्रिय करने की बेहतर क्षमता के कारण AMES परीक्षण में विशेष रूप से मूल्यवान है। यह मानव लिवर एंजाइमों के लिए एक करीब चयापचय प्रोफ़ाइल साझा करता है, जिससे यह मानव जोखिम मूल्यांकन के लिए अधिक प्रासंगिक है। इसके अतिरिक्त, हम्सटर लिवर S9 में विशिष्ट साइटोक्रोम P450 एंजाइमों के उच्च स्तर होते हैं, जो उत्परिवर्तन के बायोएक्टिवेशन के लिए महत्वपूर्ण हैं। इससे बेहतर संवेदनशीलता और कम झूठी नकारात्मक दरों में सुधार होता है, जिससे उत्परिवर्तन का बेहतर पता लगाने की अनुमति मिलती है जो अन्यथा चूहे के लिवर एस 9 के साथ अनिर्धारित हो सकता है।
निष्कर्ष
जबकि मानक एम्स परीक्षण उत्परिवर्तन का आकलन करने के लिए एक मौलिक उपकरण बना हुआ है, इसकी सीमाओं को बेहतर सटीकता के लिए सुधार की आवश्यकता है। विशेष रूप से हम्सटर लिवर एस 9 अंश के समावेश के साथ बढ़ाया एम्स परीक्षण, एन। नाइट्रोसामाइन जैसे जटिल उत्परिवर्तन का पता लगाने में काफी वृद्धि करता है, बैक्टीरिया और स्तनधारी चयापचय के बीच की खाई को पाटता है। यह उन्नति संभावित मानव कार्सिनोजेन्स का मूल्यांकन करने के लिए एक अधिक विश्वसनीय विधि प्रदान करती है और बेहतर नियामक निर्णय का समर्थन करती है।
कीवर्ड: एन - नाइट्रोसामाइन्स, एनडीएसआरआईएस, ओईसीडी 471, एन्हांस्ड एम्स टेस्ट, हैम्स्टर लीवर एस 9, साइटोक्रोम पी 450 एंजाइम, म्यूटेशन टेस्ट
पोस्ट समय: 2025 - 03 - 12 09:22:09